正畸牙髓中降钙素基因相关肽阳性神经纤维的变化

正畸牙髓中降钙素基因相关肽阳性神经纤维的变化

钙基因（csi）的相关概念是1982年人类对钙含量变化的基因结构的发现的物质。除了能将感觉信息传递给中枢神经系统外,还具有扩张血管、浆液外渗、影响巨噬细胞和白细胞的功能等外周生理调节作用。文献已经证实在正畸加力过程中牙周CGRP神经发生了明显的变化,但在正畸过程中,尤其是撤力后牙髓CGRP神经纤维发生了怎样的变化,目前还不很清楚。本研究采用免疫荧光染色观察牙齿移动过程中大鼠牙髓组织CGRP阳性神经纤维的变化情况,了解牙髓CGRP与正畸之间的关系。1材料和方法1.1下颌加力教育SD雄性大鼠,体质量(180±20)g。加力装置采用结扎丝将一根镍钛螺旋拉簧一端结扎在上颌第一磨牙上,另一端结扎在上颌中切牙上,并用自凝塑料加固结扎丝与牙连接处。大鼠随机分为正常对照组(放置加力装置但不加力)和牙齿移动组。牙齿移动组加力力值为0.49N(50g),使磨牙向近中移动。牙齿移动组根据不同时间分为以下几个亚组:加力3d组、加力7d组、加力14d组、撤力后7d组、撤力后14d组、撤力后28d组,正常对照组及牙齿移动每个亚组均为6只大鼠。1.2脱颌骨的制备达规定时间点后,全麻下打开大鼠胸腔,暴露心脏,剪开右心房放出血液,再剪开左心室将输液管从左心室插入主动脉用动脉夹固定,先用80～100ml生理盐水将血管内的血液冲洗干净,再注入含40g/L多聚甲醛的0.1mol/LPBS固定液400ml灌流固定1.5h,并用上述固定液后固定2h。由口腔内切开上颌骨周围软组织,剪断双侧颧突,取出上颌骨。去除骨表面软组织,置100g/LEDTA液中脱钙2～3周。将脱钙的上颌骨入300g/L蔗糖24h、4℃至组织沉底。沿近远中方向纵行切片,片厚25μm。1.3荧光封片观察300ml/L的过氧化氢液1份+纯甲醇50份混合,室温下处理30min以灭活内源性过氧化物酶;滴加正常血清封闭液(为二抗同种动物血清,用于组织切片的封闭),室温20min;滴加兔抗CGRP(1∶2000,Sigma公司,美国)),4℃,过夜。加入荧光素标记的羊抗兔IgG(1∶200,Sigma公司,美国),37℃孵育1h。切片经0.01mol/LPBS充分漂洗,用荧光封片剂封片。OlympusBX-60显微镜下观察。对照组实验采用PBS替代一抗,其余过程同上。1.4免疫荧光检测各组标本(5个标本/组)取相同数量的牙切片(5张/标本)作免疫荧光染色,切片在荧光显微镜下观察结果并统计各组切片中CGRP阳性神经纤维的数目。以根/标本表示。各组间通过t检验进行显著性比较。2正畸牙移动过程中内镜下cdrp阳性神经纤维的变化免疫荧光染色结果显示,正常大鼠第一磨牙牙髓组织中含有丰富的CGRP阳性神经纤维。在大鼠磨牙根髓中CGRP阳性神经纤维呈粗大束状,多沿血管分布(图1);神经纤维经根髓直达冠髓,进入冠髓后逐渐分散呈条索状,念珠样,常沿血管分布;神经纤维在髓顶成牙本质细胞下层,排列成网状,大量的CGRP阳性纤维从网状结构中分出垂直进入成牙本质细胞层及牙本质层内(图2)。牙颈部及牙根部较少见到成牙本质细胞下CGRP阳性纤维的网状分布。正畸牙齿移动过程中大鼠牙髓组织中CGRP阳性神经纤维发生了明显的变化,并具有一定的规律性。加力后3d大鼠牙髓CGRP阳性神经纤维数量开始增加[(17.57±4.22)根/标本],与对照组[(8.03±4.49)根/标本]相比P<0.05(图3);加力7d达到最高(24.04±3.55)根/标本,加力14d达到(21±4.11)根/标本,与对照组相比P<0.01(图4);撤力后7d阳性神经纤维数量为19.23±5.23,增加现象一直持续到撤力后14d[(18.23±5.08)根/标本],与对照组相比P<0.05;至撤力后28d下降到正常水平[(8.12±5.01)根/标本]。3正畸时间中牙髓内内镜内镜内镜内镜内镜内镜内镜内镜外作用情况牙髓组织及牙周组织中的CGRP是由三叉神经节感觉神经元的胞体合成,然后以快速轴浆运输的形式分别运输到其中枢端和外周端。其中枢端作为感觉神经元的传入纤维,主要负责痛觉、温觉的传导。在外周,牙髓神经末梢在牙齿受到伤害性刺激时会传出释放CGRP参与牙髓组织的炎症、免疫及修复反应。本研究观察到在正常的大鼠组织中,CGRP在髓顶成牙本质细胞下层,排列成网状,并有大量的CGRP阳性纤维从网状结构中分出垂直进入成牙本质细胞层及牙本质层内,提示可能与牙齿的伤害性感受有关。冠髓和根髓内CGRP阳性神经纤维多沿血管分布,提示可能与调节牙髓血管功能有关。国内外文献也已经证实CGRP可以影响牙髓神经末梢的感受性以及牙髓组织血管的扩张和浆液渗出。体外细胞实验观察到CGRP还能够直接作用于牙髓靶细胞,调节其生理功能。另有研究发现正畸牙齿移动能够使牙髓血流量明显增加,但CGRP样神经是否参与了该反应过程以及与正畸牙髓组织反应之间的确切关系还不清楚。正畸牙齿移动过程中牙周组织CGRP样神经纤维的增加已经得到证实。针对正畸牙齿移动过程中牙髓CGRP阳性神经纤维的反应,我们进行了观察。实验发现大鼠牙髓组织CGRP阳性神经纤维在这一过程中发生了明显的变化,并具有一定的规律性。加力后3d大鼠冠髓和根髓CGRP阳性神经纤维数量开始增加;加力7d达到最高;至撤力后28d开始下降,但其数量仍然明显高于对照组。这与Kvinnsland等的结果一致,但他们只观察加力过程中而并未涉及到撤力后牙齿稳定期的牙髓CGRP神经纤维的变化。Norevall等采用颊向移动大鼠牙齿,观察到撤力后28dCGRP阳性神经纤维数量和染色强度仍然明显高于正常对照组。但比较以往的研究结果来看,不同的实验对象、加力方式及观测手段都可能影响