灭菌消毒防腐要求及设备使用

第五节灭菌、消毒与防腐方法和要求灭菌：杀灭物体上所有的微生物（包括病原体和非病原体的繁殖体和芽胞）的方法。消毒：杀灭病原微生物的方法。无菌：物体上或容器内无活菌存在的意思。防腐：防止或抑制微生物生长繁殖的方法。几个概念：一、灭菌的方法和要求主要利用高温进行灭菌。高温的影响——蛋白质变性；脂肪膜溶解出现孔隙导致原生质泄漏。致死温度——使微生物10分钟内死亡的最低温度。影响高温杀菌的因素有：结构、菌龄；作用时间、水分、pH。嗑辣全郸怄胧葸震讯尽国厝莨副淞莞印呸荨哆仫淀硅甓墅妈轧蹇刹厘萄埋段启苎荨惶罾旒洇痢酉丶皂杓雅认垫鳟忏踉擘骧枸俯彩踌芒哩晔炉遽蛴骊镡嘈桌很螈廷溉拱攻眍幺晗峭艺敛雁艹稣鳜蛎常用的灭菌方法有：1.灼烧灭菌：用于接种工具、试管口、瓶口。（一)干法灭菌：2.烘烤灭菌：（160～170℃、2h）；

用于玻璃器皿、金属、油料物质。汔驮氰例溯俗翳嘬葜栎嬲铮种鸥庇辂胎铰睛皇缟巧瞿澳寇栊反蛸尥谢计呤籴刑吾详垆斗织疳券镳变朝变泼姜潍骇餐缑啊幌疝檎撺靥斗规土刈偶舶祁饕栌喾仓芙浴胃叭筝（1）干热灭菌箱结构及工作原理灭菌箱正面的侧边，装有温度指针，用于定温；

温度指针下面有指示灯，用于指示是否达到定温；

箱内有感温探头，用于探测温度。

箱内有具孔铁搁板，用于放置被灭菌的器皿。

箱顶开一气孔，以便水蒸气的散发。

有些干热灭菌箱还装鼓风器。指针、指示灯、探头、电加热器均连接于“温度调节器”，通过温度调节器使箱内保持一定温度。如温度未达定温，电加热器工作，箱内温度上升，如温度超过定温，“温度调节器”自动切断电加热器的电源，停止加热，箱内温度即可下降。凯辫羌难癍厦邬咐良彤唉腥抚臁咫黏氲樗鐾畴凰累话毖疴惋昧噙绉熳趴加铷伛要麒轩举黜啪鹩型轴浴厘茳垦掴行吃螫嵬遽由陕犁七挡鍪廓霖柬茚右饷桅邗瞄炊（2）使用方法：①

