脐带间充质干细胞与类风湿性关节炎

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脐带间充质干细胞与类风湿性关节炎（完整版）实用资料(可以直接使用，可编辑完整版实用资料，欢迎下载）万方数据万方数据万方数据脐带间充质干细胞与类风湿性关节炎作者:李铭,王立华作者单位:李铭(解放军323医院细胞中心,陕西西安,710054,王立华(中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院刊名:西北国防医学杂志英文刊名:MedicalJournalofNationalDefendingForcesinNorthwestChina年,卷(期:2021,33(3被引用次数:1次参考文献(17条1.SymmonsD;TurnerG;WebbRTheprevalenceofrheumatoidarthritisintheUnitedKingdom:newestimatesforanewcentury20022.JiangH;ChessLAnintegratedviewofsuppressorTcellsuhsetsinimmunoregulation20043.BachJFRegulatoryTcellsunderscrutiny20034.黄志祥;郑奔荣;李天旺CD4+调节性T细胞及其在类风湿关节炎中的研究进展[期刊论文]-临床医学工程2021(105.PengSLTranslatingregulatoryTcellsinrheumatoidarthritis:revisitingthepast20076.Vukmanovic-StejicM;ZhangY;CookJEHumanCD4+CD25hiFoxP3+regulatoryTcellsarederivedbyrapidturnoverofmemorypopulationsinvivo[外文期刊]20067.ValenciaX;StephensG;Goldbach-ManskyRTNFdownmodulatesthefunctionofhumanCD4'CD25hiT-regulatorycells20068.ZhengZH;LiXY;DingJAllogeneicmesenchymalstemcellandmesenchymalstemcell-differentiatedchondrocytesuppresstheresponsesoftypeⅡcollagen-reactiveTsellsinrheumatoidarthritis2021(019.MorganME;FliermanR;vanDuivenvoordeLMEffectivetreatmentofcollagen-inducedarthritisbyadoptivetransferofCD25*regulatoryTcells200510.LawsonCA;BrownAK;BejaranoVEarlyrheumatoidarthritisisassociatedwithadeficitintheCD4+CD25highregulatoryTcellpopulationinperipheralblood200611.GaoJ;DemnisJE;SolchanaLATissueengineeredfabricationofanosteochondralcompositegraftusingratbonemarrowderivedmesenchymalstemcells2001(0412.赵霞;贺韦东;马明秀骨髓间充质干细胞体外对T淋巴细胞分泌IL-2、IL-4功能的影响[期刊论文]-中国免疫学杂志2021(0213.AugelloA;TassoR;NegriniSMCelltherapyusingallogeneicbonemarrowmesenchymalstemcellspreventstissuedamageincollageninducedarthritis2007(0414.黄鹏;马廉人脐带间充质干细胞应用研究现状[期刊论文]-中国输血杂志2021(0315.李楠脐带间充质干细胞与炎症性肠病[期刊论文]-山东医药2021(1616.王黎明;周建军;白雯脐带间充质干细胞治疗17例类风湿性关节炎患者的临床疗效观察2021(0717.