细菌学检验-18-超敏反应及其检验课件

超敏反应及其检验第十八章超敏反应及其检验第十八章1超敏反应（hypersensitivity）

指机体对某些抗原进行初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，出现以生理功能紊乱或组织细胞损伤的异常适应性免疫应答。超敏反应亦称变态反应（allergy）/过敏反应（anaphylaxis）超敏反应（hypersensitivity）指机体2分类:I型超敏反应/速发型超敏反应Ⅱ型超敏反应/细胞毒型或细胞溶解型超敏反应Ⅲ型超敏反应/免疫复合物型或血管炎型超敏反应Ⅳ型超敏反应/迟发型超敏反应分类:I型超敏反应/速发型超敏反应Ⅱ型超敏反应/细胞毒型3㈠致敏阶段一、I型超敏反应的发生过程和机制㈢效应阶段㈡激发阶段第一节

I型超敏反应(过敏反应/速发型超敏反应)㈠致敏阶段一、I型超敏反应的发生过程和机制㈢效应阶段㈡4变应原初次刺激特应性个体产生特异性IgE与肥大细胞和嗜碱粒细胞表面FcεRI结合与致敏肥大细胞和嗜碱粒细胞表面IgE特异性结合再次接触FcεRI交联启动并转导信号，胞内酶活化，Ca2＋内流细胞活化，脱颗粒和分泌活性介质变应原初次刺激特应性个体产生特异性IgE与肥大细胞和嗜碱粒与5组胺激肽原酶缓激肽平滑肌收缩，毛细血管扩张、通透性增加，腺体分泌增加LTsPAFPGD2LTs：白三烯

PAF：血小板活化因子

PGD2：前列腺素D2预先储备的介质新合成的介质组胺激肽原酶缓激肽平滑肌收缩，毛细血管扩张6

全身性(过敏性休克)呼吸道(过敏性鼻炎、哮喘)消化道(过敏性胃肠炎)皮肤荨麻疹平滑肌收缩，毛细血管扩张、通透性增加，腺体分泌增加全身性呼吸道消化道皮肤平滑肌7细菌学检验-18-超敏反应及其检验课件8二、I型超敏反应的特点：反应发生快、消退快；常引起生理功能紊乱，几乎不发生严重组织细胞损伤；具有个体差异和遗传背景；由IgE抗体介导；

无补体参与。二、I型超敏反应的特点：反应发生快、消退快；常引起生理功能9

花粉症的发生机制花粉症的发生机制10

皮肤过敏症眼睑水肿荨麻疹皮肤过敏症眼睑水肿荨麻疹11IgG或IgM类抗体与靶细胞表面相应抗原结合，在补体、吞噬细胞和NK细胞参与作用下，引起以细胞溶解或组织损伤为主的病理性免疫反应。第二节

Ⅱ型超敏反应又称细胞毒型或细胞溶解型超敏反应IgG或IgM类抗体与靶细胞表面相应抗原结合，在补体、吞噬细12细菌学检验-18-超敏反应及其检验课件13细菌学检验-18-超敏反应及其检验课件14

新生儿溶血症新生儿溶血症15

肺—肾综合（Goodpasture综合征）病毒(A2型流感病毒)、有机溶剂肺组织损伤吸入自身抗体肾小球损伤产生肺泡壁与肾小球基底膜为共同抗原交叉反应肺—肾综合（Goodpasture综合征）病16

甲状腺机能亢进（刺激型超敏反应）长效甲状腺刺激素(LATS)（longactingthyroidstimulator)自身抗体甲状腺细胞表面的促甲状腺激素受体结合甲状腺激素分泌↑甲状腺功能亢进刺激甲状腺机能亢进（刺激型超敏反应）17第三节Ⅲ型超敏反应又称免疫复合物型或血管炎型超敏反应

中等大小可溶性免疫复合物沉积于局部或全身毛细血管基底膜，通过激活补体并在血小板、嗜碱性/中性粒细胞参与下，引起以充血水肿、局部坏死和中性粒细胞浸润为主要特征的炎症反应和组织损伤。

