金银花提取工艺的改进

金银花提取工艺的改进

金银花是蔷薇科植物科的一个干燥的花蕾和花朵。为临床常用中药,其主要药用有效成分是绿原酸和异绿原酸。绿原酸是一种由咖啡酸和奎尼酸缩合而成的缩酚酸,具有抗菌、增高白细胞、抗肿瘤、清除自由基等作用,易溶于水、醇溶液和丙酮等溶剂,其分子结构中有酯键、不饱和双键及多元酚等三个不稳定部分,提取时不能高温、强光及长时间加热。药理学证明,绿原酸具有保护心血管的活性。人体的低密度脂蛋白被氧化是引起心血管病的一个重要原因,绿原酸能有效保护人体的低密度脂蛋白中α-tocopherol,对其氧化起抑制作用。中药制剂中,目前制备金银花提取物多采用煎煮法、浸渍法和回流法等。其中最常见的方法为煎煮提取法,但由于提取条件没有优化,绿原酸提取得率较低,金银花得不到充分利用,导致资源浪费。我公司生产的金芪降糖颗粒、银黄颗粒等产品均使用到金银花。在产品生产中发现,使用传统的水提取及40%乙醇(pH=6)提取出的绿原酸提取率少,得率极不稳定,为提高绿原酸提取率,充分使用药材,对制备金银花提取物的工艺方法进行了探讨。1材料和设备1.1绿原酸对照品/药品微生物检定所金银花,药材中绿原酸质量分数为3.5%,由河南省宛西制药股份有限公司质量控制中心检测;绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,纯度98.7%);HPLC用水为超纯水,乙醇为食用级,其他试剂为分析纯,均经0.45μm微孔滤膜滤过后使用。1.2酶活剂1100Series高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)、SHZ-D循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限公司),生产用3m3醇提罐(江苏沙家浜化工设备公司),2000L球形浓缩器(上海德科制药设备厂)。2方法和结果2.1在正交试验中选择最佳提取方法2.1.1乙醇量、回流时间根据文献报道及生产实际情况,影响绿原酸提取效率的因素有2个,分别是含乙醇量(A)、回流时间(B)。采用L9(34)正交试验安排金银花的提取工艺,以药材中绿原酸提取率作为评价指标,选择溶剂含乙醇量、回流时间2个因素,每个因素设3个水平,因素水平见表1。2.1.2提取剂为正交因素表取炮制好的金银花药材,具塞锥形瓶中,分别按正交因素表制备各样品,称定,提取后取出,冷却后补回原质量,摇匀,滤过,取续滤液,离心,备用。2.1.3绿色原酸测定分别吸取上述各样品溶液10μL注入高效液相色谱仪,依法测定绿原酸的质量分数。结果见表2,方差分析见表3。2.1.4花中绿原酸的提取由表2可知,比较极差可直观看出,因素B的极差最小,数据处理时作为最小误差项。由表2和表3可知,各因素对提取金银花中绿原酸的影响程度为:A>B,因素A有显著性差异,即含乙醇量对提取率有显著性影响。因此,对绿原酸提取的最佳工艺组合为A3B2,即选用70%乙醇溶液12倍量,提取两次,每次1h。溶剂浓度和提取时间对有效成分提取均有影响,通过对以上因素的分析,可以看出提取时间不宜过长也不宜太短。下一步将通过中试生产试验,进一步验证该提取工艺的稳定性。2.2测试测试2.2.1提取液的制备以最佳工艺A3B2组合,取金银花300kg,分别用70%乙醇7倍、5倍回流提取两次,分别为1h、1h,提取液合并过滤,浓缩至一定比例。制备得4批样品:样1、样2、样3、样4。2.2.2绿色原酸测定分别吸取上述各样品溶液10μL注入高效液相色谱仪,依法测定绿原酸的质量分数。并与实际生产中数据进行对比,结果见表4。2.2.3原提取方案的确定由表4可知,验证试验方案结果进一步验证了该试验方案的稳定性,同时对比原生产提取工艺结果,可以看出本试验方案对比原提取方案绿原酸提取率提高了20%。不管药材中绿原酸量如何,相同的提取工艺提取绿原酸的提取率稳定不变,同时在生产过程中,药液浓缩相对较快,同时回收后的乙醇经过调比,可以继续用于后续的产品提取,可以重复利用,节约了成本,减少了不必要的浪费和废液的排放。3不同ph值的提取采用正交试验法对样品的提取条件进行了优化,确定了采用70%乙醇为提取液,提取两次,每次各1h的样品提取方法。从以上试验可以得出,用70%乙醇提取金银花,提高了原药材中绿原酸提取率,同时也减少了不必要的浪费,节约了资源,试验结果表明,该工艺稳定,可控易行。生产用40%乙醇(pH=6)提取,需要用盐酸调pH值为6,药液中带入了CL-,很难清除掉;药典中用80℃温水温浸,浓缩过程中容易破坏绿原酸成分。试验方案用70%乙醇提取解决了以上问题,所用70%乙醇无需调pH值,便于操作;70%乙醇易回收,回收溶剂可以重复利用,且浓缩过程中温度不会过高,保证了绿原酸成分的相对稳定性。如果用于绿原酸纯品的提取,可多重复提取几次,使提取率达到百分之九十以上。金银花提取过程受多种因素影响,70%乙醇提取时温度变化不大,同时可以提取出更多的有效成分。绿原酸为热敏性物质,温度过高,会造成绿原酸的分解,这就要求提取温度不能过高,70%乙醇提取时温度稳定在80℃左右,保证了绿原酸不被破坏,并能保证有效物质的充分溶出;浓