海南树仔菜对sd大鼠的亚慢性毒性试验

海南树仔菜对sd大鼠的亚慢性毒性试验

木芽菜的学名是守宫木，是戟科植物的一种昵称。又称：深绿色和肥胖菜。海南通常被称为五田蔬菜，具有人工栽培和野生特性。主要产于南洋群岛和东南亚，后来被引入中国海南和广东等地。海南树仔菜为海南省人工种植，主要产于无工业污染、纯农业区的海南五指山地区，多年来已被人们作为蔬菜食用，并未见中毒的报道。2005年，郭巨先等报道，采用该校蔬菜基地种植的华南守宫木进行30d喂养试验，动物出现了中毒反应及心、肺、肝、肾等损害并死亡。当时各大媒体纷纷转载并进行了报道，从而引发了人们对树仔菜毒性的质疑。本研究旨在了解树仔菜较长时间食用的安全性，对海南省五指山地区种植的树仔菜进行了亚慢性毒性试验。1材料和方法1.1树仔菜干法检测污染物采集海南省五指山地区种植的新鲜树仔菜，取可食部分70℃烘烤后粉碎、过100目筛、制成干粉。1g干粉约相当于10g新鲜蔬菜。以树仔菜干粉进行镉、铅、汞、硒、砷、铬、六六六和DDT测定，各项指标均未超过食品中污染物限量标准。实验时将树仔菜干粉掺入饲料(中、高剂量组加入干酪素调整蛋白质含量与对照组相当)，充分混匀压制成块状供动物自由进食。1.2实验动物：实验动物SD大鼠80只，SPF级，雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物使用许可证号:SYXK(琼)2005-0004。动物饲养室温度:20.0～25.0℃，湿度:40%～70%。1.3动物饲养及病理组织学检测依据GB15193-2003《食品安全性毒理学评价程序和方法》进行试验。选SD大鼠80只，随机分为低、中、高3个剂量组和对照组，每组雌雄各10只，雄性体重为(56.2±3.2)g;雌性体重为(55.3±2.5)g，分别喂饲含样品2.5%、5.0%、10.0%和0%的饲料(按动物摄食量为体重的8%计，低、中、高剂量分别为2000mg/kg体重，4000mg/kg体重和8000mg/kg)连续喂养90d。动物单笼饲养，自由进食和饮水。每天观察动物的一般状况、中毒表现和死亡。每周称1次体重和2次饲料量，计算每周总增重、进食量和食物利用率。实验中期与实验结束前采尾血测定血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类。实验结束后断头采血，分离血清测定丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血糖(GLU)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)。取肝脏、肾脏、脾脏、睾丸称重，计算脏体比值。取肝、肾、胃、十二指肠、脾、睾丸或卵巢进行病理组织学检查。全部数据采用SPSS统计软件进行单因素方差分析。1.4统计学处理全部数据采用SPSS10.0软件进行统计学处理。计量资料的数据以x珋±s表示，并采用单因素方差分析(F检验)，P<0.05表示差异有统计学意义。2结果2.1各组大鼠体重、终体重及总食性比较实验期间，各组动物被毛光滑，活动正常，一般状况良好，未见明显中毒症状、无死亡。由图1和2可见:各组大鼠生长发育期体重逐周增长;中、高剂量组雌雄大鼠第1～5周体重增加量低于对照组(P<0.01)，第6周后体重增加量与对照组比较，差异无统计学意义，但终体重及总增重仍低于对照组(P<0.01或P<0.05);中、高剂量组雌雄大鼠各周及总进食量低于对照组(P<0.01);各剂量组雌雄大鼠各周及总食物利用率与对照组比较，差异无统计学意义(表1)。2.2血液中的血液学指标实验中期和末期各剂量组雄雌大鼠红细胞计数、血红蛋白、白细胞计数及分类值均在本实验室正常成年大鼠历史参考值范围内。2.3异无统计学意义由表2可见，各剂量组雄雌大鼠胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05);雄鼠各剂量组尿素氮、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、雌鼠中、高剂量组肌酐与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，但其值均在本实验室正常成年大鼠历史参考值范围内波动，不认为具有生物学意义。2.4肝、肾、脾重量大体解剖，肉眼观察各脏器，未见明显水肿、萎缩及其他异常改变。高剂量组雄性大鼠肝、肾、脾重量低于对照组(P<0.01)，但脏体比与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量组及对照组动物肝、肾、胃、肠、脾、睾丸和卵巢病理组织学检查除个别动物肝脏瘀血外，未见其他异常改变。3树仔菜的急性毒性研究海南树仔菜为人工种植的常绿直立灌木，生长约1m高度，可食部分为嫩叶或嫩茎部，采摘后又可生长，可连续采摘数十年。由于树仔菜易种好管，抗病虫害能力强，嫩茎叶炒食或煮食味道鲜美、口感极佳，是一种新的蔬菜资源。海南五指山、乐东、保亭和琼中地区为树仔菜的主要产区，经过多年的培育和发展，至2005年，种植规模已经很大，已形成一条产业链，产品在各大、中城市的农贸市场、超市销售，并进入酒店和饭馆，成为人们餐桌上的美味佳肴。海南种植的树仔菜已有较大范围食用多年的历史，但从未见食用后有中毒的报道。2005年，郭巨先等报道，该校蔬菜基地种植的守宫木干粉喂养大鼠30d，饲料中守宫木干粉含量10%组动物出现了心、肺、肝、肾等毒性反应和死亡，并呈一定的剂量反应关系。1995年，台湾南部暴发阻塞性细支气管炎，经调查发现大量生吃守宫木是导致该病的危险因素。树仔菜对镉具有较强的富集作用，是菜心的26倍，是其他野菜的3～71倍。镉是有毒的重金属，摄入3～15mg就会引起机体中毒，损害肾脏等多器官，长期低剂量摄入可在体内蓄积引起慢性中毒。人群调查发现，食用树仔菜过量或食用较老的茎叶，会感觉难于消化、胃部不适，可能与树仔菜木质素含量较高有关。因此，实验用样品应无污染，注意采集嫩茎叶部分，否则将影响实验结果。本研究采用海南五指山地区种植的树仔菜经烘干制成干粉后掺入饲料喂养大鼠90d，实验期间，各剂量组动物一般状况良好，活动正常，无死亡。中、高剂量组雌雄性大鼠摄食量减少，体重增加量降低，尤以生长发育期幼鼠明显，但食物利用率无明显差异，考虑体重增加量降低可能是饲料的摄取量减少所致。动物摄食量减少是否与动物不喜欢树仔菜味道或与树仔菜本身的减肥作用或与给予动物的剂量较大有关，仍有待于进一步研究。血液常规指标和生化指标检测值均在正常生理范围内波动，病理组