栗占国;张奉春;鲍春德类风湿关节炎2021引证文献(1条引用本文格式:李铭.王立华脐带间充质干细胞与类风湿性关节炎[期刊论文]-西北国防医学杂志2021(3ofInflammationandTissueDamageinAcuteandChronicRelap-singEAE[J].MagneticResonanceinMedicine,2003,50:309.[10]BBrochet,MSA.Deloire,T.Touil,etal.EarlymacrophageMRIofinflammatorylesionspredictslesionseverityanddiseasede-velopmentinrelapsingEAE[J].NeuroImage,2006,32:266.[11]ChinetCL,PaiM,BousquetPF,etal.DistinctspatiotemporalpatternofCNSlesionsrevealedbyUSPIO-enhancedMRIinMOG-inducedEAEratsimplicatestheinvolvementofspino-olivocerebellarpathways[J].JournalofNeuroimmunology,2021,211:49.[12]于国平,朱克,梁显胤,等.实验性自身免疫性脑脊髓炎的小胶质细胞和星形胶质细胞反应[J].中华神经科杂志,1999,32(2:86.(收稿日期:2021-12-24基金项目:吉林省科技厅资助课题(200505193*通讯作者文章编号:1007-4287(202101-0011-03小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及鉴定赵继学1a,王广义1b,张海玉1a*,伏鑫2(吉林大学1.第一医院a.儿外科;b.普外科,吉林长春130021;2.中日联谊医院摘要:目的探讨分离、培养、纯化和鉴定小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs方法,观察MSCs体外生长特征。方法取小鼠胫骨和股骨,取出骨髓细胞,用1.073g/ml的Percoll分离液梯度离心,培养皿培养、换液除去非贴壁细胞,获得MSCs,通过传代对MSCs进行纯化和扩增培养。进行形态学观察,测定生长曲线,用流式细胞仪检测P3代MSCs细胞周期及表面抗原。结果新分离的MSCs呈小圆形,形态规整。培养传代后,细胞大小均匀,形态较一致,多为梭形。P1、P2、P3代MSCs生长曲线均呈S型。P3代MSCs75.27%的细胞处于G0-G1期。P3代MSCsCD44表达阳性,表达率为88.71%,CD34表达阴性。结论利用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离纯化骨髓MSCs,在含15%FBS的DMEM-LG培养基中培养MSCs,可获得稳定生长的昆明小鼠MSCs。培养的MSCs细胞系性状稳定,表型稳定均一,适于做进一步研究。关键词:骨髓间充质干细胞;细胞培养;鉴定;小鼠中图分类号:Q78文献标识码:AIsolation,cultivation,purificationandidentificationofmicebonemarrowmesenchymalstemcellsinvitroZHAOJi-xue,WANGGuang-yi,ZHANGHai-yu,etal.(TheFirstHospitalofJilinUniversity,Changchun130021,ChinaAbstract:ObjectiveToexploreanewmethodfortheisolation,cultivaton,purificationandidentificationofMSCsandobservethebiologicalfeaturesofmiceMSCsinvitro.MethodsBonemarrowwasextractedfromthetibiaandthighboneofmice.Themarrowliquidwereisolatedwith1.073g/mloercoll.MSCswereobtainedbyremovingthenon-adherentcells.ThentheMSCswerepurifiedandexpandedthroughpassageintime.Thegrowthcurvewasdrawnandthemorphologywasobserved.CellcycleandtheantigenexpressionofP3MSCsweremeasuredwithFACS.ResultsTheMSCsexhibitedasmallroundshapeafterfreshseparation.Aftercultivatedandpassaged,theMSCswerehomoge-nenouslyfusiformshaped.ThegrowthcurvesofP1,P2andP3MSCswere“S”shape.ThecellsofG0-G1stageaccountfor75.27%.TheexpressionofCD44waspositive,whiletheexpressionofCD34wasnegative.ConclusionThemeth-odofdensitygradientcentrifugationcombinedwithadherentculturecouldisolateMSCsfrombonemarrowsimplely.DMEM-LGmediumsupplementedwith15%fetalbovineserumissuitableforthecultureofMSCs.TheculturedMSCslineageisstableandcanbeusedforfurtherresearch.Keywords:Bonemarrowmesenchymalstemcells;Cellculture;Identification;Mice(ChinJLabDiagn,2021,16:0011骨髓间充质干细胞(MSCs是骨髓中存在的除造血干细胞(HSCs外的另一类干细胞。由于其来源充足,取材相对方便,易于体外扩增,以及免疫原性低等优势,已经在组织工程和移植领域得到了广—11—中国实验诊断学2021年1月第16卷第1期泛的关注。本实验旨在建立一种分离、培养、纯化及鉴定MSCs的方法,并对其生物学特性进行研究,为后续利用骨髓MSCs治疗肝脏疾病的研究提供稳定的干细胞模型。1材料与方法1.1材料与试剂清洁级昆明小鼠,雌雄兼用,体重25±2g,购自吉林大学实验动物中心[合格证号:SCXK(吉2003-0001];DMEM培养基(美国GibcoBRL公司;胎牛血清(美国Hyclone公司;淋巴细胞分离液(上海恒信公司,0.25%胰蛋白酶(华美公司,兔抗鼠CD34、CD44荧光抗体(美国PHARMINGEN公司。1.2方法1.2.1骨髓MSCs的体外分离、培养及扩增断颈处死小鼠,超净台上取胫骨和股骨,切开两端松质骨,并在骨干中部剪断,无血清DMEM-LG培养基冲出骨髓细胞,制成单细胞悬液,经Percoll密度梯度离心法,分离和收集有核细胞,用含15%FBS的DMEM-LG培养基重悬离心管中的MSCs,镜下细胞计数,使细胞密度达到1×106个/ml,CO2培养箱培养,换液,将MSCs不断纯化。当细胞生长融合达80%-90%时,用1∶1的0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化分散细胞,在显微镜下控制消化时间,计数细胞,以1∶3密度扩增培养。此时标记为P1代,以后每3-4d换液1次;当细胞生长融合达80%-90%时,继续以1∶3的密度传代扩增培养,传代培养并记为P2代,余类推。倒置相差显微镜逐日观察细胞形态和生长情况。1.2.2骨髓MSCs生长曲线的绘制取对数生长期的P1、P2、P3代MSCs以1.0×105/ml密度分别接种在96孔培养板中,每3孔为一组,每孔100μl。分别在接种后的第1d、2d、3d、4d、5d、6d,以MTT法测细胞活力。每孔加入MTT溶液(5g/l10μl,混匀。继续培养4h,终止培养,小心吸弃孔内上清液。每孔加入100μlDMSO溶液,振荡,镜下观察结晶物充分溶解后,在酶联免疫检测仪上测定各孔在490nm波长处的光吸收值,每组取3孔测定值的平均值。以天数为横轴,OD值为纵轴绘制细胞生长曲线。