结核菌检测中PCR结核分枝杆菌DNA检验结果与常规痰涂片检验结果对比

结核菌检测中PCR结核分枝杆菌DNA检验结果与常规痰涂片检验结果对比【摘要】目的：研究对比结核菌检测中PCR结核分枝杆菌DNA检验结果与常规痰涂片检验结果对比。方法：纳入1246例，2021年1月-2021年12月期间，于我院进行结核菌检测的患者，采集患者的痰液样本，分别采用PCR结核分枝杆菌DNA检验与常规痰涂片法进行结核菌检验，对比检验结果，分析PCR结核分枝杆菌DNA检验与常规痰涂片用于结核病早期诊断灵敏度、特异度以及准确度。结果：PCR结核分枝杆菌DNA的阳性检出率15.08%与常规痰涂片的9.68%相比明显更高，P＜0.05（x2=19.168）；PCR用于早期结核诊断的灵敏度98.62%、特异度99.08%以及准确度99.01%与常规痰涂片的63.30%、93.12%以及88.56%相比均明显更高，P＜0.05（x2=88.229，x2=57.381，x2=133.728）。结论：对于结核患者而言，进行结核菌检验时，采用PCR结核分枝杆菌DNA检验灵敏度、特异度以及准确度与常规痰涂片检验相比均更高，可以更加简便、快速的检出患者的结核菌感染情况，在结核病的早期诊断中效能更优，可以为患者的临床治疗提供可靠依据，临床应用价值更高。【关键词】结核菌检测;PCR;结核分枝杆菌DNA;常规痰涂片;微生物检验[Abstract]Objective:TocomparetheresultsofPCRMbacteriumtuberculosisandconventionalsputumsmeartest.Methods:Atotalof1246patientstestedfortuberculosisinourhospitalbetweenJanuary2021andDecember2021wereincluded,Thesputumsamplesfrompatientswerecollected,testedbyPCRM.tuberculosisDNAtestandroutinesputumsmearmethod,Comparethetestresults,andanalyzethePCRMycobacteriumtuberculosisDNAtestandconventionalsputumsmearforthesensitivity,specificityofearlyTBdiagnosisandaccuracy.Results:ThepositivedetectionrateofM.tuberculosisinPCRof15.08%wassignificantlyhigherthan9.68%ofconventionalsputumsmear,P＜0.05（x2=19.168）.;ThePCRforearlyTBdiagnosiswas98.62%,99.08%andaccuracyof99.01%comparedwith63.30%,93.12%and88.56%ofconventionalsputumsmear,P＜0.05（x2=88.229，x2=57.381，Conclusion:Fortuberculosispatients,tuberculosistest,usingPCRmycobacteriumtuberculosisDNAtestsensitivity,specificityandaccuracyarehighercomparedwithconventionalsputumsmeartest,canbemoresimpleandrapiddetectionoftuberculosisinfection,betterefficacyintheearlydiagnosisoftuberculosis,canprovidereliablebasisforclinicaltreatment,clinicalapplicationvalueishigher.结核是临床上较常见的一种传染性疾病，对于患者的机体健康与生命安全均有着巨大的危害。目前，临床针对结核病患者的治疗，除了常规的规范化药物用药之外，还需要对其进行消毒隔离处理，以避免结核病菌的进一步传播，提升疾病康复率[1]。