第三节Ⅲ型超敏反应又称免疫复合物型或血管炎型超敏反应中18细菌学检验-18-超敏反应及其检验课件19第四节IV型超敏反应

效应T细胞与相应抗原作用，引起的以单个核细胞浸润和组织细胞损伤为主要特征的炎症反应。由于免疫细胞激活、增殖、分化及炎症细胞的聚集需较长时间,炎症反应发生较迟,持续时间较长,故称为迟发型超敏反应（delayedtypehypersensitivity,DTH）。又称迟发型超敏反应第四节IV型超敏反应效应T细胞与相应抗原作用，引起的20主要由T细胞介导；无抗体和补体参与发生慢慢性炎症损伤：以单个核细胞浸润和组织细胞坏死为主要特征特点主要由T细胞介导；特点21细菌学检验-18-超敏反应及其检验课件22细菌学检验-18-超敏反应及其检验课件23细菌学检验-18-超敏反应及其检验课件24第五节超敏反应的免疫学检测一、变应原皮肤试验－－皮试主要用于检测Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应过敏原的检测。（一）原理：体内试验第五节超敏反应的免疫学检测一、变应原皮肤试验－－皮试25

（二）方法：（1）皮内试验青霉素皮试（I型）：15～25min观察有无风团（荨麻疹）和红晕结核菌素皮试（IV型）：48～72h观察有无红肿硬结。（2）挑刺试验（I型）：（3）斑贴试验（IV型）：寻找接触性皮炎过敏原。（二）方法：26Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型超敏反应皮肤实验

1：15分钟出现1cm的界限清晰的风团2：5-12小时出现超过5cm的红肿、出血、坏死3：24-48小时出现的1cm的红肿、硬结（三）结果判定及分析Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型超敏反应皮肤实验（三）结果判定及分析27

超敏反应防治—皮试超敏反应防治—皮试28Ⅰ型超敏反应皮肤试验：20-30min内观察Ⅰ型超敏反应皮肤试验：20-30min内观察29ⅠV型超敏反应皮肤试验：48-72h内观察ⅠV型超敏反应皮肤试验：48-72h内观察30

假阳性常见原因：①试验溶液配制不当，过酸或过碱都会对皮肤产生非特异性刺激；②被试者皮肤反应过强；③变质或不纯。假阳性常见原因：①试验抗原浓度过低，或因各种原因失效；②被试者皮肤反应较低；③患者近期内使用过大量抗组胺类药物或正使用免疫抑制剂等药物。假阳性常见原因：31（四）应用与评价寻找变应原预防药物或疫苗过敏评价机体细胞免疫功能状态传染病的诊断（四）应用与评价寻找变应原32血清IgE检测：I型超敏反应抗血细胞抗体的检测：II型超敏反应循环免疫复合物的检测：III型超敏反应嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞计数：I型超敏反应时可增多某些疾病时可增多血清IgE检测：I型超敏反应33二、血清IgE检测（一）血清总IgE的测定1、放射免疫吸附试验2、酶联免疫测定法3、化学发光法（二）特异性IgE的测定1、放射变应原吸附试验2、酶联免疫测定法3、CAP变应原检测系统二、血清IgE检测（一）血清总IgE的测定34三、免疫复合物的检测﹡immunecomplex，IC：即抗原抗体复合物﹡分类：

•局部免疫复合物：

•可溶性免疫复合物：

•循环免疫复合物(circulatingimmunecomplex，CIC)：主要指血液中免疫复合物。三、免疫复合物的检测﹡immunecomplex，IC：即35