1.2.3骨髓MSCs的细胞周期分析取生长状态良好的P3代细胞,0.25%胰酶消化,制成单细胞悬液,采用流式细胞仪直接荧光法检测细胞周期。其中激发光源为15mW氩离子激光,波长488nm。FACS软件收集细胞,Lysis软件分析处理数据,记录阳性细胞百分率。1.2.4骨髓MSCs表面抗原检测取生长状态良好的P3代小鼠骨髓MSCs,用1:1的EDTA(0.02%和胰蛋白酶(0.25%混合液进行消化,离心后弃去培养基。PBS洗涤后制成浓度为1×106/ml的单细胞悬液。在3个管中各加100μl细胞悬液,并标记为1,2,3号。在1、2号管中分别加入兔抗鼠CD34-FITC10μl,CD44-FITC10μl,3管中加入抗人IG-FITC10μl,3管为阴性对照。室温孵育30min,流式细胞仪检测。2结果2.1昆明小鼠骨髓MSCs的基本形态新分离的MSCs呈小圆形,形态规整。MSCs传代培养的细胞大小均匀,形态较一致,多为梭形,此时细胞不再以成克隆的方式生长,而是散在分布生长。MSCs连续传3代,细胞形态无明显变化,无衰老征象,传代周期6-7d。表明MSCs得到了进一步的纯化及扩增。P3代后的MSCs能较好的用于后期实验。2.2骨髓MSCs生长曲线测定由MTT法测定小鼠P1、P2、P3代各个时间点骨髓MSCs活率,绘制的生长曲线呈S型(见图1,由图可见,MSCs在接种后第1-2d为潜伏期,随后便快速增殖,进入对数生长期,持续2-3d,此后细胞增长逐渐减缓,进入平台期。P3代的MSCs能较好的用于后期实验。2.3骨髓MSCs细胞周期分析结果取生长良好的三代细胞,采用流式细胞仪直接荧光法,检测细胞周期,记录阳性细胞百分率,见图2。由图可见,75.27%的细胞处于G0-G1期,表明MSCs具有强大的分化增殖能力。2.4骨髓MSCs表面抗原的表达流式细胞仪检测显示P3代小鼠骨髓MSCs强表达CD44,表达率为88.71%,基本不表达造血细胞表面标志CD34。(见图3。3讨论骨髓MSCs是具有多向分化潜能和高度自我更新能力的组织干细胞。研究证实骨髓MSCs不仅可以分化为与其组织来源一致的细胞,而且具有跨系或跨胚层分化为不同组织来源细胞的潜能。但骨髓中MSCs的数量极少,仅占0.001%-0.01%[1],要利用MSCs就必须对其进行体外分离、扩增。现体外分离得到均一的骨髓MSCs的方法逐渐—21—ChinJLabDiagn,January,2021,Vol16,No.1图1MSCs生长曲线图2MSCs细胞周期图3MSCs表面抗原的表达A:CD34,B:CD44成熟,而通过体外扩增获得足够数量的间充质干细胞己实现。分离骨髓MSCs的方法主要有四种:贴壁筛选法[2]、密度梯度离心法[3]、免疫磁珠分离法[4]、流式分选法[5]等。后两种方法是目前获得MSCs纯度最高的方法,然而该方法操作复杂、费用及设备要求较高。在分离中对细胞活性有一定影响。我们使用密度梯度离心和贴壁筛选相结合,利用Percoll(1.073g/ml分离液将大部分造血细胞与单个核细胞分离开来,并经过体外贴壁培养一段时间,通过换液去除悬浮生长的造血细胞,获得较理想的骨髓MSCs。我们用生长曲线来描述骨髓MSCs的生长繁殖能力,骨髓MSCs生长曲线分潜伏适应期、对数生长期和平台期。发现昆明小鼠P1、P2、P3代骨髓MSCs的生长曲线均呈S型。骨髓MSCs的生长性状稳定,P1、P2、P3代细胞的形态、生长曲线无明显差别,潜伏适应期1-2d,对数生长期2-3d,传代周期约6-7d。MSCs具有无限增殖的能力,但前提是必须具备MSCs体外生长的最佳环境。目前公认MSCs的培养必须用FBS做支持[6],合适的血清浓度对细胞的生长具有关键性的作用。血清中含有多种营养成分,对细胞的生长起着重要作用,但培养基中血清的浓度并非越高越好。张怡等[7]实验证实,血清浓度<10%不利于细胞生长;10%-15%时,细胞增殖旺盛,形态均一;当血清浓度>15%时,易引起骨髓MSCs分化而影响增殖。本实验采用15%FBS的DMEM-LG培养基培养骨髓MSCs,细胞增值速度快,表形均一,得到了理想的传代细胞。MSCs的表型不均一,分别具有间充质细胞、上皮细胞和内皮细胞的特点。所以过去一直没有发现MSCs特异性的表面标志物。一般认为,MSCs对SH2、SH3、CD29、CD44、CD77、CD90、CD106、CD120a、CD124等都呈阳性反应,对CD1a、CD31、CD34、CD14、CD45、CD56等成阴性反应[8,9]。