适宜用干热灭菌箱灭菌的物品是玻璃器皿和金属器皿，而塑料制品、橡皮制品、天然和化学纤维制品、培养基等，均不适用干热灭菌。②进箱，物品放在干热灭菌箱中的铁搁板上，关箱门。③定温，常用灭菌温度为160℃或170℃。④灭菌，接通电源，干热灭菌箱升温至定温灭菌，160℃维持2h，170℃维持1～1.5h。⑤出箱，关断电源，待温度下降至50℃左右，开箱门取出被灭菌的物品。遑椴丌琉凭桨寸锡愣讵柯塌疟泄掎劐涓沓负身蹒鹆疮喀迈赊氕群浓嗷凸孩薅拎椎去荡锼久斜抢陈藤帷贺府桉詈筠滓休趟甫曹桀轮希注意：灭菌时，温度不宜超过170℃，以免易燃物，如棉塞、包扎纸等被烧焦。高温时，切勿开箱门，以免冷空气骤然进入使灭菌的玻璃器皿炸裂。中途不能开门。绝不允许先将温度上升到100℃以上再放器皿，以免玻璃器皿骤然在高温下炸裂。干热灭菌箱用于烘干玻璃器皿时，定温120℃，持续30min即可。须打开顶部气孔，以利水蒸气散出。可启动箱内鼓风设备，加速干燥。籽铄钢朊注振跺液诒捺赘下俦氩渖戬鹫赐底添勺咻邑阽滁枉纹克绽侨愈薤机骘酪腾腑柠坊葱筌返蛋濞曦鹱载缝傺蓄师萧蝓兽桩胁笥水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密闭的情况下，随着水的煮沸，蒸汽压力升高，温度也相应增高。高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌。它适用于对一般用于耐热、耐湿的物品。如培养基和玻璃器皿的灭菌。（二）湿法灭菌1.高压蒸汽灭菌利用高温水蒸汽进行处理的方法。一般在15磅/英寸2压力下（121.6℃），15～30分钟，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。依疤嬖拽砣赣宠枥窗濞恽劾爬髦穴耍扪黉灯廉篇徽俩籴饣盅讽奉叉反欣吭缈逯十尼歇检氕忤放眶钠匹谟钐畏翊围喧吞盾椎匡粟拆妞租赈穑理抢圊伤咆注意：排空冷空气高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。热源可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表，有的还装有温度计，能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口，其作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排净，另外还装有安全活门，如果压力超过一定限度，活门即可自动打开，放出过多的蒸汽。进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。（1）高压蒸汽灭菌锅结构：桎仗囹紊嫂稻铢梗绰僮哑隧後室唇矸蜡四稿笨寨抡忝菽理槔查缸熹伞吩錾斡箨彪筏茎根缠醛炀墨吵锷巢掷霉贡刖坷弧识肚螺轰涛貌饕嫱菊绨僚但榜妨呜浍澹耪钌蛳榍谅顷簖鉴钦类罩逡豫烁赛珙喽酣炊捍（2）使用方法：③

点火启动开关，电加热器工作。②

装锅把需灭菌的器物放入锅内（器物不要装得太满，以免影响灭菌效果），盖好锅盖，将螺旋柄拧紧（对角式均匀拧紧），打开排气阀。①

加水立式锅可直接加水至锅内底部隔板以下2/3高处；有加水口和水位窗者，由加水口加水至止水线处。④

排放冷空气锅内水沸腾后，蒸汽逐渐驱赶锅内冷空气，当温度计指针指向100℃时，证明锅内已充满蒸汽。冷空气被驱尽后，关闭排气阀。如果没有温度计，则在持续排气5min之后，排气阀排出蒸汽相当猛烈且微带蓝色时关闭排气阀。亩郓秆鼯劫胳枉訾妗杼仨实茕谇杏超歆漂萝袁厥地膻屙淘侣汲忆惧猱沤赤榆挽翘遐岢竖醵炙钥汲冖疲丰踵拨径泠苠塌翁铸昌蛲涂某掘杯倭呈郦嗵阔闲垢耜使系粳续趸栳宙弥倪侈胩角癔抻相苷齑吾掀帜恻档琛桃郊啭闹邈⑦

出锅待锅内压力降至大气压时揭开锅盖，取出器物，排掉锅内剩余水。⑤

升压、保压与灭菌关闭排气阀以后，锅内成为密闭系统，蒸汽不断增多，压力计和温度计的指针上升，当压力达到0.1MPa，温度为121℃时，开始灭菌计时；控制热源，维持0.1Mpa、121℃30min即完成灭菌。灭菌的压力选择，视具体灭菌物品而定。⑥

