岛津20AT-LC-solution仪器操作

岛津20AT-solution仪器培训主讲人：宋战锋2010.11.2目录色谱学基础原理岛津20AT仪器系统LC-solution工作站的操作仪器的维护培训

色谱法：又称色层法和层析法，是一种物理化学分离和分析方法，这种分离方法是基于物质溶解度、蒸汽压、吸附能力、立体结构或离子交换等物理化学性质的微小差异，使其在流动相和固定相之间的分配系数的不同，而当两相做相对运动时，组分在两相间进行连续多次分配，从而达到彼此分离。1906年，俄过科学家茨维特用石油醚、碳酸钙分离叶绿素的试验被认为是色谱法最早的应用，色谱即由chroma(色彩)和graphos(图谱)构成，就是我们现在所用的chromatography(色谱)一词。色谱的工作原理液相色谱仪器系统溶剂传输系统高压泵样品引入系统进样器样品分离系统色谱柱信号检测系统检测器数据处理系统软件流动相的选择在正相色谱中，溶剂的强度随极性的增强而增加；在反相色谱中，溶剂的强度随极性的增强而减弱。正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。流动相的选择乙腈的毒性是甲醇的5倍，是乙醇的25倍。价格是甲醇的6~7倍。

100%甲醇的冲洗强度相当于89%的乙腈/水。截止波长乙腈190、甲醇205、正己烷210、乙醚220、四氢呋喃225、二氯甲烷245、氯仿245nm。缓冲盐流动相注意点(1)现配现用.低温下密封保存一般不超过3天。(2)确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液）(3)缓冲液必须过滤膜。(4)使用缓冲液期间，用注射器推纯水，清洗柱塞杆，延长泵密封垫寿命。(5)工作完毕后及时冲洗LC系统内的缓冲液。(6)梯度洗脱时,确认不同比列的缓冲液与有机溶剂能互溶。流动相的过滤和脱气流动相的过滤滤膜类型：

聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。

尼龙66滤膜：

适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。

再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂脱气的目的

1.防止由气泡的产生引起的故障1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形2.防止由溶解（在液体中的）气体量的变动引起的检测不稳定程度

1）示差折射率检测器*使折射率变化2）UV检测器（200nm以下）*溶解氧气有吸收3）荧光检测器*溶解氧气有消光作用脱气的方法1.

减压吸气脱气法*可以抑制配制流动相时产生的气泡*只是暂时的脱气法*不能解决因溶解气体造成的问题2.He清除法3.使用氟树脂膜的减压脱气法4.超声波脱气法He清除法

调压阀排气阀往送液泵流动相过滤器使用氟树脂膜的减压脱气法氟树脂膜真空室往送液泵真空泵控制器流动相液相系统流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器进样器检测器洗脱液梯度洗脱装置高压梯度洗脱低压梯度洗脱1-四通；2-混合器泵控制器；

3-高压输液泵；A,B,C-电磁比例阀，a,b,c-溶剂瓶1，2-泵；3，4-泵控制器；

5-梯度程序控制器；6-混合器泵单元LC-20AT泵：串联式往复泵LC-20AD泵：并联式往复泵单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头流动相单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头进样系统手动进样器自动进样器手动进样器的原理图

装填状态进样状态六通阀进样方式：部分装液法：进样量应不大于定量环体积的50%（最多75％），并要求每次进样体积准确、相同。完全装液法：进样量应不小于定量环体积的5~10倍（最少3倍），这样才能完全置换定量环内的流动相，消除管壁效应，确保进样的准确度及重复性。注意事项：①样品溶液进样前必须用0.45µm滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。③为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应阀清洗接头和注射器冲洗进样阀，防止交叉污染。自动进样器注意事项：样品瓶中应有超过瓶高1/3的样品量样品瓶中样品不要装太满，应留有一定的空气。使用与仪器配套的样品瓶。色谱柱色谱柱的分类：色谱柱按用途可分为分析型和制备型尺寸规格：①常规分析柱（常量柱），内径2~5mm（常用4.6mm，国内有4mm和5mm），柱长10~30cm；②窄径柱（narrowbore，又称细管径柱、半微柱semi-microcolumn），内径1~2mm，柱长10~20cm；③毛细管柱（又称微柱microcolumn），内径0.2~0.5mm④半制备柱，内径＞5mm；⑤实验室制备柱，内径20~40mm，柱长10~30cm；C18硅胶填料结构高效液相色谱检测器UV荧光示差折光蒸发光散射信号吸光度荧光强度折光率散射光强流速影响无无无无温度影响小小大小检测限(g/ml)10-1010-1310-710-9梯度洗脱适宜适宜不宜适宜细管径柱难难难适宜样品破坏无无无无通用型否否是是荧光检测器使用注意事项电化学检测器L-ECD-6A检测池构造作用电极：玻璃状碳制品比较电极：Ag/AgCL辅助电极：不锈钢原理：如测定儿茶酚胺：作用电极加足够的电位，被测物质在作用电极表面发生电子转交换反应，此时流动的电子（电流）通过引线22-A流到L-ECD-6A的电流测定放大器上呗测定出来。流动相：含有无极电介质的水溶液或这种溶液和有机溶剂等分混合溶液LC-solution软件系统日常维护材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞现象：管路中不断有气泡生成措施：1.用5％～20％的稀硝酸溶液，超声波清洗，再用蒸馏水清洗2.堵塞严重时,分别按下面的顺序超声波清洗:水→异丙醇→水→5％～20％的稀硝酸溶液→水注意点：吸滤头