大多数实验室通过MSCs不表达CD14、CD34及CD45,而表达CD44、CD90、CD106等标志,对MSCs进行初步鉴定。目前尚未发现MSCs特异性标记分子,可联合应用多种抗体帮助分离鉴定MSCs。本实验中利用密度梯度离心法结合MSCs贴壁生长的特性,从成年昆明小鼠骨髓中分离、扩增培养获得形态均一的细胞集落。流式细胞仪检测结果提示75.27%的细胞处于G0-G1期,表明MSCs具有强大的分化增殖能力。分离培养的骨髓MSCs强表达CD44,而造血谱系标记CD34基本不表达,说明所分离的细胞是有别于骨髓HSCs的MSCs,培养的P3代细胞均一性较好。参考文献:[1]PhinneyDG,KopenG,IsaacsonRL,etal.Plasticadherentstro-malcellsfromthebonemarrowofcommonlyusedstrainsofin-bredmice:variationsinyield,growth,anddifferention[J].JCellBiochem,1999,72(4:570.[2]FriedensteinAJ,ChailakhyanRK,GerasimovUV.Bonemarrowosteogenicstemcells:inVitrocultivationandtransplantationindiffusionchambers[J].CellTissueKinet,1987,20(3:263.[3]张本斯,王凡,邓力,等.大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与初步鉴定[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2003,12:161.[4]EncinaNR,BillotteWG,HofmannMC.Immunomagneticisola-tionofosteoprogenitorsfromhumanbonemarrowstroma[J].LabInvest,1999,79(4:449.[5]ZoharR,SodekJ,McCullochCA.Characterizationofstromalprogenitorcellsenrichedbyflowcytometry[J].Blood,1997,90(9:3471.[6]KicicA,HallCM,ShenWY,etal.Arestemcellcharacteristicsalteredbydiseasestate[J]StemCellsDev,2005,14(1:15.[7]张怡,赵连三,唐红.小鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养[J].生物医学工程学杂志,2004,21(5:746.[8]CongetPA,MinguellJJ.Phenotypicalandfunctionalpropertiesofhumanbonemarrowmesenchymalprogenitorcells[J].JCellPhysiol,1999,181(1:67.[9]PittengerMF,MackayAM,BeckSC,etal.Multi-line-agepoten-tialofadulthumanmesenchymalstemcells[J].Science,1999,284(5411:143.(收稿日期:2021-11-30—31—中国实验诊断学2021年1月第16卷第1期造血干细胞造血干细胞（Stemcell，SC）是指骨髓中的干细胞，具有自我更新能力并能分化为各种血细胞前体细胞，最终生成各种血细胞成分，包括红细胞、白细胞和血小板，它们也可以分化成各种其他细胞。它们具有良好的分化增殖能力，干细胞可以救助很多患有血液病的人们，最常见的就是白血病。但其配型成功率相对较低，且费用高昂。捐献造血干细胞对捐献者的身体并无很大伤害。造血干细胞基本介绍造血干细胞（HemopoieticStemcell，HSC）的干，译自英文“stem”，意为“树”、“干”和“起源”。类似于一棵树干可以长出树杈、树叶，并开花和结果等。