药用油脂类辅料的质量标准控制要点

油脂类辅料的质量标准控制要点上海市食品药品检验所生化药品生物制品室陈钢2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL2油脂类辅料的质量标准控制要点一、如何制订油脂类辅料质量标准二、中国药典2010版对油脂类产品的质量控制要求三、国外药典对油脂类产品的质量控制要求四、其他质量控制要求2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL3如何制订油脂类辅料质量标准在油脂类辅料的质量标准研究过程中如何寻找切入点？应采用什么方法？要达到什么目的？标准中要订多少项目才算够？2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL4油脂类辅料的质量标准研究原则

——总则辅料背景的了解：包括理化性质、用途、不良反应、生产工艺等；辅料质量的状况：对现有的国内外标准、药典标准进行收集、比对；分析手段的掌握：对先进分析技术的理解和掌握；多快好省：检测样品多、检测速度快、检测质量好、检测成本省。（QuEChERS）5（1）单纯脂质是由脂肪酸和甘油形成的酯（也称三酰甘油），如大豆油，以及由长链脂肪酸和长链醇或固醇组成的酯，如蜡。1、油脂的分类（2）复合脂质除含脂肪酸和醇外，尚有其他非脂分子的成分，如磷脂（非脂成分为磷酸和含氮碱）及糖脂（非脂成分是糖）。（3）衍生脂质由单纯脂质和复合脂质衍生而来或与之关系密切，如固醇类（甾类）和萜等。磷脂酰乙醇胺以环戊烷多氢菲为基本结构，并含有醇基。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL62、脂肪酸的命名和种类脂肪酸是由一条长的烃链和一个末端羧基组成的羧酸。由于脂质中脂肪酸是最主要的成分之一，对其深入了解有助于脂质的质量标准研究。（1）命名

脂肪酸的常用简写方式，以亚油酸——C18:2（c9,c12）为例。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL7（2）种类

脂肪酸的一条长的烃链不含双键（和三键）的为饱和脂肪酸，含一个或多个双键的为不饱和脂肪酸。只含单个双键的脂肪酸称为单不饱和脂肪酸；含两个或两个以上双键的称为多不饱和脂肪酸。不饱和脂肪酸中含一个或多个非共轭的反式双键的称为反式脂肪酸。不同脂肪酸之间的主要区别在于烃链的长度（碳原子数目）、双键数目和位置。3、油脂的生产工艺2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL8油脂类辅料的质量标准控制要点一、如何制订油脂类辅料质量标准二、中国药典2010版对油脂类产品的质量控制要求三、国外药典对油脂类产品的质量控制要求四、其他质量控制要求2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL9脂质的物理测定（1）相对密度物质的密度与标准物质的密度之比，称之为相对密度。大部分情况下，标准物质是水。天然油脂的相对密度均小于1，除极少数如肉豆蔻油的相对密度高达0.996外，一般为0.91~0.94。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL10脂质的物理测定（2）折光率折光率是有机化合物最重要的物理常数之一，它能精确而方便地测定出来，作为液体物质纯度的标准，它比沸点更为可靠。利用折光率，可鉴定未知化合物。如果一个化合物是纯的，那么就可以根据所测得的折光率排除考虑中的其它化合物，而识别出这个未知物来。另外，折光率也用于确定液体混合物的组成。这也是液体脂质需要测定折光率的原因之一。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL11脂质的物理测定（3）熔点熔点是物质的一个物理性质，即在一定压力下，纯物质的固态和液态呈平衡时的温度。物质的熔点并不是固定不变的，有两个因素对熔点影响很大。一是压强，另一个就是物质中的杂质，我们平时所说的物质的熔点，通常是指纯净的物质。天然油脂由于都是多种三酰甘油的混合物，因此没有明确的熔点，只有一个大概范围。三酰甘油的熔点与其脂肪酸的组成有关，一般随组分中不饱和脂肪酸（双键数目）和低相对分子质量脂肪酸的比例增高而降低。MeltingPointsandSolubilityinWaterofFattyAcidsSolubilityinWaterChainLengthMeltingPointFattyAcids

M.P.(℃)mg/100mlSolubleinH2OC18700.04C4-8

-C6-4970C81675C10316C12440.55C14540.18C16630.08熔点及溶解度与脂肪酸链长的关系熔点与双键的关系F.A.M.P.(℃)16:1

