气相色谱质谱-气相色谱法测定姜、白术挥发油及包合物中天然冬虫夏草的含量

气相色谱质谱-气相色谱法测定姜、白术挥发油及包合物中天然冬虫夏草的含量

柴油又称油油或芳香油，通常存在于植物的油腺和皮脂腺中，一些溶解在树脂中，并充满于植物体的空腔中。挥发油常由各种不同的天然化学物质组成,如萜类、芳香类和脂肪酸类等,具有抗菌、抗病毒、提高机体免疫功能等作用,主要存在于唇形科、芸香科、桃金娘科、姜科、菊科、樟科、伞科等植物中。干姜为姜科植物ZingiberofficinaleRosc.的根茎,气香,味辛辣,性热。能温中散寒,回阳通脉,燥湿消痰。其挥发油的主要成分为莰烯、β-水芹烯和桉叶素等。白术为菊科植物白术AtractylodesmacrocephalaKoidz.的干燥根茎,性温,味苦、甘。健脾益气,燥湿利水。其挥发油的主要成分为苍术酮等。笔者将附子理中丸研制成中药缓释片剂,该方中干姜和白术挥发油按前文报道的工艺提取,通过天然冰片的含量测定对挥发油的质量进行控制。1气质联用仪、差示量热仪器干姜和白术购自沈阳市天益堂药店,符合《中华人民共和国药典》2000年版的要求。GCMS-QP5050A气质联用仪、GC-17A气相色谱仪和DSC-60型差示量热扫描仪均为日本岛津生产;冰片(云南三木有限公司思茅香料厂),β-环糊精(天津市化学试剂公司)为实验所需,其它试剂均为分析纯。2方法和结果2.1从术中提取挥发油根据2000年版《中华人民共和国药典》(一部)中附子理中丸项下干姜和白术的处方量,称取白术1000g,干姜667g,适当粉碎后,混匀,加水淹没过,浸泡1h,倒入10000ml的长颈圆底烧瓶内,再加6倍量的水,装上冷凝装置,电热套加热进行回流提取挥发油,时间为沸腾后提取6h,最后得到淡黄色的干姜和白术挥发油。2.2峰面积归一化法计算的各个环节根据文献报道,混合挥发油经气相色谱-质谱(GC-MS)测试和图谱验证,选定峰面积大、清晰度高的13个峰,鉴定了峰面积归一化法计算出的相对百分含量居前的前6个成分,依次为β-水芹烯(β-phellandrene)、桉叶素(eucalyptol)、苍术酮(atractylon)、冰片(borneol)、姜烯(zingiberene)和牛儿醛(geranial),见图1、图2。冰片为第6号离子峰。2.3天然婆罗洲的含量在燃烧过程中2.3.1peg-20m因挥发油中含有天然冰片,所以采用气相色谱测定冰片的含量。具体条件如下:柱为10%PEG-20M,Φ2.6mm×2.0m;柱温150℃,气化室温度200℃,FID检测器温度200℃,载气为氮气,氮气压2.0kg/cm2,流速53ml/min。2.3.2标准曲线的制作精密称取冰片标准品0.25g,用无水乙醇溶于25ml的容量瓶中,再分别吸取0.5、1.5、2.5、3.5、5.0ml,用无水乙醇溶于5ml的容量瓶中,配制成浓度为1.0、3.0、5.0、7.0、10.0mg/ml的标准溶液,进样1μl,按气相色谱条件进行操作。以冰片的浓度(C)为横坐标,龙脑和异龙脑的总峰高(△H)为纵坐标进行线性回归,回归方程为:H=111463C+17306r=0.9997在1.0～10.0mg/ml的范围内,浓度与总峰高呈良好的线性关系。2.3.3挥发油含量的测定精密称取3批挥发油样品0.25g,用无水乙醇溶于5ml的容量瓶中,配制成浓度为50mg/ml,进样1μl,按气相色谱条件进行操作,将所得的总峰高带入标准曲线,由求得的浓度得出3批挥发油中天然冰片的含量分别为6.3%、11.6%和12.6%。冰片标准品与挥发油样品中天然冰片的色谱图见图3、图4。2.4油包装材料的制备2.4.1最佳工艺的确定根据文献,通过对饱和溶液法和研磨法的优化筛选,结合工业上的特点,选择最佳工艺为75%的乙醇混合β-CD((2∶1,V/W),滴入用无水乙醇稀释的挥发油溶液(1∶1,V/V),β-CD与挥发油配比为6∶1(W/V),边滴边研磨,滴完后,再研磨30min,40℃下干燥,即可。2.4.2回汁添加量为5.将挥发油β-CD包合物通过做DSC图谱与淀粉、β-CD及其混合物的DSC图谱比较,结果见图5。从图5可知,β-环糊精和淀粉的DSC图(a与e)不同,但它们二者与挥发油混合物的DSC图(c与d)在大于120℃处都有一个尖峰出现,说明此尖峰是挥发油自身的DSC图谱峰,当形成包合物后,尖峰消失(见b),确证β-环糊精与挥发油的包合物已经产生。2.4.3挥发油-cd包合物所含天然晶片的制备称取3份挥发油各0.18g,制得3批挥发油β-CD包合物后,采取水蒸气蒸馏方法获得的挥发油分别收集于3个10ml容量瓶内,无水乙醇定容,按上述气相条件操作,由标准曲线得挥发油β-CD包合物所含天然冰片分别为5.8、5.7、5.0mg。2.4.4挥发油-cd包合物含量的测定称取2.4.3项下的3份挥发油,按上述气相色谱条件测出其中所含的天然冰片的含量,则挥发油β-CD包合物所含天然冰片的含量于挥发油中所含天然冰片含量的比,即为β-CD包含物中挥发油的包合率,结果平均包合率为93.4%。3贮藏过程监控问题3.1因为天然冰片由龙脑和异龙脑组成,所以本文天然冰片的含量测定以龙脑与异龙脑的总和进行计算。从上述挥发油中的天然冰片所测的含量可知,干姜和白术挥发油中天然冰片含量较高,但每一批冰片所含的量差别较大,这主要与药材的采收时间、产地、贮存时间、保留水分的多少等有关。随着GAP标准的广泛执行和药材质量的进一步监控,这些问题最终将会得到很好的解决。3.2冰片的标准曲线采用龙脑与异龙脑的总高度作为纵坐标,是因为龙脑与异龙脑的峰面积值太大,所得的标准曲线误差会大些。而龙脑与异龙脑的总高度数值相对较小,其与药物浓度所得的标准曲线准确度则会相应提高。3.3挥发油的包合使得挥发油从液态转为固态,提高了挥