细胞培养技术考题

细胞核血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。(在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。)而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。(用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。)4.如何消除组织培养的污染？确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔HEPA体的选择和 (三)操作人员严格遵守无菌操作规程。(四)培养基及接种工器具要严格灭菌，确保灭菌质量。 (五)在培养基中加入适量的抗生素。(六)利用病毒在植株体内分布不均匀的原理，生产脱毒苗。 (七)利用培养基中高盐或高糖的浓度，抑制微生物的生长。(八)减少培养基中的某些有机成分，可抑制微生物的生长繁殖。种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。由EDTA料的吸光值，可间接的反应活细胞数量。仪器。高压锅，储品柜(放置未消毒物品)，储品规(放置消毒过的物品)，包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平(称量药品)，PH计(测量培养用液PH值)，磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)，冰箱(-80℃)，空调，二氧化碳缸瓶，边台(书写实验记录)。必须放在无菌间的设备：离心机(收水冲洗)消毒前常用的包装材料：牛皮纸、棉布、铝饭盒*胚浸液))和合成培养基(包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物；目前常用培养.如何进行细胞计数，注意什么，细胞计数法：就是从需要计数的细胞悬液中取出一定量细胞进行计0倍。实验步骤(一)准备计数板：用酒精清洁计数板和盖玻片，然后用吸水纸轻轻擦干。(二)度不低于104/ml，若细胞数很少，应将悬液离心(1000rpm，2min)，重悬浮于少量培养液中。 片擦干净重新加样。(四)计数：在显微镜下，用10×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数，细胞数之和/4)×104×稀释倍数)注意事项(一)消化单层消而活细胞拒染呈无色透明状；6、统计细胞活力：活细胞率(%)=活细胞总数/(活细胞总数+死细胞横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。 n液氮中取出冷冻管，迅速投入37℃-38℃水浴中，使其融化(1分钟左右)；(2)5分钟内用培养液过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。)immunohistochemistry疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。实验步骤(1)使用多聚赖氨酸防脱载玻片贴4μm石蜡切片。(2)58℃烤片4小时。(3)切片脱蜡nn×3次。(8)滴加非免疫动物血清，室温孵育20min，封闭抗体非特异性结合位点。(9)甩去非免1)滴加二抗(二抗操作步骤视选用的免疫酶组织化学方法而定)(12)PBS洗5min×3次。(13)DAB或AEC显色3-10min，显微镜下监控显色程度，水洗。(14)苏木精复染，水洗。(15)1%盐酸酒精分化数秒，水洗。(16)饱和碳酸锂水溶液返蓝，水洗。(17)梯度酒精脱水，透明，封片IP组化方法背景往往很过二抗募集大量的链酶亲和素—过氧化物酶复合物，形成链霉亲和素复合体(SABC)。大量的酶将保DNA过DNA复制DNA体外合成放大过程生物体内DNA合成DNA引物(作为新链的一部RNA引物(复制终止DNA聚合酶酶酶0.1~2ug引物设计的原则是最大限度地提高扩增效率和特异5-5ng.1-10ng性；同时尽可能减少非特异性扩增1)引物长度要合适，一般为16~30个核苷酸，常用20bp左串排列，最好随机分布。否则易使引物与模板的嘌呤或嘧啶密集区发生错配。4)引物内部不能存在形成引物二聚体。6)AT采取的