临床化学检验试剂专家讲座

§1

临床诊疗试剂研发觉实状况1.1医学检验发展1.2国内临床诊疗试剂发展历程1.3临床诊疗试剂现实状况1.3.1临床生化试剂临床化学检验试剂专家讲座第1页

试剂盒发展及现实状况

方法学：化学法→酶法→免疫法

物理性状：液体型试剂（自配）→冻干型试剂→干(片)粉型试剂→液体型试剂

组合方式：多剂型试剂→单剂型试剂→双剂型（多剂型）试剂

操作方式：手工多步操作→离心式生化仪→分立式（双试剂功效）生化仪临床化学检验试剂专家讲座第2页临床生物试剂测定物分类名称酶类α-淀粉酶、α-羟丁酸脱氢酶、γ-谷氨酰转移酶、丙氨酸氨基转移酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB型同功酶、碱性磷酸酶、门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶糖类葡萄糖、果糖胺脂类胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A-1/B临床化学检验试剂专家讲座第3页§2国内临床诊疗试剂产业发展前景（1）

免疫诊疗试剂将会逐步取代临床化学试剂，成为诊疗试剂发展主流（2）

诊疗技术正在向两极发展。一是高度集成、自动化仪器诊疗，另一个是简单、快速便于普及快速诊疗临床化学检验试剂专家讲座第4页（4）产品更新应用加紧，因为遗传工程、基因重组以及单克隆抗体等当代生物技术不停应用和发展，使这些准确诊疗试剂能快速由研究阶段进入临床阶段，缩短了开发时间（3）检验产品种类将快速扩大临床化学检验试剂专家讲座第5页

§3化学试剂等级标准3.1国产化学试剂通用化学试剂，共分为四个纯度。市售化学试剂在瓶子标签上用不一样符号和颜色标明它纯度等级。试剂纯度不一样，其适用范围不一样。见下表临床化学检验试剂专家讲座第6页国产化学试剂品质规格级别名称符号色标说明一级优级纯GR绿色纯度高,适适用于研究和配制标准液二级分析纯AR红色纯度较高,适适用于定量分析三级化学纯CP蓝色纯度略低于二级试剂,用途与其相同四级实验试剂LR黄色质量较粗,用于普通定性试验临床化学检验试剂专家讲座第7页3.2国外生产化学试剂国外化学试剂规格种类繁多，颇不一致，和国产试剂规格对照,见表等级

规格符号

相当于国产试剂规格

Ⅰ

AR,GR,ACS,PA一级品

Ⅱ

CP,PUSS,LAB,Reinse二级品

Ⅲ

LR,EP,Pract,Rein三级品

Ⅳ

Pure四级品

临床化学检验试剂专家讲座第8页3.4.2基准试剂、色谱纯试剂(液相色谱淋洗剂)、色谱标样(色谱标准物)、标准物质和标准溶液、优级纯试剂、三类试剂(显色剂/染色剂/指示剂)、教学试剂、高纯金属单质(金属粉剂/金属粒剂/金属片剂)、摩尔酚剂、PH缓冲剂、滴定分析用当量（摩尔）标准溶液、滴定分析（容量分析）用标准溶液、杂质测定用标准溶液(离子液)、分析室惯用制剂、培养基等临床化学检验试剂专家讲座第9页§

4危险、有害化学品

4.1爆炸品注意防止撞击、摩擦、打火花和加热爆炸性物质（E符号）临床化学检验试剂专家讲座第10页4.2氧化剂能使易燃物质燃烧或使存在火烧更旺，使得救火更难。注意：保持远离易燃物质氧化性物质（O符号）临床化学检验试剂专家讲座第11页4.3极度易燃物质闪点在0OC以下液体和沸点/开始沸点最大值为35OC液体。注意：防止同全部火源接触4.4高度易燃物质易燃物质（F符号）临床化学检验试剂专家讲座第12页（3）对湿气敏感物质，同水接触时易形成易燃烧气体化学试剂。注意：防止接触湿气或水极易燃物质（F＋符号）（2）各种气体、气体混合物（还有液气体），在正常压力下同气体接触有着火范围。注意：防止形成易燃气体混合物，保持远离火源（1）自发易燃物质，在空气中易着火化学试剂。注意：防止接触空气临床化学检验试剂专家讲座第13页（5）在火源短期作用后，很易着火固体物质。注意：防止同全部火源接触（4）闪点低于21OC液体。注意：保持远离开放火源、热源和发生火花处临床化学检验试剂专家讲座第14页4.5很毒、有毒物质当吸入、吞入或同皮肤接触时对健康是很危险，甚至可造成死亡。非重复、重复或长久接触这些物质，可造成不可逆损害。注意：防止同人体接触，如有不适，马上看医生有毒物质（T符号）和极高毒性物质（T＋符号）临床化学检验试剂专家讲座第15页吸入和食入或皮肤渗透这些物质对人健康是有害。非重复、重复或长久接触这些物质造成不可逆损害。注意：防止同人体接触，包含吸入蒸汽，如有不适，马上看医生4.6有害化学品有害物质（Xn符号）临床化学检验试剂专家讲座第16页4.7腐蚀性化学品生活组织以及仪器同这些化学品接触后会破坏。注意：不要吸入蒸汽，防止接触皮肤、眼及衣服腐蚀性物质（C符号）临床化学检验试剂专家讲座第17页4.8有刺激性化学品注意：不要吸入蒸汽、防止同皮肤和眼接触刺激性物质（Xi符号）临床化学检验试剂专家讲座第18页§