通俗地讲，造血干细胞是指尚未发育成熟的细胞，是所有造血细胞和免疫细胞的起源，它不仅可以分化为红细胞、白细胞和血小板，还可跨系统分化为各种组织器官的细胞，具有自我更新、多向分化和归巢（即定向迁移至造血组织器官）潜能。因此是多功能干细胞，医学上称其为“万用细胞”，也是人体的始祖细胞。干细胞是具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，是机体的起源细胞，是形成人体各种组织器官的祖宗细胞。造血干细胞有两个重要特征：其一，高度的自我更新或自我复制能力；其二，可分化成所有类型的血细胞。造血干细胞采用不对称的分裂方式：由一个细胞分裂为两个细胞。其中一个细胞仍然保持干细胞的一切生物特性，从而保持身体内干细胞数量相对稳定，这就是干细胞自我更新。而另一个则进一步增殖分化为各类血细胞、前体细胞和成熟血细胞，释放到外周血中，执行各自任务，直至衰老死亡，这一过程是不停地进行着的。造血干细胞造血原理造血干细胞造血干细胞（hemopoieticstemcell）又称多能干细胞。是存在于造血组织中的一群原始造血细胞。也可以说它是一切血细胞（其中大多数是免疫细胞）的原始细胞。由造血干细胞定向分化、增殖为不同的血细胞系，并进一步生成血细胞。人类造血干细胞首先出现于胚龄第2～3周的卵黄囊，在胚胎早期（第2～3月）迁至肝、脾，第5个月又从肝、脾迁至骨髓。在胚胎末期一直到出生后，骨髓成为造血干细胞的主要来源。具有多潜能性，即具有自身复制和分化两种功能。在胚胎和迅速再生的骨髓中，造血干细胞多处于增殖周期之中；而在正常骨髓中，则多数处于静止期（G0期），当机体需要时，其中一部分分化成熟，另一部分进行分化增殖，以维持造血干细胞的数量相对稳定。造血干细胞进一步分化发育成不同血细胞系的定向干细胞。定向干细胞多数处于增殖周期之中，并进一步分化为各系统的血细胞系，如红细胞系、粒细胞系、单核-吞噬细胞系、巨核细胞系以及淋巴细胞系。由造血干细胞分化出来的淋巴细胞有两个发育途径，一个受胸腺的作用，在胸腺素的催化下分化成熟为胸腺依赖性淋巴细胞，即T细胞；另一个不受胸腺，而受腔上囊（鸟类）或类囊器官（哺乳动物）的影响，分化成熟为囊依赖性淋巴细胞或骨髓依赖性淋巴细胞，即B细胞。并分别由T、B细胞引起细胞免疫及体液免疫。如机体内造血干细胞缺陷，则可引起严重的免疫缺陷病。造血干细胞分化造血干细胞是血细胞（红细胞、白细胞、血小板等）的鼻祖，是高度未分化细胞，具有良好的分化增殖能力，干细胞可以救助很多患有血液病的人们（如白血病）。因为造血系统原始细胞恶性增生、不会凋亡，从而导致了白血病发病，而救助他们的方法就是将这些恶性细胞全部杀灭，但是化疗是敌我不分得，在杀灭癌细胞的同时也杀死了正常的造血干细胞，导致人体血细胞缺乏，危及病人生命。当病人需要根除白血病时，就要一次性杀灭癌细胞，但是这样超大剂量的化疗往往也将正常干细胞杀灭的寥寥无几。为了让病人尽快恢复造血功能，挽救病人的生命就需要输注造血干细胞，这就是我们所知道的骨髓移植。但是自体的骨髓移植虽然成功率大，排异反应小，但是在采集的时候难免会混杂有白血病细胞，造成以后复发的来源，所以有时需要进行异基因骨髓移植。但是不是任何人的骨髓拿来都可以移植的，如果两个人免疫标记相差太大就会造成过强的排异反应，使得移植失败，病人死亡。您在血液中心采集的干细胞样本，将会送到骨髓库进行基因存档，当有病人需要异基因骨髓移植，而他和您的骨髓配型相近的话，血液中心会通知你捐献干细胞，也就是献骨髓。它不是想象中的那么可怕，对身体也无害，就是将您的血液循环到一个采集机器中，机器自动采集，就像献血一样.造血干细胞主要作用造血干细胞移植技术的发现和应用：骨髓移植技术的发现生命科学是二十世纪发展最为迅猛的学科之一，已经成为自然科学中最引人注目的领域。1957年，美国华盛顿大学多纳尔·托玛斯发现正常人的骨髓移植到病人体内，可以治疗造血功能障碍。这一技术的发现，使多纳尔·托玛斯本人荣获了诺贝尔奖。这一技术很快得到全世界的认可，并已成为根治白血病等病的主要手段。造血干细胞移植技术的发现和应用为人类战胜疾病带来新的希望。骨髓移植可治疾病造血干细胞移植是现代生命科学的重大突破。造血干细胞移植可治疗恶性血液病，部分恶性肿瘤，部分遗传性疾病等75种致死性疾病。