根据形成免疫复合物Ag-Ab是已知或未知的，将CIC分为两大类：

٭特异性免疫复合物:如乙型肝炎的HBsAg-抗-HBs，甲状腺球蛋白抗原-抗甲状腺球蛋白抗体形成的免疫复合物；

٭非特异性免疫复合物:如肾小球肾炎、系统性红斑狼疮等。

根据形成免疫复合物Ag-Ab是已知或未知的，将CI36（一）抗原非特异性CIC的检测﹡非抗原特异性循环免疫复合物的检测不考虑免疫复合物中抗原性质，只检测免疫复合物的总量。﹡检测非抗原特异CIC的方法应用较多，建立的检测方法也比较多，根据检测原理不同，将其检测技术大致归纳为物理学测定法、补体相关测定法、抗球蛋白测定法和细胞技术测定法等。（一）抗原非特异性CIC的检测37细菌学检验-18-超敏反应及其检验课件381、物理学测定法（1）分子大小特性：超速离心、分子超滤、凝胶过滤等（2）聚乙二醇（PEG）沉淀法：原理：PEG是一种无电荷的线形分子结构的多糖，为乙二醇的聚合物，有较强脱水作用，利用2%~4%浓度的PEG6000可以选择性地将大分子免疫复合物沉淀下来，将此沉淀定量溶解，测其A值。CIC相对分子质量较大，相互结合的抗原抗体的构象发生改变，易被低浓度PEG自液相析出。PEG还可抑制CIC解离，促进CIC进一步聚合成更大的凝聚物而被沉淀。利用透射比浊或散射比浊法可测出CIC的存在与含量。方法：按试剂盒说明书操作。1、物理学测定法391、物理学测定法（2）聚乙二醇（PEG）沉淀法：注意事项：1）PEG浓度超过5%，可使IgM等其他血清蛋白质同时沉淀，导致假阳性结果2）如需定量测定，可用热变性IgG制备标准曲线3）温度：4℃最佳。4）空腹采血：低密度脂蛋白可引起浊度增加。5）自行制定正常值：6）高γ球蛋白血症以及血清标本反复冻融，均易造成假阳性7）此法快速、简便，但特异性较差，仅适于筛查。1、物理学测定法402、补体相关测定法：C1q结合试验：原理：待检血清加入包被有C1q的微量反应板，免疫复合物和C1q结合，再与酶标记抗抗体反应，在固相上反应生成Clq-CIC-酶标记抗人IgG复合物，通过底物颜色的深浅判断免疫复合物的存在及数量。方法：注意事项：1）C1q制品不易精制且纯品不稳定，所以测定结果的稳定性较差2）SLE患者血清中抗C1q抗体能产生假阳性3）此法灵敏度优于PEG沉淀比浊法，可达0.1μg/ml热聚合IgG。2、补体相关测定法：41抗补体试验原理类似补体结合试验。胶固素结合试验胶固素是牛血清中的一种正常蛋白，能与C3d特异性结合。抗补体试验423、抗球蛋白测定法mRF凝胶扩散试验：原理：mRF具有与变性IgG和免疫复合物中IgG结合而不与游离的IgG结合的特性，其中mRF与免疫复合物的亲和力更强。该方法是将mRF和免疫复合物在琼脂糖凝胶中扩散，结合形成沉淀，进行定性或定量测定。3、抗球蛋白测定法434、细胞技术测定法：Raji细胞试验原理：Raji细胞是有Burkitt淋巴瘤患者分离建立的B细胞株，其表面有大量C3b、C1q和C3d受体，无SmIg，利用这些受体与结合补体的CIC结合，加入放射性核素标记的抗人IgG，反应层次为Raji细胞-CIC-放射性核素标记抗人IgG复合物。评价：敏感性高、特异性强、实用性强；

Raji细胞培养较困难；有时需封闭，操作繁琐。4、细胞技术测定法：Raji细胞试验44（二）抗原特异性CIC检测技术：主要检测抗原抗体复合物的性质。◙单特异性循环免疫复合物的检测方法：

胰蛋白酶解离法：检测HBsAg-CIC，PEG沉淀免疫复合物胰蛋白酶消化沉淀物中的抗体蛋白游离出抗原部分用反向间接血凝试验检测HBsAg滴度◙双特异性循环免疫复合物的检测方法：

捕获法ELISA：检测肾综合征出血热Ag/IgE和Ag/IgD-CIC，抗原抗体双特异性循环免疫复合物是同一抗原与Ig类型，如IgD或IgE抗体形成免疫复合物。

另外可用包被抗C3抗体法。（二）抗原特异性CIC检测技术：45（三）CIC检测方法评价及应用﹡主要存在的问题：①目前尚无一种对所有种类的循环免疫复合物均能有效检测的方法；②不同方法检测循环免疫复合物原理各异，检测结果有时不相关；③大多数方法易受非特异性原因造成的Ig聚合物或非免疫因素抵抗补体活性等各种因素的干扰；④目前尚无理想的标准化措施，大多以HAHG为标准品绘制标准曲线。﹡临