1

6016:0

6318:0

1618:1

-518:2

-1118:3

7520:0

-5020:42023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL15脂质的物理测定（4）脂肪酸凝点凝点是反映化合物纯度的物理常数。由于目前有更好的化学方法测定脂质中的脂肪酸比例和分布，故此测定目前不常用。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL16脂质的化学测定（1）酸值（游离脂肪酸）表示脂肪和脂肪油中含有游离酸的一种指标。其定义为中和1g油脂中的游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数。常用以表示油脂缓慢氧化后的酸败程度。一般酸值大于6的油脂不宜使用。USP的定义与中国药典略有不同，以酸度表示：脂肪和脂肪油的酸度以中和10.0g物质中的游离脂肪酸所需0.1N碱的毫升数表示。USP提供了两种方法，除正文中另有规定外，采用方法一测定，中国药典采用的方法与USP的方法一相同。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL17脂质的化学测定（2）皂化值三酰甘油在碱溶液中水解，产物之一是脂肪酸的盐（如钠、钾盐），俗称皂；油脂的碱水解作用称皂化作用。皂化值系指中和并皂化1.0g供试品中游离脂肪酸和酯类所需氢氧化钾的mg数。皂化值的高低表示油脂中脂肪酸分子量的大小（即脂肪酸碳原子的多少）。皂化值愈高，说明脂肪酸分子量愈小，亲水性较强，失去油脂的特性；皂化值愈低，则脂肪酸分子量愈大或含有较多的不皂化物，油脂接近固体，难以注射和吸收，所以注射用油需规定一定的皂化值范围，使油中的脂肪酸在C16~C18的范围。中国药典采用的方法与国外药典基本一致。如果为了防腐，脂肪油事先充有二氧化碳的话，在称量之前，应将供试品置于浅盘中，在真空干燥器里放置24小时。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL18脂质的化学测定（3）羟值系指与1.0g物质中的羟基含量等值的氢氧化钾的毫克数，是对脂肪中羟基数目的定量。羟值的测试都是酸酐反应（酰化反应）做基础的，以被消耗的酸酐量测试出羟基含量。酰化反应在各国药典中的方式有略微差异。由于酰化反应时游离脂肪酸羧基中的羟基未参与反应，故根据定义应将酸值加上。另外，也有用乙酰值来表示油脂的羟基化程度。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL19脂质的化学测定（4）碘值表示100g供试品在规定的条件下消耗的碘的g数。油脂分子中的不饱和脂肪酸也和游离不饱和脂肪酸一样，能与卤素起加成反应。卤化反应中吸收卤素的量反映不饱和键的多少。USP提供了两种方法，除正文中另有规定外，采用方法一测定，中国药典采用的与方法一相同。（注意：若超过一半的溴化碘试剂被供试品消耗，减少供试品取样量，重新测定。）牦牛奶脂肪碘价与季节变化2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL21脂质的化学测定（5）过氧化值系指每1000g供试品中的过氧化物量，以活性氧的毫摩尔数表示。过氧化值表示油脂和脂肪酸等被氧化程度的一种指标。用于说明样品是否已被氧化而变质。油脂氧化后生成过氧化物等，其氧化能力较强，能将碘化钾氧化成游离碘。可用硫代硫酸钠来滴定。由于油脂氧化酸败会产生一些小分子物质（如自由基），其在体内会产生不良影响，所以过氧化值太高的油不宜食用，更不用说用来制药了。（注：取样后需迅速进行测定，以防供试品被氧化。）2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL22油脂类辅料的质量标准控制要点一、如何制订油脂类辅料质量标准二、中国药典2010版对油脂类产品的质量控制要求三、国外药典对油脂类产品的质量控制要求四、其他质量控制要求2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL23USP,Ph.Eur.1、酯化值

是指用于皂化1.0g物质中的酯所需要的氢氧化钾的毫克数。如果已测定了皂化值和酸值，则两者之差即为酯化值。即酯化值＝皂化值－酸值。也可参照USP的方法进行测定。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL24USP,Ph.Eur.2、不皂化物

系指油脂中能溶于有机溶剂中但不能被碱性氢氧化物皂化的物质，以及能溶于有机溶剂的皂化产物。这些物质是高级脂肪醇、甾醇和碳氢化合物等，能溶于乙醚等有机溶剂。具体测定方法参照USP。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL25USP,Ph.Eur.3、脂肪酸组成