包括急性白血病、慢性白血病、骨髓增生异常综合征、造血干细胞疾病、骨髓增殖性疾病、淋巴增殖性疾病、巨噬细胞疾病、遗传性代谢性疾病、组织细胞疾病、遗传性红细胞疾病、遗传性免疫系统疾病、遗传性血小板疾病、浆细胞疾病、地中海贫血、非血液系统恶性肿瘤、急性放射病等。因为有了造血干细胞移植技术，世界各地成千上万患有以上疾病的患者，重新燃起了生命的希望。捐献介绍生理上无损健康人体血液中有多种血细胞，红细胞、白细胞、血小板等，它们都是有寿命的，多则120天，少则36小时，不断新陈代谢。它们均来自于一种始祖细胞，我们称它为造血干细胞。造血干细胞具有高度的自我更新、自我复制的能力，可分化生成各种血细胞。造血干细胞有很强的再生能力，失血或捐献造血干细胞后，可刺激骨髓加速造血，1-2周内，血液中各种成分可恢复到原来水平。适龄、健康的志愿者捐献造血干细胞后，由于血细胞数量减少，会促使骨髓把储备的白细胞释放，并刺激骨髓造血功能，促使血细胞的生成，不会影响身体健康。人体的造血干细胞主要存留在长骨的骨髓腔和扁平骨的稀松骨质间的网眼内，这是一种红色的海绵状组织，被称为红骨髓。人出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄长大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓变成黄骨髓。此种变化是由于成人不需要全部骨髓参加造血，部分骨髓造血已经足够补充所需血液。当身体严重缺血时，部分黄骨髓又可以变成红骨髓而继续进行造血。实践上证明安全我国大陆已经采集1700多例造血干细胞，这是无血缘关系的，有血缘关系的则更多；台湾已经采集800多例造血干细胞（大部分为骨髓）。国际上美国已经采集2万多例造血干细胞（大部分为骨髓）；日本已经采集5500多例造血干细胞（全部是骨髓）。据多年的临床观察和国际上的报道，至今还没有因采集外周血造血干细胞引起对捐献者伤害的案例。在采集完成后，一些轻微疼痛感和不适将很快消失。动员剂安全可靠从外周血采集造血干细胞简单、省事，故我国捐献造血干细胞较多采用此种方法。但在正常生理条件下，外周血的造血干细胞数量少，不能满足移植的需要，如注射细胞动员剂,可使外周血造血干细胞增加20~30倍。目前使用的细胞动员剂是“粒一巨噬细胞集落刺激因子（GM--CSF）”，除能增加外周血造血干细胞的数量外，还有辅助心脏功能等作用。据多年的临床观察和国际上的报道，至今还没有发现其对人体健康的危害和副作用。采集量和标准成年人（18～45岁）的骨髓量一般在3000克左右，大部存于骨髓腔。成人一例采集量为50—200ml造血细胞悬液，采集次数不超过2次。一般循环处理血量不少于10000ml。CD34+＞2×106/kg、MNC＞5×108/kg。每天检测CD34+量，在最高峰时间采集，对捐献者本身无不良影响。采集技术成熟中华骨髓库有经专家委员会审定的移植医院和采集医院（中心），在这样的医院里采集造血干细胞如同采集成分血一样简单、安全。在整个采取过程中所用的器材都经过严格消毒，并一次性使用，确保了捐献者的安全。骨髓与骨髓的功能血液是由血浆（血液中的液体部分）和血细胞（红细胞、粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、血小板等）组成的红色、不透明并带粘性的液体。正常成人的总血量约为体重的8％。血液在血管内流动不息，是人体内运输营养物质、携带代谢产物、调节内环境平衡及行使防御功能的条条“河流”。人们对血液的认识是逐渐加深的。古代埃及人提倡以血液来沐浴，旨在返老还童或恢复健康。1900年红细胞ABO血型发现之前，许多人因血型不符的输血而发生严重的溶血反应甚至死亡。1929年发明了骨髓穿刺针，从此骨髓细胞才成为血液学研究的一个重要部分。正常人体的血细胞维持数量和功能相对恒定。这种恒定是新陈代谢的动态平衡，即衰老、死亡的细胞经常不断地被新生的细胞所取代。例如人类红细胞的平均寿命约为120天，血小板的寿命约7－10天。一个正常成年人每天约有10个红细胞衰老死亡；同样也有相近数量的红细胞新生。成年人的造血器官主要局限在骨髓、脾脏以及淋巴结中。但脾脏及全身淋巴结在出生后主要作用是促使淋巴细胞的第二次增殖，即淋巴细胞在接触抗原后繁殖的免疫反应。所以骨髓造血功能显得尤为重要。出生后，骨髓在正常情况下是唯一产生红细胞、粒细胞和血小板的场所，骨髓也产生淋巴细胞和单核细胞。骨髓是存在于长骨（如肱骨、股