助溶剂对氟苯尼考水溶制剂稳定性的影响

助溶剂对氟苯尼考水溶制剂稳定性的影响

氟苯尼科又称氟霉素，是20世纪80年代开发的一种新型抗凝剂。其具有抗菌谱广、吸收良好、体内分布广泛、无潜在的致再生障碍性贫血作用氟苯尼考为白色或类白色的结晶性粉末,无臭,其化学结构如图1所示。氟苯尼考在二甲基甲酰胺中极易溶解,在甲醇中溶解,在冰醋酸中略溶,在水或氯仿中极微溶解氟苯尼考的水溶剂微量溶解的问题严重制约了其在养殖生产中的应用,也给其药理、药效相关方面的研究带来了极大的困扰。目前,尚未见到关于提高氟苯尼考在水中的溶解度、各种助溶剂对其药效的影响及最适用量等方面的相关报道。本文以常见、已报道的二甲基亚砜1材料和方法1.1实验试剂与菌株1.1.1实验药品氟苯尼考粉剂(宁夏太平洋生物制药有限公司,100%);氟苯尼考注射液(济宁市万生药业有限公司,30%);二甲基亚砜、甲醇及乙醇等常用试剂购自天津市天力化学试剂有限公司;实验用水均为超纯水。1.1.2实验菌株实验所用嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)和克里斯坦森耶尔森氏菌(Yersiniakrislensenii)分离株为黑龙江水产研究所鱼病研究室鉴定和保存的菌株。1.1.3培养基液体培养基为普通蛋白胨水,固体培养基为普通琼脂培养基,培养基所用成分购自北京奥博星生物技术责任有限公司。1.2氟苯尼考的制备1.2.1三种助溶剂对氟苯尼考的助溶效果实验使用二甲基亚砜、甲醇、乙醇三种助溶剂来促进氟苯尼考在其水溶液中的溶解度。经预实验粗筛,分别选取最低助溶剂添加量,且在助溶剂最大添加量不超过70%的前提下,分别配制不同助溶剂比例的氟苯尼考最高浓度水溶液。二甲基亚砜助溶的氟苯尼考水溶液浓度为0.1%~30%;甲醇助溶组为0.1%~2%;乙醇助溶组为0.1%~0.7%。1.2.2温度对氟苯尼考溶解度的影响实验将目测能充分溶解的各实验溶解管分别置于4℃(低温)、20℃(常温)、30℃(高温)三个温度下7d,连续目测观察药物是否有析出,以判定其溶解稳定性。低温及常温控制分别于4℃药品保存柜及恒温烘箱中进行。1.2.4药敏片的制作将自制的直径为6mm的圆形滤纸片高温高压灭菌,烘干,然后分别浸润于含三种助溶剂的3g/L的氟苯尼考水溶液中1h,最终使每个滤纸片含氟苯尼考30μg,取出低温烘干,制成药敏片D(二甲基亚砜助溶)、E(乙醇助溶)和M(甲醇助溶)。用购买的30%氟苯尼考注射液按照同样的方法制成对照药敏片。1.2.5抑菌试验分别取嗜水气单胞菌和克里斯坦森耶尔森氏菌16%甘油保存菌液200μL,接种到3mL普通蛋白胨水中,28℃震荡培养过夜。取0.1mL对数生长期培养菌液均匀涂板于普通琼脂培养基平板上,然后等距离贴上对照及D、E、M四种自制药敏片,28℃恒温培养24h,测量抑菌圈直径。2结果2.1甲基亚添加量对氟苯尼考的影响随着助溶剂添加量的升高,氟苯尼考在水溶液中的溶解度也逐渐增大。各助溶剂的助溶效果见表1。由表1可见,随着二甲基亚砜添加量的不断升高,氟苯尼考在其水溶液中的溶解度也逐渐增大。当二甲基亚砜的添加量从10%逐渐升高到70%时,氟苯尼考水溶液最大浓度也从0.1%提升至30%。