丹参对失血性休克再灌注大鼠肾损伤的保护作用

丹参对失血性休克再灌注大鼠肾损伤的保护作用

对缺血和再灌注也很敏感。再灌注（h-r）通常会导致肾脏再灌注损伤和急性肾功能衰竭。近年来,氧自由基在缺血再灌注损伤的发生中起重要作用已达成共识。本实验通过观察HS-R大鼠肾损伤时肾脏组织自由基的变化以及复方丹参注射液对HS-R大鼠肾脏损伤的治疗作用,探讨HS-R大鼠肾损伤的机制及丹参的治疗机制,以期为临床治疗休克提供实验依据。1材料和方法1.1复方有效克氏原螯虾sm组雄性SD大鼠30只,体重260~310g(温州医学院实验动物中心提供,医动字第220030002号),实验前禁食12h,可自由饮水,随机分为正常对照组(NC组)、失血性休克再灌注组(HS-R组)和丹参治疗组(SM组,复方丹参注射液由上海第一生化药业公司生产,批号:020137),每组10只。各组动物腹腔注射25%乌拉坦(5mg/100g体重),麻醉后气管插管,保持气管通畅,左颈总动脉插管以放血用,右侧颈外静脉插管供注入药物及血液回输。HS-R组和SM组动物颈动脉放血至平均动脉压(MAP)40mmHg,维持90min后回输全部失血和等量无菌生理盐水(50滴/min),SM组按8g/kg体重在血液回输前1min经颈静脉缓慢注入复方丹参注射液,HS-R组以等量生理盐水代替丹参。回输结束后2h,取血测定肾功能,取肾组织测定自由基指标,并作病理学检测。1.2检测方法1.2.1肾功能测试尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)在自动生化分析仪上测定。1.2.2抗氧化酶活性测定取肾组织制备匀浆(按照南京建成生物工程研究所提供的组织匀浆制备方法),检测肾组织超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量,以上试剂盒均购自南京建成生物工程研究所,检测方法按说明书操作。1.2.3组织病理学检查取肾组织,4%多聚甲醛中固定,石蜡包埋切片,HE染色后光镜下观察。1.3a分析的检验组间比较用One-WayANOVA分析后,采用Student-Newman-Keuls检验,方差不齐时采用Levenetest检验。2结果2.1血浆bun和cr值HS-R组和SM组血浆BUN、Cr值与NC组比较,显著升高(P<0.05),但SM组血浆BUN和Cr值均显著低于HS-R组(P<0.05),见表1。2.2各组肾组织中da、mda和no含量的比较与NC组相比较,HS-R组和SM组肾组织的SOD、GSH-PX活性显著下降,而XOD活性、MDA含量明显增高,HS-R组肾组织的NO含量明显增高;SM组的SOD活性比HS-R组明显增高,MDA和NO含量明显低于HS-R组,以上差异均有统计学意义。与HS-R组比较,SM组肾组织GSH-PX活性有增高趋势,XOD活性有下降趋势,但以上二个指标的差异没有统计学意义,见表2。2.3各组大鼠肝肾的组织病理学和组织学检查光镜下可见,HS-R组大鼠肾组织病变明显,肾小球皱缩,肾小囊腔扩张,肾小管上皮细胞有不同程度的细胞变性,坏死和脱落,肾间质有大量炎细胞浸润,并出现水肿,SM组大鼠肾脏的病变明显轻于HS-R组。3复方丹参对失血性休克再灌注损伤肾组织抗氧化活性的作用肾是一个高血流的器官,对缺血和再灌注均十分敏感,易出现失血性休克再灌注肾损伤(HS-RRI),甚至发展为再灌注肾功能衰竭。本研究发现,失血性休克补液治疗后2h,大鼠的肾功能明显下降,肾脏出现严重的组织学病变。Glaumann等首先提出了肾缺血再灌注损伤(RIRI)的概念,包括2种类型:单纯型RIRI,如夹闭肾动脉引起的肾损伤;全身型RIRI,如休克后微循环再通引起的肾损伤,对前者的研究较多,后者受全身因素影响较大,对其研究较少。大多数学者认为脏器的缺血再灌注损伤机制包括自由基生成增多、细胞内钙超载及细胞粘附分子的作用等,其中对于自由基的作用研究得最为广泛。在缺血再灌注损伤过程中,可通过多种途径产生氧自由基,目前认为主要通过黄嘌呤氧化酶的形成增多、中性粒细胞的呼吸爆发、线粒体功能损伤和儿茶酚胺的自身氧化产生大量的氧自由基。自由基可与各种细胞成分,如膜磷脂、蛋白质、核酸等发生反应,造成细胞结构损伤和功能代谢障碍。本研究表明,失血性休克再灌注2h时,肾组织的SOD和GSH-PX活性显著下降,而XOD活性、MDA和NO含量明显增高。NO是一种潜在的舒血管物质,与肾缺血再灌注损伤的发生密切相关,肾脏基础水平的NO对维持其血流及肾小球滤过率具有重要作用。肾组织NO含量在再灌注后会明显增加,过量的NO会有损伤作用,因为再灌注后组织中大量产生的NO可与氧自由基产生迅速反应生成更具细胞毒性的自由基ONOO(过氧化亚硝基)等,从而造成细胞功能的进一步损害。本实验提示失血性休克再灌注2h时,即发生肾组织氧自由基生成增加,清除能力下降,从而使肾脏有大量的氧自由基蓄积,脂质过氧化增强,造成肾脏结构损伤和功能明显下降。近年来许多研究表明,丹参对重要器官的缺血再灌注损伤有保护作用,在于其具有很强的抗氧化活性,消除自由基,增强机体的抗氧化能力。丹参的二萜醌成分可解除血小板聚集,改善微循环灌注,减少ATP消耗;直接作用于细胞膜受体操纵性钙通道,增强Ca2+泵主动转运,增速Ca2+外排内摄,使细胞内游离钙浓度降低,减少黄嘌呤脱氢酶向黄嘌呤氧化酶的转化,因此减少了细胞