苦土豆总生物碱注射用冻干粉针的处方工艺研究

苦土豆总生物碱注射用冻干粉针的处方工艺研究

苦豆是人们经常使用的药物。它广泛分布于河北、河南、山西等地。具有清热解毒、抗菌消炎的功效。目前学者对苦豆子总生物碱的研究较多,包括苦参碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱等,发现苦豆子总生物碱具有抗炎、抗菌、免疫、抗肿瘤等作用。本实验拟制备苦豆子总生物碱注射用冻干粉针,并考察其对小鼠肝癌移植性肿瘤的抑制作用。1上海宁光电技术有限公司DLG-6型真空冷冻干燥机(上海市离心机械研究所有限公司),JJ-200型精密电子天平(美国双杰兄弟有限公司),PHB-8型笔式pH计(上海康宁电光技术有限公司)。苦豆子总生物碱提取物(盐池县都顺生物化工有限公司,质量分数95%,批号01210054),氧化苦参碱对照品(中国食品药品检定研究院,批号0780-200004),生理盐水(石家庄四药有限公司),小鼠肝癌H22腹水瘤瘤株(中国中医科学院中药研究所肿瘤组提供),一水葡萄糖、D-甘露醇、乳糖、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)均购自北京凤礼精求商贸有限责任公司,水为自制注射用水,其他试剂均为分析纯。2方法和结果2.1原液方、水葡萄糖、氯化钠的反应及结果以冻干针剂的外观、色泽和复溶性为考察指标,选取甘露醇、一水葡萄糖、氯化钠、乳糖、HP-β-CD为充填剂,分别考察不同辅料不同加入量(40,60,80,100,120g·L-1)对冻干成型的效果,共26个处方(1个处方为冻干原液,其他25个为加辅料处方),以确定充填剂的种类和用量。结果发现原液方、一水葡萄糖的5个配方、乳糖的5个配方及氯化钠2个低质量浓度配方均在冻干过程出现发泡、萎缩现象;氯化钠3个高质量浓度配方和HP-β-CD的3个配方(40,60,120g·L-1)成型较差;HP-β-CD的另外2个配方成型一般,且冻干样品颜色不均一、且有裂纹;低质量浓度甘露醇的2个配方成型一般,甘露醇(80,100g·L-1)的2个配方成型较好、外观光洁、颜色均一、产品饱满呈团块状,120g·L-1甘露醇冻干产品有花斑,颜色不均一。2.2总原则质量浓度对冻干效果的影响配制苦豆子总生物碱质量浓度分别为25,50,80,100g·L-1的冻干前药液,加入不同质量浓度的甘露醇作为充填剂,进行冻干,观察成品性状,见表1。结果显示药液中总生物碱质量浓度为25g·L-1时冻干效果最好;甘露醇质量浓度为80,100g·L-1时,冻干液的体积小,厚度适宜,有利于冷冻干燥过程的进行,且冻干样品在外观、水溶性及澄明度等方面最好,综合考虑,选择甘露醇质量浓度80g·L-1。2.3冻干质量的测定取苦豆子总生物碱原液(pH9.5),用磷酸调pH5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0,分别取不同pH液体及原液,加入适量甘露醇进行冻干,考察冻干质量的变化情况。同时以氧化苦参碱为对照品,供试品及对照品均用适量甲醇超声溶解,采用酸性染料比色法,精密吸取对照品溶液及供试品溶液20μL,于80℃水浴蒸干,精密移取pH7.6的溴麝香草酚蓝缓冲溶液4mL,三氯甲烷6mL,振摇2min,加至分液漏斗中,放置2h,取下层,于420nm处比色,外标两点法测定,以氧化苦参碱计算总生物碱含量,结果见表2,冻干前后pH无明显变化,苦豆子总生物碱含量无显著性差异,溶液颜色随pH的增加而加深,故选择与人体血液相近的pH6.5~7.5为优选pH。