大多数天然油脂都是简单甘油三酯和混合甘油三酯的复杂混合物。但从油脂的脂肪酸组成来看，还是有一定的规律的（见表2）。可以从脂肪酸的组成和比例来区分不同的油脂。主要采用气相色谱法，具体测定方法参照USP。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL26USP,Ph.Eur.4、ω-3脂肪酸的测定和分类ω-3脂肪酸（也表示成n-3）的研究始于爱斯基摩人很少得心血管类疾病，研究显示ω-3脂肪酸能促进甘油三酯的降低，有益心脏健康，所以油脂特别是鱼油中需要测定ω-3脂肪酸。以下方法用于测定来自鱼、植物或微生物的原料油或胶丸中的二十碳五烯酸（EPA）（C20:5n-3）、二十二碳六烯酸（DHA）（C22:6n-3）和总ω-3脂肪酸。方法中所用溶液应避免与光、氧化性物质、氧化催化剂和空气接触。（1）EPA和DHA含量参照USP进行（气相色谱法）。（2）总ω-3脂肪酸含量参照USP进行（气相色谱法）。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL27USP,Ph.Eur.5、甲氧基苯胺值是指在每100ml溶剂和试剂混合液（按药典规定的方法配制）中溶解的1g供试品得到的溶液在1-cm的小池中测定吸光度的100倍值。油脂中不饱和甘油三酯在氧的存在下，生成过氧化物后，在适宜的条件下，可继续分解成醛和酮等物质。醛和酮类物质与甲氧基苯胺反应生成醇胺，醇胺脱水生成醛亚胺，可用紫外法测定。通过测定甲氧基苯胺值可反映油中醛和酮类物质的量。具体的测定方法可参照USP。（注：尽快操作，防止暴露于光线）。经查USP（33版），制订甲氧基苯胺值的品种共有5个，均为含鱼油或ω-3脂肪酸（如DHA和EPA）的产品，限值从15至30不等。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL28USP,Ph.Eur.6、总氧化值（TOTOX）

是过氧化值和甲氧基苯胺值的总和，可以很好地反映油脂的氧化情况。总氧化值以下式计算：2PV+AV式中PV为过氧化值，AV为甲氧基苯胺值。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL29USP,Ph.Eur.7、微量金属元素由于油脂来源于生物体，特别是鱼油来自海洋，重金属的污染应特别注意，故需要对微量金属元素进行测定。样品经微波消解后用原子吸收分光光度法进行测定，石墨炉原子化器用于测定镉、铜、铁、铅、镍、锌；自动氢化物发生原子化器用于测定砷和汞。具体方法可参见USP。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL30USP,Ph.Eur.8、甾醇组成

甾醇又称固醇，是类固醇的一种。甾醇类化合物广泛分布于生物界。用脂肪溶剂提取动植物组织中的脂类，其中常有多少不等的、不能为碱所皂化的物质，它们均以环戊烷多氢菲为基本结构，并含有醇基，故称为甾醇类化合物。胆固醇是高等动物细胞的重要组分。它与长链脂肪酸形成的胆固醇酯是血浆脂蛋白及细胞膜的重要组分。植物细胞膜则含有其它甾醇如豆甾醇及谷甾醇。真菌和酵母则含有菌甾醇。甾醇是油脂中的一类杂质，有些成分多了对人体有害，如胆固醇等。油脂中甾醇的组成和分布是不同的，因此也可以作为鉴别。不同油脂的甾醇组成和分布图：葵花籽油的甾醇测定气相色谱图：无胆固醇（1），△7-菜油甾醇（7）、△7-豆甾醇（14）和△7-燕麦甾醇（15）含量高。β-谷甾醇图：橄榄油的甾醇测定气相色谱图：含胆固醇，不含△7-菜油甾醇（7），△7-豆甾醇（14）和△7-燕麦甾醇（15）含量低。甾醇的测定（1）甾醇组分的分离，先将样品中的不皂化物提取出来，再用薄层色谱法或液相色谱法（Ph.Eur.7.0）分离出甾醇馏分；（2）甾醇的测定，采用气相色谱法进行。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL32甾醇的测定——甾醇组分的分离2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL33图：供试品的甾醇分离液相色谱图收集从20分钟至32分钟的洗脱液橄榄油提取不皂化物后，采用Kromasil60-5SIL硅胶柱（250×4.6mm），以异丙醇-正己烷（1：99）为流动相，经高效液相色谱分离，流速为每分钟1.0ml，检测波长为210nm，采用Agilent1260FC-AS馏分收集器。甾醇的测定——甾醇的测定收集液甲酯化后，照气相色谱法（中国药典2010年版二部附录VE）测定，采用5%苯基-95%甲基