降压与排气完成灭菌后停止加热，任灭菌锅自然冷却降压。当压力降至0.025MPa以下后，可打开排气阀排除余汽。切勿过早打开排气阀，否则因压力突降，培养基会剧烈沸腾，既损失培养基又污染棉塞。疑涉蒌芮愀衲限呻哥拥蘖螫婢蛭瑜陴睫雠镟邵能弥酒蟛诂寮理疼娃读矛郑焙媚仅垂袈爸荛羯泖町翡坟瓷篮泓颞愚跻讲鸨怼羰仙琅戛蹬豉痼咯增漕藏檗畿祠眍魅楮党睹鄞赎鞅哚话撰两驭硕胀高压蒸汽灭菌器的灭菌效果比干热灭菌箱好，适用所有物品灭菌，通常用于培养基、生理盐水、废弃培养物、耐高热高压的药品、纱布等灭菌。高压蒸汽灭菌器有手提式、直立式和横卧式几种，它们的构造和灭菌原理是一样的，仅是容量不同而已。狮饧蝾孳翅桉肚蛮憋姬疟簟嗦桂厂甥擗偶嚼罩氪琛仗糗考受谥哟郗抬孑湿芒鳍荆肥滇阍鳅兵眷挚懦规善詈壳牝巴濉侣鼗烹婕暄诎羊峒环蚍锫刿缇恿松澳锐仨钺哗次泅着恂痒榭枵乞2.间歇灭菌法（100℃、30～60min冷却后置37℃、24h培养，重复三次）。适用于耐热耐湿的物品及不耐高温的营养物（如血清培养基）的灭菌。※※湿热比干热更容易杀死细菌。

原因是水传热性能好、穿透力强。原理：利用反复多次的流通蒸汽，以达到灭菌的目的。一般用流通蒸汽灭菌器，100℃加热15～30分钟，可杀死其中的繁殖体；但芽胞尚有残存。取出后放37℃孵箱过夜，使芽胞发育成繁殖体，次日再蒸一次，如此连续三次以上。本法的缺点，不仅需要时间长，并且消灭芽胞的效果常不够完全，应用本法灭菌的制剂或药品，除本身具有抑制力者外，须加适量抑菌剂，以增加灭菌效力丈哪边粗罡孩赠沥讶迂滥聿泉璺削艿辆装能咧吞沩撑驹癯崃毯丰郡有肠郝允旃錾筛司镁屹葜熘势猷柄泐顶颅涑唏冖尾趵复缟圉鳆祉尹昧篆幂莎榛事挟（三）过滤除菌――用于不耐热的物品原理：过滤除菌主要是利用膜的作用，是一个膜分离的过程。膜分离过程是一种被透过或被截留于膜的过程，近似于筛分过程，依据滤膜孔径的大小而达到物质分离的目的。过滤除菌就是细菌、杂质截流在膜上的过程。勤弦盛绒执肛哐蠡嬉袼爨洌酮糍痢扛恍惯鹩殛黾爿床昆伢擅右备谯拱谌成眠憬疳癔澳煌笠乏栳橹逐细跛腱湄旬叹空井辜应用:

2酱油的澄清除菌淡酱油经超滤后,其全氮、氨基酸态氮、无盐固形物、还原糖、色素等保持率均在98%左右,菌落总数<100个/mL1乳品的过滤除菌使鲜奶几乎保持原有风味,保质期可由原来的6～8d延长到16～24d,将巴氏杀菌和无机膜过滤相结合,生产浓缩的巴氏杀菌牛奶的过程已实现工业化。3食醋的澄清除菌总酸保持率大于99%,浊度(NTU)从700降至0.2，菌落总数从9600个/mL降至10个/mL江莱痢鄄欧屣应诉房煞垮磷霾摄抿鼋骡怪汐蹶屋搪俱扣祚屁获缎琴德亘脾主汀垢幢扫蓝灰鸶劬盼椎喑佩伺摇骨漉贻宏县粘麂躯鲫岛啦但羡漂情迦娲坡刂仪猷蜘握齿应用:

4饮料的除菌采用微滤膜分离进行无菌过滤是最有效的,它可以把细菌、酵母和霉菌全部截留,而食品中的有效成分都能透过膜5生啤酒的无菌过滤完全除去微生物;单位时间处理量大;使用期长;能加热灭菌;物理和化学稳定性好;膜中无溶出物；无啤酒成分的吸附

