微生物实验室培养

课题1微生物的实验室培养专题2微生物的培养与应用1提供合适的营养和环境条件2防止其他微生物污染2基本成分：碳源、氮源、水、无机盐3特殊营养：（有些微生物需要）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）、氧气、二氧化碳、渗透压的需求：一、培养基如:生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、碱基等按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。1概念：不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质合成生物体的细胞物质和一些代谢产物；有些是异养生物的能源物质氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物①无机化合物：CO2、NaHCO3等。②有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油、牛肉膏、蛋白胨等①无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐。②有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等自养微生物异养微生物注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源，如牛肉膏硝化细菌营养物质定义作用主要来源生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分无机盐矿物质参与酶的组成；调节渗透压——水——作为溶剂和运输的介质；参与生化反应——牛肉膏、酵母膏、动物组织提取液等备注：1不同种类的微生物，对碳源的需要差别较大。2微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。3对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源和能量充生长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分天然培养基合成培养基用途或功能鉴别培养基培养基的种类不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产，增加某某菌的浓度或产物微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基固体培养基加入青霉素是抗生素，杀细菌的培养基:不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基:几种选择培养基举例：分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养型微生物唯一碳源为纤维素的培养基分解纤维素的细菌1无菌范围：实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程2消毒与灭菌酒精灯旁操作超净工作台关键是防止外来杂菌的污染二、无菌技术耐高温需保持干燥的物品，160～170℃1～2小时接种环、接种针等金属用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100in关键是防止外来杂菌的污染2消毒与灭菌：二、无菌技术四、大肠杆菌的纯化培养分散成单个细胞,形成单个菌落3功能：单个或少数菌体2特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体菌落1定义：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2称量：3溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容、分装、封口：5灭菌：6倒平板：培养基、培养皿倒平板约50℃倒置：防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基倒置1培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。思考讨论（课P17）4在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。学生看课P18平板划线法的操作在给学生看平板划线法的视频㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：接种方法⑴:平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1接种：接种环防止划破培养基？（重复实验）（空白对照）四、大肠杆菌的纯化培养平板划线时不能划破培养基，为什么？一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。问题讨论1为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。操作的第一步灼烧接种环：每次划线之前都要灼烧接种环：在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环：②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。问题讨论问题讨论2在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106接种方法⑵:稀释涂布平板法：a梯度稀释菌液：菌液微量移液器⑵稀释涂布平板法：a梯度稀释菌液：b涂布平板：1个不涂布作空白对照滴灼冷涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍各梯度分别涂布3个平板重复组，取平均值平板划线法⑵稀释涂布平板法：问题讨论涂布平板的所有操作都应该在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？答：应从操作的各个细节保证“无菌”，例如，酒精灯与培养皿的距离要合适，吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围，等等⑴平板划线法：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：1.接种：⑵稀释涂布平板法：2培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，观察并记录四、大肠杆菌的纯化培养接种方法下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A防止杂菌污染B消灭杂菌

C培养基和发酵设备都必须灭菌D灭菌必须在接种前B灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。灭菌的目的发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的五、课题成果评价培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点。（一）培养基的制作是否合格如果未接种的