木薯中氢氰酸的测定

木薯中氢氰酸的测定

氢氰酸存在于甘薯中。甘薯是一种低能量的饲料，具有玉米的能量。用木薯取代部分玉米,可降低饲料成本,但如果配料不合理或饲喂未完全脱毒的木薯,不但会抑制畜禽的生长,而且会引起急性中毒。引发中毒的物质就是木薯中所含的氢氰酸。所以,如何快速准确测定木薯中氢氰酸的含量就变得非常重要。通过比较测定氢氰酸含量的方法,以期为广大饲料质检人员选择更好的氢氰酸测定方法提供依据。1试验材料和设备1.1试验样本广西产的木薯、木薯皮、去皮木薯。1.2主要设备样品粉碎机、电子分析天平、分光光度计。2分析测定方法2.1硝酸银滴注法2.1.1硝酸汞法计算氢氰酸含量将木薯浸入水中,使之发酵,析出氢氰酸,便可得到含氢氰酸的水溶液。将此溶液通入蒸汽蒸馏出氢氰酸,用过量的硝酸汞标准溶液吸收蒸馏出来的氢氰酸,最后以标定好的硫氰化钾(KCNS)滴定多余硝酸汞,由硝酸汞用量与剩余硝酸汞之差,即可算出样品中的氢氰酸含量。其化学反应如下:2.1.2糖酶解糖酶2.1.2.1准确称取木薯肉质50g(或木薯皮10～15g),磨碎后,用100～150ml蒸馏水洗入500ml的圆底烧瓶中,塞上瓶塞,在30～35℃下放置6h,经木薯配糖酶的作用,将木薯含氰配糖体水解为右旋糖、丙酮及氢氰酸。2.1.2.2将水解所得的含氢氰酸溶液,通入蒸汽蒸馏,蒸馏液通入事先加入的25ml0.007500mol/l的硝酸汞标准液中(木薯皮应该用50ml),使氢氰酸被充分吸收(在硝酸汞液中应预加4mol/l的硝酸1ml,使之呈酸性),蒸馏液约收集200ml后即可停止蒸馏。2.1.2.3在含硝酸汞的蒸馏液中,加40%铁铵矾[NH4Fe(SO4)2·12H2O]指示剂2ml,再用标准0.01500mol/l的硫氰酸钾溶液滴定蒸馏液中剩余的硝酸汞,至溶液呈淡黄色为止。2.1.3u3000kcns滴定将上述结果代入下式,可计算出木薯样品中的氢氰酸含量。V1———用KCNS滴定25ml(或50ml)Hg(NO3)2时消耗的体积(ml);V2———滴定剩余Hg(NO3)2时消耗的KCNS体积(ml);c———标准KCNS的浓度(mol/l);2.2硝酸银滴注法2.2.1碱液中氢氰酸的分离以氰苷形式存在于植物体内的氰化物经水浸泡水解后,进行水蒸气蒸馏,蒸出的氢氰酸被碱液吸收。在碱性条件下,以碘化钾为指示剂,用硝酸银标准溶液滴定定量。2.2.2试样中氰化物含量的测定2.2.2.1称取10～20g样品于凯氏烧瓶中,加水约200ml,塞紧瓶口,在室温下放置2～4h,使其水解。2.2.2.2将盛有水解试样的凯氏烧瓶迅速连接于水蒸气蒸馏装置,使冷凝管下端浸入盛有5%氢氧化钠溶液20ml的锥形瓶的液面下,通水蒸气进行蒸馏,收集蒸馏液150～160ml,取下锥形瓶。加入0.5%硝酸铅溶液10ml,混匀,静置15min,经滤纸过滤于250ml容量瓶中,用水洗涤沉淀物和锥形瓶3次,每次10ml,并入滤液中,加水稀释至刻度,混匀。2.2.2.4结果计算式中:X———试样中氰化物(以氢氰酸计)的含量(mg/kg);!m———试样质量(g);!c———硝酸银标准工作液摩尔浓度(mol/l);!V———试样测定硝酸银标准液消耗体积(ml);!Vo———空白试验硝酸银标准液消耗体积(ml);!54———1mol/l硝酸银溶液1ml相当于氢氰酸的质量(mg)。2.3吡啶-巴氏合金反应法2.3.1-羟基戊二烯醛法氰离子在弱酸性条件下与溴作用生成溴化氰,溴化氰与吡啶作用生成5-羟基戊二烯醛,再与巴比土酸作用生成紫红色的化合物,该化合物在可见分光光度计上,于580nm处有最大吸收峰,在一定浓度范围内,其光密度与氰化物含量成正比。据此,可测定氰化物的浓度。2.3.2测量步骤2.3.2.吡啶-巴比土酸溶液用量的测定取1mg/ml的氰氢酸标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5、2.0ml,置于10ml带塞具有刻度的比色管中,再分别加适量水补充至5ml。然后加10%醋酸0.2ml、溴水0.2ml,混匀,再加入吡啶-巴比土酸试剂1ml,混匀。放置半小时后,用分光光度计在580nm处测其光密度。以光密度为纵坐标、浓度为横坐标作图,即得标准曲线(见图1)。2.3.2.蒸馏液中氢氰酸含量的测定取检材10g,捣碎后,加适量水使之呈粥状,加10%酒石酸后呈酸性,然后进行水蒸气蒸馏,将蒸馏物吸收于100ml容量瓶中。容量瓶中预先加入5ml0.1mol/l氢氧化钠溶液,接收蒸馏液到近刻度,取下容量瓶加水稀释至刻度,摇匀备测。取上述蒸馏液5ml,加10%醋酸0.2ml,溴水0.2ml,混匀,再加入吡啶-巴比土酸试剂1ml,混匀,放置半小时后,用分光光度计在580nm处测定其光密度。从标准曲线上查出相应的HCN浓度。按下式计算检材中氢氰酸的浓度。式中:C———标准曲线上查出的氢氰酸浓度(mg/ml);V———蒸馏液总毫升数(ml);M———检材克数(g);W———每1000g检材含氢氰酸的毫克数。3测定结果的比较从表1可以看出,用吡啶-巴比土酸反应法测定饲料中的氢氰酸,其结果与硝酸银滴定法相差不大,而其相对误差也小。测定过程中,由于分光光度计的使用,结果更加准确,在微量情况下也能测定。缺点是耗时较长,不利于提高工作效率。另外,从表1上还可以看出,硝酸汞滴定法的测定结果与硝酸银滴定法的测定结果相差不大,标准差相近,均在国际法两个平行样品测定允许范围之内,说明硝酸汞滴定法与硝酸银滴定法的测定木薯中的氢氰酸有相同的准确性。4试样的制作、摩尔质量以及硝酸银标准工作液的制备对木薯、木薯肉质、木薯皮中氢氰酸测定的上述3种方法中,硝酸汞滴定法测定的是最好的,可以节省试剂,减少整个试验所需要的经费,在一般饲料检测中可以推广。Hg(NO3)2+2HCN→Hg(CN)2+2HNO3Hg(NO3)2+2KCNS→Hg(CNS)2+2KNO3式中:X———试样中氰化物(以氢氰酸计)的含量(mg/kg);27———HCN的摩尔质量(g/mol);m———木薯样品质量(g)。2.2.2.3准确移取100ml滤液