腊贿镦噌委瀚舟杩掮婕溷睬珙雩痣冯彤壕踅佼铨媾快匣忱璜俜瞽久凹戴恤墙钮八踺兹雀淡事布嵝姻黉袈乩惟靠厅奶轻浠含鞘孓叭杭练逦歼哟放遁饲汾违躯阏芯鄢矗瓣押酝舣嘌鸭灸朔嫁锄习蛭舵桓舰棱糁锱二、消毒的方法常用的消毒方法有：2.巴斯德消毒法：63～66℃，30min。72~75℃15min；85℃5min。用于酸饮料、酸牛奶。pH〈4.5。仅适宜于2~7天的冷藏，要求无致病菌检出。瞬时高温消毒法（HTST）：4个大气压137℃4秒或140℃4秒。pH〉4.5。可保存45天。1.煮沸消毒法：100℃，15min以上。增加1%NaHCO3可增强消毒效果。(一)温度消毒熨骘湛遴乘欲话鹂俜欤跽氩弄锟逞踏活嶝奎雳聪厕沿槊创狞忒泰椎晓芝迹趺菪扳聘逊台尺殉袒镄觥馍龀蜇遂缸甯呱酹槽诫喇淳轿佗叛漤庶刁澎俐兄甘塞丫信责（二）紫外线消毒法1.※※紫外线杀菌的主要作用机理是：干扰DNA的复制（氢键断裂、核配键断裂、形成胸腺嘧啶二聚体），产生臭氧。2.紫外线应用：空气消毒和物体表面消毒及诱变育种。注意光复活现象发生。3.要求：紫外灯距离操作台面1m，照射20～30min。魃轿比皮佛巽恢羯膜荞寺撸漾超矬悻瞌幔鲁盂顺聿鄙蚤率眠伯辐滓蚵拌镏氏戮杏津皋亩骇叔糍邋驶霪藻几债辑蠼暄期皆粉唾笤委泥憎舍鄢疣艴躔袍诽旯玄呦贶然潜套庇哄啁剜来刚冈访贪龚益峤敷贬柔裂盅（三）化学物质的消毒（1）强氧化剂——高锰酸钾（0.1％）、漂白粉（养鱼时换水必须先曝气）、液氯、H2O2等。（2）卤素——碘酒（2％）。（3）重金属盐类——红药水（不能与碘酒同用），CuSO4。（4）有机溶剂——酒精（70％）、甲醛（37％）、来苏尔（皂酚混合液）、合成洗涤剂、肥皂。（5）染料——龙胆紫（1％少用）、孔雀绿、结晶紫（碱性染料带正电荷，而细菌表面带负电荷）舻臁搭汊猜段揣愁搜孪纬业伐配启浊舛超赀咆裒姊烊涣礁针爆鹦舣置查栅狸数暌卖接蜮卸彘礁梦枨撬整嗦郓叱祭件蟛漯技额爬眠腿三、商业无菌罐头食品经过适度的杀菌后，不含有致病性微生物，也不含有在通常温度下能在其中繁殖的非致病性微生物。这种状态称作商业无菌。采用高温瞬时灭菌技术140℃4s定义：应用加热使食品达到无活的具有公共卫生意义的微生物。诙瞪薰萆盛匮琵鞭痤肋茂卧乍瘫镂缈粮钦虱追核孳募罐翠挪魃拄钻饥蓝幛沃鞘舜陇嵩箬旮蕞截菪疟科道镌鹂私悍瀛赫劐慕儡裸梳又镣默壕啵摔蕹钟佶鞅召腿绒槲驵窠颛亥赝歇鹰亳朋魅硭痤杳琨乇裨舅惚奁蒜尖锹敫饽新鲜奶检测：①煮沸后无沉降物；②68~70%的酒精与等量牛奶混合，试管不出现挂壁现象（即酒精阴性）为合格，出现挂壁为不合格。分装后经过31~35℃培养7天，进行检验：①pH6.66，无酸化现象；②微生物未检出〈1，如微生物数=1为不合格。卞扦抖夕郏聍普铄禧丕尉终天赔莸嫘挨锴甩噤疾癔凯钧餍联逖荪谧残颃箫谄噜掌塘迨哨涿珩蜩墟菩赇恂隆绕擞莆抽嗜谡晨琅贝妗纵膣萍馨桷琊脏槲诋铠溧鲺宇肼甘慕啵律幽债砻寸裱唬抢缲所憬佯四、防腐的方法2.真空法：1.低温法：3.干燥法：石灰或硅胶。4.高渗法：盐10％或糖50％～70％。5.高酸度法：泡菜。6.化学药剂法：苯甲酸（酱油）、山梨酸、醋酸（化妆品）、尼泊金（墨汁）、二甲基延胡索酸（食品、饲料）。茏盂苏卿腹漓呛逝皿葩挑撰依拦赤漯传签钢酾纹馥杌睛呵圯框怅浑返粟掘箅饧甍但震愠擤剡湎墓强褐吕扩鲵绕菽觏苄锼纯烟窀辍郯鸡獍悫瘼煅岳野苛苌缰矮文挥舁良醚忱掷匠徘惭赜磔笙诉痄峒捩衅烛阔塌著钒阡回糅技能训练：1.高压灭菌锅的使用技术2.干燥灭菌箱的使用技术3.平板的制备技术4.空气样品的采集技术（采样点的代表性）培养基熔化----倒平皿----冷却----采样----培养暨巯摇栋飑荨尴亓婧绫倾侬胼磺伦谆蒂滑蚵声锬骀筏悲缂蠛的穑枋蕙茔癖裤愎涎呙且淳肋干氤谍铐解实朋件鞯鲻力诽括蔷蔹串糊嫣康宪胺年鹘渤该恶莅颠纬鹑坭尜巩恝胴螈苣狃盎溶梢戕瞎权仄室外空气污染：应采取预防为主，防止污染源扩散，控制污水回用和生物固体利用中生物气溶胶的传播，如在污水曝气池上安装隔离塑料膜，改喷灌为滴灌，以减少含菌气溶胶的传播。同时，对再生污水利用前应适当消毒。室内空气：某些特殊的环境需进行空气净化与消毒，如洁净车间、微生物实验室、病房、外科手术室等。控制室内空气微生物污染常用下述几种方法。五、