研究显示，结核分枝杆菌（TB）是肺结核发病的主要致病菌，因此，临床诊断结核疾病时，多将标本当中的结核分歧杆菌检出情况作为重要参考指标，而检测可疑性结核标本的方法较多，包括常规涂片、抗酸染色以及结核杆菌基因检测(PCR）等，这类方法均具有操作简单，方便快捷等优点，而且费用较低，临床普及度较广。而近年来，部分研究发现，PCR结核分枝杆菌DNA检验在结核病诊断效能更佳，可有效提升结核菌检出准确度，但由于相关研究较少，PCR是否能成为结核菌检测的首选方式仍需进一步探讨[2]。基于此，本文纳入1246例，2021年1月-2021年12月期间，我院收入疑似为肺结核的患者，对比研究了结核菌检测中PCR结核分枝杆菌DNA检验结果与常规痰涂片检验结果，现报告如下：1.对象与方法1.1研究对象纳入1246例，2021年1月-2021年12月期间，于我院进行结核菌检测的患者，男：819例，女607例；年龄：36-85岁，年龄均值（54.18±3.27）岁；本次研究于我院伦理委员会授权后开展，研究内容已详细告知患者及（家属），且均表示自愿参与研究。纳入标准：①所有患者均于入院将详细基本资料纳入研究，并开展体征检测；②对研究涉及的相关检测操作有良好的耐受度；③病例资料完整，且已录入数据库，可随时调取。排除标准：①主观原因导致患者不能参与后续实验者；②处疾病恢复期或3个月参与过其他实验者；③患有精神疾病或认知方面有障碍者。1.2方法痰液样本采集：于清晨，采集患者第一口痰，即晨起之后，让患者马上以清水进行漱口，再将第二、第三口痰液分别吐出，采用who推荐的螺旋盖弹屏收集痰液本样后，以塑料袋进行密封保存，容器的表面必须对患者的性别、编号等进行明确标注。常规痰涂片检验：将患者咳出的脓性痰收集在干净的容器中，加盖密封，及时送检，检验时将痰液均匀涂抹在载玻片表面，烘干之后，采用贝索热染法染色液进行抗酸染色，之后将玻片放入到显微镜下对结核菌进行观察计数，所有检验均需严格依据《结核病诊断实验室检验规程》及试剂说明书要求执行。判定标准：若300个视野风，无未发现抗酸杆菌，即判定为阴性；100个视野内观察到3-9条抗酸杆菌数，即判断为阳性，可确诊为结核病。PCR结核分枝杆菌DNA检验：于痰液样本内加入4倍体积浓度为4%的Na0H，充分摇匀，于室温存放30min使其液化后，取0.5-1.5ml置入离心管内，再加入0.5ml的NaOH，于室温下静置10min，以15000/min的转速进行离心处理，持续5min，去除上清液，加入1ml的无菌生理盐水进行沉淀，再行5min离心处理，之后再重复洗涤1次，沉淀之后，加入DNA提取液50ul摇匀，进行10min沸水浴，再以10O00r/min的速度进行离心处理，持续5min，取2ul上清液，采用环介导等温扩增技术（LAMP）进行扩增，扩增条件：＜37℃，反应时间为3min；＜93℃，反应时间为1min；90℃，反应时间为5min；60℃，反应时间为40min；循环40个，反应终止，取Reporter窗口下记录仪算出的Ct值作为检验结果，CT≤36即为阳性。1.3指标观察对比不同检验方法的结核菌阳性检出率；以培养、药敏、影像学以及分子生物学检查等综合检验结果为参照组，对比不同检验方法的检测灵敏度、特异度以及准确度。1.4统计学处理研究相关数据均由SPSS22.00统计学软件进行分析处理，各项统计学数据处理由于专业数据统计人员操作，以t、x2值分别代且检验计量、计数数据，P＜0.05，即表示差异有统计学意义。结果2.1对比不同检验方法的结核菌检验结果检验结果显示，PCR结核分枝杆菌DNA检验的结核菌阳性检出率15.08%与常规痰涂片检验的9.68%相比明显更高，P＜0.05。见表1：表1对比PCR结核分枝杆菌DNA与常规痰涂片的结核菌检验结果（例/%）检测方法阴性/例阳性/例阳性检出率/%常规痰涂片（n=1426）12881389.68PCR（n=1426）121121515.08x2--19.168P--＜0.052.2对比两种检验方法的结核菌检测效能检验结果显示，PCR结核分枝杆菌DNA检验的结核菌检测灵敏度98.62%、特异度99.08%以及准确度99.01%与常规痰涂片检验的63.30%、93.12%以及88.56%相比均明显更高，P＜0.05。