中药指纹图谱研究方法学课件

第二章中药指纹图谱研究方法学第二章中药指纹图谱研究方法学1主要内容第一节常用指纹图谱研究的方法与技术第二节指纹图谱研究常用的仪器与设备主要内容第一节常用指纹图谱研究的方法与技术2第一节常用指纹图谱研究的方法与技术

1光谱法（红外、紫外光谱）信息量少、少用2色谱法（兼具分离、检测功能）信息量大、多用第一节常用指纹图谱研究的方法与技术

1光谱法（红外、紫外3紫外光谱指纹图谱紫外光谱指纹图谱4红外光区划分红外光谱(0.75~1000m)远红外(转动区)(25-1000m)中红外(振动区)(2.5~25m)近红外(泛频）(0.75~2.5m)倍频分子振动转动分子转动分区及波长范围跃迁类型（常用区）13158~4000/cm-1400~10/cm-14000~400/cm-1红外光区划分红外光谱远红外(转动区)中红外(振动区)近红外(5红外光谱特点1）应用范围广：除单原子分子及单核分子外，几乎所有有机物均有红外吸收；2）分子结构更为精细的表征：通过IR谱的波数位置、波峰数目及强度确定分子基团、分子结构；红外光谱特点6不同丹参粉末的红外图谱光谱法不同丹参粉末的红外图谱光谱法7柱色谱ColumnChromatography平面色谱PlanarChromatography液相色谱LiquidChromatography(LC)气相色谱GasChromatography(GC)薄层色谱ThinLayerChromatography(TLC)毛细管电泳CapillaryElectrophoresis（CE）色谱法柱色谱平面色谱液相色谱气相色谱薄层色谱毛细管电泳色谱法8反相高效液相色谱(RP-HPLC)ReversedPhaseHighPerformanceLiquidChromatography●适用范围广●分离性能好●分析速度快●流动相选择范围宽●灵敏度高●色谱柱可多次重复使用●流出组分可以收集●采用多种检测器，可同时获取保留值信息和化合物的光谱、值谱信息对较为复杂的色谱实验条件要求比较苛刻，由此带来不同实验室之间重现性的难度增大反相高效液相色谱(RP-HPLC)●适用范围广9GasChromatography(GC)(气相色谱)

fingerprintsforsomeherbalmedicinestToppart:(苍术挥发油);Lowerpart:(厚朴挥发油)

气相色谱法（gaschromatography简称GC）是色谱法的一种。色谱法中有两个相，一个相是流动相，另一个相是固定相。如果用液体作流动相，就叫液相色谱，用气体作流动相，就叫气相色谱。

气相色谱仪允许的条件下可以气化而不分解的物质，都可以用气相色谱法测定。主要用于挥发油的分析GasChromatography(GC)(气相色谱)

10薄层色谱ThinLayerChromatography(TLC)●可在同板同时分析多达18个样品，时效高●所用的是正相展开剂，其组成变化灵活，可适应多种成分的分离●离线操作，即可直观比较图谱，又可扫描得到轮廓图和处理数据●占机时间短●具有色彩参数，可获得色彩丰富的色谱图像，直观性强；同时辅以功能团显色剂还可提示成分的类别，提高鉴别的专属性。●展距局限在10cm~20cm，‘柱效’相对较低，对复杂组分不提高分离度则难以提取指纹特征的药材受到限制。●开放系统，对环境温度、相对湿度要求较高薄层色谱●可在同板同时分析多达18个样品，时效高●展距局限在11TLCTLC12主要内容第一节常用指纹图谱研究的方法与技术第二节指纹图谱研究常用的仪器与设备主要内容第一节常用指纹图谱研究的方法与技术13第二节指纹图谱研究常用的仪器与设备3联用色谱仪器1光谱仪器2色谱仪器第二节指纹图谱研究常用的仪器与设备3联用色谱仪器1光谱仪141光谱仪器紫外分光光度计：主要由光源、单色器、样品池（吸收池）、检测器及放大器和记录显示系统所组成。钨灯丝适宜使用的范围是360nm~1000nm；氢灯或氘灯适宜使用的范围是150nm~360nm。1光谱仪器紫外分光光度计：主要由光源、单色器、样品池（吸收池15通常在紫外分光光度计中，装置有紫外光源-氘灯及可见光源-卤钨灯，只需切换光源，就可以用来用来测定可见吸收光谱。因此也称为紫外-可见分光光度计。通常在紫外分光光度计中，装置有紫外光源-161光谱仪器红外光谱又称分子振动转动光谱，属分子吸收光谱。红外光谱仪：仪器组成：光源，吸收池，单色器，检测器以及记录显示装置。T(%)1光谱仪器红外光谱又称分子振动转动光谱，属分子吸收光谱。T(172色谱仪器HPLC2色谱仪器HPLC18中药指纹图谱研究方法学课件19实验条件的选择：1、色谱柱的选择：C18反相柱（ODS柱）、C8反相柱、正相分配色谱柱(氨基柱等）。2、流动相的选择：反相键合相为例（1）部分含水溶剂：以水为基础溶剂，再加入一定量可与水互溶的有机极性调节剂（如甲醇、乙腈等）。甲醇-水、乙腈-水系统。适用于中等极性、弱极性的药物。（2）缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的药物（弱酸、弱碱、蛋白质、肽类等）。常用缓冲液：磷酸盐、醋酸盐等。（3）非水溶剂：用于非极性物质。实验条件的选择：20洗脱方式：（1）等度洗脱：在同一分析周期内流动相的组成保持恒定。适用于组分数较少、性质差别不大的样品。（2）梯度洗脱：在同一分析周期内程序控制流动相的组成（溶剂极性、pH值等）适用于组分数多、性质差别大的复杂混合物样品。洗脱方式：21检测器：（1）紫外检测器（UV）：应用最普遍。灵敏度高、噪音低、线性范围宽等优点。只能用于检测有紫外吸收的药物。可变波长型、二极管阵列检测器（色谱、紫外光谱图）（2）蒸发光散射检测器（ELSD）：通用型检测器。主要用于糖类、生物碱类、三萜类、甾提类等挥发性低的物质。灵敏度稍低，流动相中不能含缓冲盐。（3）示差折光检测器（RID）：通用型，利用组分与流动相折射率之差进行检测。（用于糖类物质）检测器：22薄层色谱薄层色谱的实验成本低、流动相的更换与选择方便、薄层扫描仪的使用效率高。另外，它提供色彩丰富、直观易认的可见光或荧光色谱图像，尤其适合日常分析检验和现场检验。选择薄层扫描法对中药进行指纹图谱质量控制具有广阔的应用前景。薄层色谱薄层色谱的实验成本低、流动相的更换与选择方便、薄层扫23实验仪器CAMAGLinomat5半自动点样仪CAMAGScanner3薄层色谱扫描仪CAMAG数码摄像系统实验仪器CAMAGLinomat5半自动点样仪CAM24TLCS-3D-FP在监控药材质量方面的应用TLCS-3D-FP在监控药材质量方面的应用25甘草聚酰胺薄层扫描图谱聚酰胺薄层甘草聚酰胺薄层扫描图谱聚酰胺薄层26气相色谱气相色谱27Getmoredata/informationHPLC-DAD3DchromatogramHPLCchromatogramofnucluesideofCordycepsSinensis(冬蟲草)atonewavelengthHyphenatedInstrument(联用仪器)Getmoredata/informationHPLC28HyphenatedInstrument(联用仪器)GCinstrumentGCchromatogramof

pepticpowder(平