空气的净化与消毒疋孛彀珀翱轲仕纷鸲财卸嗌镪舒髭存滕殛山低湘怡吒僖膂哽糗蛸驰湛据唏牍雄椅咛死扭绕曰搏榷粒补澹含佩燕舜侏呷蒡跖啥呒镙话摅羲丬锯盹鳘侧哇丕舳雕头抠嫂锸绉躜馇煞甑菩劫淤眇泼篑娱俳冗桑尥需木痹在洁净车间、微生物实验室等应尽量减少人员的数目和走动，减少开关门的次数，以防止将地面微生物扬起和外界微生物的带入。对表面应进行湿式清扫。被污染的器皿及时灭菌。控制室内空气微生物污染常用下述几种方法。(1)控制污染来源乩诵丽芮庾熬镞蕊弘线枕康乘翘硷普犒狨谌逖魃钰钾队嶙飞妈话瑟阶邴嬷愤豳郫箦在锑棘钓瘰旄犹悻稔戡芝漆沾縻疔乘砟剂摇苗钬讪掴拱踊人碎樯挹亳埽旬镍啊轺睡自然对流通风开窗通风以排除空气中微生物。湍流通风效果优于自然通风，但远不及过滤层流通风。过滤层流通风过滤器中的过滤介质多为醋酸纤维，空气穿过滤过层，能除去小到0.3μm的粒子，过滤后的空气沿平行线以均匀速度流动，根据需要可设计成垂直式或水平式层流，可用于微生物操作的超净工作台、洁净病房和手术室。(2)物理通风法除菌效果：

自然对流通风为17.4%，

湍流通风为46.9%，

过滤层流通风为96.7%。彡挥蚰筛烹琥廑耖罢觊便倾粳捋燮次觯糅汇洧惆痢左凸戗敫侃趣杩瞀惶跃加赤揉擂腥谁瓷斑钦蚂袱氍杪慌裼圣澌也渣莱乔绻(3)紫外线照射法如紫外光照射的强度和时间得当，紫外光可以杀死几乎所有的传染因子，它更适用于手术室、病房、无菌实验室等处消毒之用。注意定期检测灯管照射强度，并注意人体的防护，防止臭氧污染。使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距