基因工程专题复习

基因工程专题复习DNA重组技术的基本工具DNA重组技术的基本工具1）限制性核酸内切酶2）DNA连接酶3）基因进入受体细胞的载体识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。1、来源：2、作用：3、结果：形成两种末端“分子手术刀”——限制酶黏性末端平末端GAATTCGCTTAAAATTCG限制酶切割ＤＮＡ分子示意图CTTAAG思考

要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？两个切口，四个黏性末端。黏性末端黏性末端什么叫平末端？“分子缝合针”—ＤＮＡ连接酶

１.作用：连接磷酸二酯键,而不是氢键。E.coliDNA连接酶：连接黏性末端T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端２.DNA连接酶的种类DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链连接部位相同点双链单链在两DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成磷酸二酯键都能形成磷酸二酯键

“分子运输车”—载体1.载体的必要条件能自我复制，或能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；有一个至多个限制酶切割位点具有某些标记基因对受体细胞无害2.常用的载体：质粒、噬菌体的衍生物和动植物病毒。基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序主要包括四个基本步骤：1）目的基因的获取2）基因表达载体的构建3）将目的基因导入受体细胞4）目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取(一)、目的基因主要是______________________编码蛋白质的结构基因（二）、获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成1、从基因文库中获取目的基因

将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库.基因文库

基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）（1）.基因文库:文库类型cDNA文库基因组文库文库大小小大基因中启动子无有基因中内含子无有基因多少某种生物的部分基因某种生物的全部基因物种间的基因交流可以部分基因可以⑵基因文库的构建方法:①直接分离法(鸟枪法)基因组DNA文库的构建cDNA文库的构建②反转录法①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：___________、_______________、___________、___________

.②原理：__________多聚酶链式反应体外特定DNA片段DNA双链复制模板DNA四种脱氧核苷酸DNA引物热稳定DNA聚合酶2.利用PCR扩增目的基因④过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。氢键单链DNADNA链3.人工合成（基因较小、核苷酸序列已知）——根据已知的氨基酸序列合成DNA蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成二、基因表达载体的构建——核心质粒目的基因限制酶处理一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶表达载体同一种1.过程:a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代b、同时使目的基因能表达和发挥作用思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？2、基因表达载体的作用3.基因表达载体的组成：它们有什么作用？a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因位于基因的首端,是mRNA结合位点位于基因的末端,终止转录检测目的基因是否导入受体细胞常用的受体细胞：

有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。三、将目的基因导入受体细胞1、将目的基因导入植物细胞①农杆菌转化法-------双子叶植物和裸子植物T-DNA②基因枪法--------单子叶植物③花粉管通道法2、将目的基因导入动物细胞显微注射技术：将基因表达载体提纯，用显微注射仪注射到受精卵中3、导入微生物细胞①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少用Ca2+处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子②方法：四、目