黄芩清肺汤的抗菌药研究

黄芩清肺汤的抗菌药研究

黄原卫生文献第17卷，由黄原及其药物《风热》和《解毒》组成。主要治疗风热、肺热、肺胃热、全身热、兴奋、口渴、咳嗽和排泄。本文研究了其活性组分黄芩提取物(含黄芩总黄酮97%,黄芩苷80%)、栀子提取物(含栀子总环烯醚萜苷84%,栀子苷62%)、二者按不同比例组成的混合物以及黄芩栀子合提物对甲型、乙型流感病毒、金黄色葡萄球菌和肺炎双球菌感染小鼠的保护作用,确定了精简方剂中黄芩提取物、栀子提取物的有效剂量配比。研究成果在中药天然药物五类新药-芩栀胶囊(SFDA药物临床试验批件号:2005L02273)研制中得到了成功运用。1材料表面1.1药物、试剂和仪器黄芩提取物,批号:030529,1g相当于生药14.5g;栀子提取物,批号:030729,1g相当于生药20.0g;黄芩栀子合提物,批号:030308,1g相当于生药4.4g,均由芩栀胶囊课题组提供;利巴韦林胶囊,浙江一新制药有限公司,批号:010105;乙醚,上海马陆化工厂,批号:980209;氯化钠,江苏太仓化工厂,批号:990901;营养肉汤,上海市医学化验所,批号:010927;营养琼脂,上海市医学化验所,批号010324;绵羊红细胞,南京江宁防疫站,批号:020505;胃膜素,中国药科大学微生物室提供。1.2动物ICR小鼠,南京医科大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(苏)2001-0015。1.3病毒甲型流感病毒A/PR/8/34、乙型流感病毒B/京防98—76,中国预防医学科学院病毒所提供。1.4临床分离消毒金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌,江苏省人民医院微生物室鉴定提供。1.5仪器FA1004电子天平,上海天平厂;净化工作台,苏州净化设备厂;孵箱,上海分析仪器厂;CO2培养箱,德国贺利氏公司。1.6栀子提取物/从化学成分测定H表示黄芩提取物;Z表示栀子提取物;HZ表示黄芩栀子合提物;ZH1、ZH2、…、ZH5表示栀子提取物/黄芩提取物的比值(W/W)为1∶1,1∶2,…,1∶5;HZ1,HZ2,…,HZ5表示黄芩提取物/栀子提取物的比值(W/W)为1∶1,1∶2,…,1∶5。1.7统计方法资料统计采用t检验,χ2检验。2方法和结果2.1小鼠肺指数变化情况ld50取9d龄鸡胚,无菌接种0.2ml甲型(或乙型)流感病毒液,37℃恒温培养72h,吸取尿囊液,弃去混浊部分,重复操作,制备增毒4次的病毒尿囊液。滴鼻感染小鼠,结果甲型流感病毒LD50为1.90,乙型流感病毒LD50为1.23。取ICR小鼠270只,体重13～16g,雌雄各半,随机分为15组,每组18只。各组动物均以10ml/kg灌胃给药,1次/d,共5d。给药后1h,在乙醚浅麻醉状态下,以血凝试验640以上的甲型流感病毒尿囊液滴鼻感染小鼠,每只0.03ml(20个LD50攻击量)。观察动物感染后发病及死亡情况,记录14d内动物死亡数,进行组间比较。结果见表1。按上述方法,进行“对乙型流感病毒感染小鼠存活率及存活天数的影响”实验。结果,H组、ZH3组、ZH4组、ZH5组0.8g(生药)/kg和HZ组2.7g(生药)/kg剂量可明显延长甲型流感病毒感染小鼠的存活天数,减少感染小鼠的死亡数,与模型对照组比较,有显著性或极显著性差异(P<0.05或P<0.01)。ZH1组、ZH3组、ZH5组0.8g(生药)/kg和HZ组2.7g(生药)/kg剂量可明显延长乙型流感病毒感染小鼠的存活天数,减少感染小鼠的死亡数,与模型对照组比较,有显著性或极显著性差异(P<0.05或P<0.01)。取ICR小鼠120只,体重13～16g,♂♀各半,随机分12组,每组10只。各组动物均以10ml/kg灌胃给药,1次/d,共5d。给药第2天,在乙醚浅麻醉下,以血凝试验640以上的甲型流感病毒尿囊液滴鼻感染小鼠,每只0.03ml(20个LD50致死量),实验禁食不禁水。末次给药后,各组小鼠称重,脱颈处死,解剖,观察肺部病理组织学变化(HE染色法),取肺称重,计算各鼠肺指数值,肺指数抑制率,进行组间比较。结果见表2。按上述方法,进行“对乙型流感病毒感染小鼠肺指数的影响”试验。结果,H组、ZH3组、ZH4组、ZH5组0.8g(生药)/kg和HZ组2.7g(生药)/kg剂量可明显降低甲型流感病毒感染小鼠的肺指数值,与模型对照组比较,有显著性差异(P<0.05),肺指数抑制率分别为25.5%,26.8%,20.2%,19.2%和27.2%。各提取物虽可降低乙型流感病毒感染小鼠的肺指数值,但无统计学意义。2.2体内的抗菌作用2.2.1培养条件菌液取临床分离金黄色葡萄球菌(或肺炎双球菌)少许,接种于营养肉汤培养基中,37℃培养18h,划线于血平板上,37℃培养20h。5%胃膜素溶液(pH约7.2)6ml洗脱菌落,用NS配制浓度为0.6,0.3,0.12,0.06ml/mg的菌液。根据动物实验小鼠死亡数测定结果,选用0.12ml/mg的金黄色葡萄球菌菌液、0.3ml/mg的肺炎双球菌菌液用于实验。2.2.2细菌感染小鼠的保护作用取ICR小鼠176只,体重18～22g,随机分为11组,每组16只,♀♂兼用。各组动物均以10ml/kg灌胃给药,1次/d,共5d。第3天给药1h后,腹腔注射上述金黄色葡萄球菌培养液0.5ml/只,观察各组动物7d内死亡情况,结果见表3。按上述相同方法,进行“对肺炎双球菌感染小鼠的保护作用”试验。结果,ZH3组、ZH4组0.8g(生药)/kg和HZ2.7g(生药)/kg剂量可明显延长金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌感染小鼠的存活天数,与模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。3从药物作用到制剂配方实验结果表明,黄芩提取物、栀子提取物二者按不同比例组成的混合物及黄芩栀子合提物均具有抗甲、乙型流感病毒、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌的作用。黄芩栀子合提物的有效剂量大于其它提取物(或混合物)。黄芩提取物、栀子提取物以3∶1组成的混合物药效作用较其它受