值得注意的是,在二甲基亚砜添加量为20%、30%和40%时,氟苯尼考的溶解度不变,其水溶液最大浓度均为0.5%。由表2可见,水溶液中甲醇浓度低于50%时,氟苯尼考的溶解度极小,低于0.1%。而在甲醇添加量为50%、55%、60%时,可配制稳定的0.1%、0.5%、1%的氟苯尼考水溶液,当甲醇的添加量达到70%时,氟苯尼考水溶液的最高浓度仅为2%。由表3可见,配制0.1%和0.5%的氟苯尼考需要添加的乙醇量为10%和50%,在保证乙醇的添加量不超过70%的情况下,最大只能配制出0.7%的氟苯尼考水溶液。由实验数据可见,1mL乙醇可以助溶0.01g氟苯尼考原粉。2.2氟苯尼考溶解组药物出用时间经连续7d目测观察,使用10%、20%、50%、60%、62.5%、65%、70%的二甲基亚砜配制出的0.1%、0.5%、1%、5%、10%、20%、30%的氟苯尼考溶解组在低温下均有药物析出,药物析出时间与药液浓度有关。而以甲醇和乙醇为助溶剂的溶解组在低温、常温和高温条件下均无药物析出,溶解效果较稳定。2.3药物含量测定在氟苯尼考溶解后1d和7d时,用紫外分光光度法实验所选定的三个温度下,无结晶析出的助溶剂溶解管中药物的含量,各助溶剂溶解管的含量未发生改变,与药物配制浓度基本一致。2.4抑菌圈直径测定对照及D、E、M四种自制药敏片分别贴于普通琼脂培养基上,28℃恒温培养24h后,测定其抑菌圈直径大小,具体数值详见表4。从表4中可以看出,与对照组相比,E组抑菌圈直径明显增大,而M,D的抑菌圈直径与对照组基本一致。3甲基亚对氟苯尼考的助溶效果液体制剂与其他剂型相比具有分散度大、便于分剂量、易于服用、吸收快、作用迅速、刺激性小等特点本实验采用添加助溶剂的方法用以增加氟苯尼考在其水溶液中的溶解度,使其达到速效、高效的目的。根据市面现主要销售的氟苯尼考各剂型的浓度来确定所配药液浓度,以商品化氟苯尼考溶液助溶剂最大添加量不超过70%为限,测定了二甲基亚砜、乙醇及甲醇对其助溶效果及药效影响。实验结果表明,三种助溶剂对氟苯尼考均有一定助溶作用,以二甲基亚砜助溶效果最好,甲醇次之,乙醇效果较小。当二甲基亚砜添加量达到70%时,可配制出与商品化最大浓度氟苯尼考溶液(30%)的浓度一致,而甲醇及乙醇助溶的氟苯尼考水溶液最大浓度仅为2%和0.7%。二甲基亚砜是一种强极性惰性溶剂,常温下为无色透明液体,热稳定性好,能溶于水、乙醇、氯仿等大多数有机物中,一向被称为“万能溶媒”,广泛应用于医药、石油、化工、印染等行业中尿、镇静作用。能增加药物吸收和提高疗效,因此在国外叫做“万能药”。中国药物检测中心等在60年代进行了全面的毒理检验及病理解剖证明:二甲基亚砜的半数致死量LD与二甲基亚砜相比,乙醇及甲醇对氟苯尼考的助溶效果较差,大量助溶剂的添加对药物溶解度提升作用不大,其优点是助溶的药物溶液稳定性高,低温下不易析出。而乙醇助溶组对药物抑菌效果影响较大,可能乙醇本身具有一定的杀菌效果,在大量添加助溶剂的同时,影响了正常药物抑菌效果的判定,而甲醇具有一定毒性,也可能对药物效果及抑菌实验有较大干扰作用。本实验结果表明,二甲基亚砜助溶效果最好,对药效影响最小,可作为氟苯尼考水溶制剂的首选助溶剂。配制溶液时应注意:1.配制氟苯尼考水溶液时,先加助溶剂,充分溶解氟苯尼考后,再加水。2.二甲基亚砜配制