2.4临界温度的影响冷冻干燥时,在冻结与升华过程中,制品的温度超过了最低共熔点,则部分溶质或全部溶质将处于液相中,冰晶体的升华被液体浓缩蒸发所取代,干燥后制品将发生萎缩,溶解速度亦降低,因此最低共熔点是获得最佳冻干效果的临界温度。按最佳处方配制溶液,对苦豆子总生物碱进行最低共熔点的测定,结果见图1,说明处方溶液的共熔点为-18℃。2.5添加不同密度微生物滤膜将苦豆子总生物碱中间体制备成总生物碱质量浓度为25g·L-1的溶液,加入适量甘露醇(80g·L-1),搅拌使溶解,过0.2μm微孔滤膜后分装于西林瓶中,置-45℃预冻8h,在一定真空度下以10℃·h-1升温至-18℃,维持8h,以15℃·h-1升温至25℃,保温4h出箱,加塞压盖,即得。冻干曲线见图2。2.6-4-甲基苯基-4-甲基-4-甲基苯磺酸酯的合成综上所述,苦豆子总生物碱注射用冻干粉针的最终工艺确定为:取苦豆子总生物碱中间体25g,加注射用水适量(约全量的80%)使溶解,加入甘露醇80g,搅拌使溶解,用1mol·L-1磷酸调节pH至7.2~7.5,添加注射用水至1L,过0.2μm微孔滤膜后分装于西林瓶中,每瓶2mL,置-45℃预冻8h,然后在一定真空度下以10℃·h-1升温至-18℃,维持8h,再以15℃·h-1升温至25℃,保温4h出箱,加塞压盖,即得。2.7苦充液温度对质量稳定性的影响按2.6项下方法制备3批冻干产品,批号分别为1201,1203,1205,在(40±2)℃、相对湿度(75±5)%条件下进行6个月的加速稳定性试验,以性状、复溶性及总生物碱含量为主要考察指标,经过6个月加速试验检测,苦豆子总生物碱注射用冻干粉针各项检测指标与“0”月比较,均未见明显变化,表明该制剂在(40±2)℃、相对湿度(75±5)%条件下质量稳定,可以预测该制剂在室温条件下2年内质量稳定。2.8肿瘤抑瘤作用的研究2.8.1给药剂量3不同充填剂对冻干过程的影响原苦豆子注射液为医院院内制剂,主治慢性宫颈炎及宫颈糜烂等各类妇科疾病。该注射液经药效学试验和临床试验反复验证,具有显著的抗菌消炎作用。由于药物的化学降解多发生在溶液环境中,冻干粉针剂较水针剂质量更稳定,提高了药物的稳定性,更利于制品的贮运。冷冻干燥法制备粉针,影响因素较多,且冻干后易吸湿,成型困难。冷冻干燥过程中,若直接以药液进行冻干,由于成品疏松、比表面积大,极易吸湿,不能成型,故需加入充填剂,使之能形成团块结构,但充填剂须具备纯度高、无毒、无抗原性、引湿性小、干燥后复溶性好等优点。不同充填剂种类及用量对所得冻干产品的性状、成型性有很大影响,甘露醇较其他充填剂共熔点高,用量少,成品饱满不皱缩,色泽均一,且多次重复冻干后所得结果稳定。冷冻干燥过程中,除了要控制药液质量浓度、充填剂种类和用量外,各阶段温度、时间的控制很关键。冷冻干燥包括预冻、升华干燥和解析干燥3个过程。常采用冻干曲线表示冻干过程中产品温度、压力随时间的变化关系,并由冻干曲线确定预冻速率、升华速率和干燥时间等主要参数,冻干曲线因冻干设备不同会有一定差异,故未对冻干过程做过多研究,仅测定了样品的共熔点约-(18±2)℃。苦豆子总生物碱注射用冻干粉设120,60,30mg·kg-1共3个剂量组,阳性对照药环磷酰胺剂量为25mg·kg-1。2.8.2苦东南角生物基化学成分对苦生物注射用冻干粉后含铜的胞小鼠右腋皮下无菌接种小鼠肝癌H22腹水瘤瘤株(每只鼠约含106个瘤细胞),接种后次日按体重均匀分组,模型对照组为生理盐水0.01mL·g-1,阳性对照组为环磷酰胺25mg·kg-1,高、中、低剂量组分别为苦豆子总生物碱注射用冻干粉120,60,30mg·kg-1。2.8.3动物平均瘤重及抑瘤率采用腹腔注射给药,苦豆子总生物碱注射用冻干粉每日1次,