elisa法检测结果不安全

elisa法检测结果不安全

该部门使用elisa法进行检测，以用于住院、诊所需要输血的住院、手术前和胃镜检查前的必要检测项目。但ELISA法影响因素较多,包括试剂和样本准备、加样、温育、洗板、显色和比色,每个环节不规范操作均会对测定结果产生影响,现将影响因素和解决办法小结如下。1步法与速度法我科使用的ELISA试剂,选择灵敏度高,特异性强,精密度好,稳定性好,并使用两步法,避免一步法ELISA试剂盒所致的假阴性问题。选用与仪器配套的试剂,不要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂。试剂使用前从冰箱取出需放置于室温平衡30min。2内源性干扰因素血清标本中有可能含有干扰试验的免疫物质,导致假阳性或假阴性结果,干扰因素一般可分为两类,即内源性和外源性。内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体及某些自身抗体等,避免内源性干扰因素主要通过选择合适的试剂。外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长及标本凝固不全等。3操作因素3.1例如，添加3.2孔内影响检测ELISA板置于水浴箱中,温育时要贴封纸,防止孔内液体成分蒸发或水珠等杂质滴入孔内影响检测结果。不能缩短或延长温育时间将导致吸光度值下降或增高,导致弱阳性标本漏检或假阳性。3.3酶添加加酶不能溅出孔外,也不能滴到微孔板壁上部,标本会出现假阳性。不同批号或不同厂家的酶不能混用,避免引起错误结果,3.4电子商务注意事项洗板机比手工洗板效果好,但洗板针堵塞导致抽吸不完全,洗板不畅导致清洗效果差。手工洗板,孔与孔之间液体易交叉污染。控制方法:洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被洗液结晶堵塞时可用注射器针头挑出;手工洗板时,拍板要垂直,避免交叉污染。洗板次数较少,造成残留,可引起假阳性结果;洗板次数过多。造成抗原抗体结合物洗脱,引起假阴性结果。酶结合物不耐干燥,特别在较高的温度下更易失活,加入底物前,甩干的反应板在空气中暴露的时间长短也会影响实验结果,时问越长。则吸光度值越低。因而在ELISA操作中严格按要求洗涤防止错误结果。3.5样本漏检和比色操作时应注意各试剂盒显色剂不能混用,不能溅出孔外,避光保存,防止吸光度值下降,引起错误结果。显色时间,决不能任意缩短,因为抗原抗体反应必须在充分的时间内才能反应完全,缩短反应时间将导致吸光度值下降,导致弱阳性标本漏检。加入终止液后应尽快(10min内)比色。否则样本吸光度值会逐渐下降,显色越深下降越快。酶标仪不应置于阳光或强光照射下,酶标仪应采用双波长进行测定,这样可排除单波长检测时的测定干扰(标本的浓度、干扰色等)和电路干扰(噪音、漂移、电压等),也可排除微孔反应板底部划痕的光干扰。4ellasa检测“灰区”酶标仪自动计算出结果,按试剂盒提供的阴阳性判定值(Cut-Off)进行结果判定,在实际工作中经常会出现样本A值位于CO值附近,即ELlSA检测的“灰区”。解决方法:对可疑标本可采用定期检验或用不同方法不同厂家试剂检测。5质量控制5.1岩石质控品失控判断IQC是保证检验结果的可靠,结合Levey-Jennings质控图,制定失控判断规则,在每块反应板中除了试剂盒内的阴阳性对照外,选择弱阳性的室内质控品,其S/CO值为1.5~4之间。分析每次IQC失控的原因并及时纠控。每月进行月总结,年底做年总结,提高检测的可靠性。5.2elisa检测结果EQA是一种回顾性评价,主要是控制实验室结果的准确性。我实验室参加卫生部的室间质评,同患者标本一起检测,对预期结果不符的查找原因,改进措施。选择灵敏度高、特异性强的试剂盒。综上所述,ELISA法操作简单,但对检测结果的影响因素较多。在实际操作中注重各环节的质量控制,对检测结果易出现的影响因素,采取相应的解决方法,才能得到准确可靠的检测结果。2.1标本严重溶血红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶(HRP)为标记的ELISA测定试验中,容易在温育过程中吸附于微孔板,从而与加入的底物反应显色,干扰测定结果,导致假阳性结果,解决方法:严重溶血的标本应退回并重新采集。2.2标本在低温下保存时间过长,IgG可聚合成多聚体,在间接法ELISA测定中会导致本底加深,甚至出现假阳性结果。解决方法:(1)采集新鲜标本,(2)长时间冻存的样本避免反复融冻,防止抗体效价下降引起假阴性结果。2.3血清标本应充分离心,否则可因残留的纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。解决的方法有:(1)使用促凝分离胶采血管采血;(2)将采集后的血液置室温中1h,待充分凝固后再离心分离血清。2.4标本污染:(1)标本的污染菌体可能含有内源性辣根过氧化物酶,使检测结果出现非特异性显色。因此,EL