重组DNA技术的基本工具 高二下期生物人教版选择性必修3

第三章基因工程第1节

重组DNA技术的基本工具人教版·选择性必修3（第三课时）三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”探究

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实践：DNA的粗提取与鉴定1.实验原理提取DNA的基本思路（DNA的粗提取）：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。a、DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精b、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/LNaCl溶液提取提取鉴定c、在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。0DNA溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L在2mol/L的NaCl溶液中溶解度最高，在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”探究

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实践：DNA的粗提取与鉴定2.材料用具①选材：新鲜洋葱或香蕉、菠菜、菜花、猪肝等。②试剂：染色体数目多，细胞分裂旺盛，DNA含量较高。SDS（十二烷基磺酸钠）：EDTA（乙二胺四乙酸）：使DNA保持稳定状态。能有效的破坏细胞膜的磷脂和膜蛋白。是一种DNA酶的抑制剂，可防止细胞破碎后DNA酶降解DNA;Tris-HCl的缓冲体系（PH=8.0）：研磨液体积分数为95%的酒精析出DNA2mol/L的NaCl溶液溶解DNA二苯胺试剂鉴定DNA，要现配现用NaCl：DNA与蛋白质分离。三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”探究

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实践：DNA的粗提取与鉴定3.方法步骤研磨1称取约30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨；提取上清液2在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。或将洋葱研磨液倒入塑料离心管中离心，在1500r/min的转速下离心5min,再取上清液放入烧杯中。①ＤＮＡ的提取：研磨不充分，会使DNA分子不能从细胞核中释放出来，从而影响提取的DNA含量不能用滤纸代替纱布，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。上清液可能含有DNA、RNA以及蛋白质、脂质、糖类等。三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”探究

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实践：DNA的粗提取与鉴定3.方法步骤①ＤＮＡ的提取：加酒精析出3在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液（体积分数为95%），静置2～3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；或者将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。ａ、抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；ｂ、低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少断裂。ｃ、抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。避免破坏DNA搅拌时动作要轻缓的原因三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”探究

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实践：DNA的粗提取与鉴定3.方法步骤②ＤＮＡ的鉴定：溶解ＤＮＡ4鉴定ＤＮＡ5取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。空白对照组：

在等体积的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，将试管置于同等沸水浴中加热5min。对照组实验组水浴加热三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”探究

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实践：DNA的粗提取与鉴定４.结果分析与评价试管编号A（对照组）B（实验组）步骤12mol/L的NaC1溶液5mL步骤2不进行任何处理步骤3步骤4沸水浴加热5min实验现象溶液不变蓝色实验结论加丝状物或沉淀物加4mL的二苯胺试剂溶液逐渐变蓝DNA在沸水浴的情况下遇二苯胺试剂会被染成蓝色【请同学们补充完整以下实验步骤】三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”探究

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实践：DNA的粗提取与鉴定思考·讨论：1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？

观察提取的DNA的颜色，如果不是白色状物，说明DNA中的杂质较多。二苯胺试剂鉴定呈现蓝色，说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？本实验出提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。3.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同分析产生差异的原因。

从多种方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺试剂显色的深浅等，看看哪种实验材料，哪种提取方法的效果更好。三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”探究

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实践：DNA的粗提取与鉴定本试验只是对DNA进行了粗提取，请查阅资料，了解实验室提取纯度较高的DNA的一种方法，并与本实验中所使用的方法进行比较，总结两种方法的异同。

实验室提取纯度较高的DNA的方法有不少。例如，可以先添加质量分数为25%的SDS溶液，使蛋白质变性后与DNA分开；随后，加入氯仿——异丙醇混合液（体积比为24:1），通过离心将蛋白质及其它杂质除去，取清液；可重复上述操作几次，直至上清液变成透明的粘稠液体。此外，由于苯酚可以迅速使蛋白质变性，抑制核酸酶的活性，因此还可以先用苯酚处理，然后离心分层，这时DNA溶于上层水相，蛋白质变性后存在于酚层中，用吸管、微量移液器等实验用具就可以将二者分开。５.进一步探究（3）DNA能与二苯胺试剂在常温下反应生成蓝色沉淀。(

)（2）研磨之后，通过过滤或离心，DNA会保留在沉淀物中。()三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”探究

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实践：DNA的粗提取