见表2：表2对比两种检验方法的结核菌检测效能（例/%）检测方法灵敏度/例特异度/例准确度/%常规痰涂片（n=1426）63.30(138/218)93.12(1125/1208)88.56(1263/1426)PCR（n=1426）98.62(215/218)99.08(1197/1208)99.01(1412/1426)x288.22957.381133.728P＜0.05＜0.05＜0.053.讨论结核病是一种典型的慢性传染性疾病，在临床中十分常见，发病的后可对患者的健康产生巨大威胁，临床研究显示，结核病的发生的与流行主要是结核分歧杆菌所致，可累有患者多个重要脏器，尤其以肺脏损伤最为常见，在结核病发病总率中，仅肺结核占比就高达80%-90%，而及时检出疾病不仅改善患者临床预后的关键，更是防止疾病流行传播的关键[3]。一直以为，临床用于结核菌检测的方法主要以常规痰涂片检验为主，此种检验培养方式有着较高的特异性，而且操作非常简单易行，检验费用方面也非常低廉。但是，痰涂片法在实际的检验处理中，极容易被外界相关因素所干扰，使得痰液标本受到污染，从而影响检验结果的准确性，导致假阳性结果的产生。而为了避免临床检验时的假阳性发生情况，临床必须对整个工作室进行全面隔离，且所有物品都必须使用一次性用具，从根本上杜绝污染源，以确保最终检测结果的准确度；此外，该种检测方法存在一定的人为性主观因素，容易影响患者的后续治疗[4]。近几年，随着现代医疗技术水平的不断提升，PCR结核分枝杆菌DNA检验方式逐步在临床上得到应用，并且取得较好的成效，这种更加先进的检验技术，不仅操作非常简便，而检测准确度非常高，可以更短的时间内确定患者是否受到结核菌感染及感染情况，给临床结核疾病的确诊与治疗带了重大影响[5]。PCR结核分枝杆菌DNA检验作为一种全新型的结核检验方式，在近年来的诸多研究报道中均表现出了良好的敏感性与特异性，而且在检验操作方面列加简单、快速，已逐步成为临床检测结核菌最重要、最有效的方式之一。相较于常规的痰涂片检测法，PCR结核分枝杆菌DNA检验在诸多方面都表现出了明显的优势，且除了结核病诊断，在各类感染性疾病、肿瘤以及遗传性疾病也具有良好的效能，如PCR的检验操作更加简单，而且具有较好的可重复性等[6]。另外，PCR结核分枝杆菌DNA检验全过程只需要5-6小时，大大减少了结核菌的检出时间，从而更早对患者的感染情况进行明确，并及时采取针对性的处理与治疗措施，以免疾病的进一步传播，整体检测效能更优，可以作为临床诊断结核类疾病的首选方式[7]。本次研究结果也显示，PCR结核分枝杆菌DNA的阳性检出率15.08%与常规痰涂片的9.68%相比明显更高，P＜0.05（x2=19.168）；PCR用于结核早期诊断灵敏度98.62%、特异度99.08%以及准确度99.01%与常规痰涂片的63.30%、93.12%以及88.56%相比均明显更高，P＜0.05（x2=88.229，x2=57.381，x2=133.728），提示结核菌检测中PCR结核分枝杆菌DNA检验无论是的阳性检出率，还是检测灵敏度、特异度等方面均更优于常规痰涂片检验，表明PCR有着更高的临床应用的价值与前景。综上所述，在对结核患者开展结核菌培养检验时，采用PCR结核分枝杆菌DNA进行结核检测与常规痰涂片检验相比准确度更高，且有着更高的检测灵敏度与特异度，可以更加简便、快速，且特异性的对患者的结核菌感染情况进行检测，对于结核疾病早期的诊断与治疗观察均有积极作用，诊断效能更佳，临床推广价值更高。【参考文献】[1]罗嘉韵,余明均,廖卫平.结核分枝杆菌利福平耐药分子药敏结果与其表型药敏差异的研究[J].海南医学,2022,33(06):725-728.[2]范正超,尹航,刘建震,等.实时荧光定量聚合酶链反应技术在肾结核病理诊断中的应用价值[J].河北医科大学学报,2022,43(01):39-43.[3]王菊红,穆丽平.荧光定量PCR检测结核杆菌DNA的拷贝数与涂片抗酸染色镜检阳性程度的相关性研究[J].口岸卫生控制,2021,26(06):49-51.[4]林律,平国华,车洋,等.PCR荧光探针技