5化学试剂保管化学试验所用药品种类多，有些对人有毒害作用，另一些易燃、易爆或有剧毒性，药品管理要以安全、不变质为标准。化学试剂保管应分类保管。5.1普通试剂保管（1）试剂必须按固体、液体分类并归类按需排列，[无机物按单质(金属和非金属)，氧化物(碱性氧化物、酸性氧化物和两性氧化物)，碱，酸和盐]进行分类做好登记，贮存与阴凉、避光、通风、干燥处。临床化学检验试剂专家讲座第19页（2）密封（3）避光（4）阴凉5.2危险品保管凡是能发生燃烧、爆炸、中毒、灼烧等灾害化学试剂都属于化学危险品。保留要严格恪守公安部门使用要求。临床化学检验试剂专家讲座第20页含有燃点低、易挥发，碰到高温、猛烈摩擦或撞击，极易着火和爆炸等特征。惯用易燃试剂有丙酮、乙醚、乙醇、异丙醇等，易爆试剂有苦味酸、叠氮钠等。

5.2.1易燃和易爆试剂5.2.2腐蚀性试剂对人、金属、塑料等都有不一样程度腐蚀作用。惯用有硫酸、冰醋酸、醋酸酐、硝酸、溴、氨水等。临床化学检验试剂专家讲座第21页5.2.3剧毒试剂凡生物试验半数致死量在50mg/Kg以下者均为剧毒药品，如氰化物、三氧化二砷、氯化汞等少许进入人体或接触皮肤即可造成中毒甚至死亡。应指定专员专柜加锁保管，严格登记请领制度。临床化学检验试剂专家讲座第22页§6标准参考物质

基准试剂、标准物质标准参考物（标准品）分级三种方法和三个参考物质概念，在每一等级测定方法与参考物质间有对应关系。6.1方法分级6.1.1决定性方法（definitivemethod）（1）定义：临床化学检验试剂专家讲座第23页是指准确度最高，系统误差最小，经详细研究，没有发觉产生误差原因或在一些方面不够明确方法，测定结果为“确定值”，与“真值”最靠近。（2）用途只用于发展及评价参考方法和一级标准品。国际上只有少数试验室进行研究，不能作为常规测定。临床化学检验试剂专家讲座第24页6.1.2参考方法（referencemethod）（1）定义是指准确度与精密度已经充分证实分析方法，干扰原因少，系统误差很小，与重复测定随机误差相比能够忽略不计，有适当灵敏度、特异性、直线性及较宽分析范围。（2）用途在条件优越试验室中应经常使用，主要应用于判定常规方法，评价其误差大小，干扰原因，并决定其是否能够被接收。它也用于判定二级标准品，为质控血清定值，也可用于评价商品试剂盒等。临床化学检验试剂专家讲座第25页6.1.3常规方法（routinemethod）方法性能指标符合临床或其它目标需要，有适当分析范围，而且经济实用。其中有些方法准确度已经确定方法。常规方法在作出评价以后，经相关学术组织认可后能够作为推荐方法。用作服务性试验室定量分析。临床化学检验试剂专家讲座第26页临床化学方法关系图临床化学检验试剂专家讲座第27页6.2标准物质分级6.2.1一级标准物质（原级参考物）（1）定义是一个稳定而均一物质，它一个或各种理化性质已充分了解，它数值已由决定性方法确定，或由高度准确方法确定，所含杂质也已定量，普通有权威机构（如美国国家标准局，英国物理试验室等）提供，有证书。（2）用途用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为二级标准品定值。临床化学检验试剂专家讲座第28页（3）分类

国家确认参考物质：由国家确认、其中成份含量在国家要求范围以内，并附有证书参考物。如美国国家标准局（NBS）参考物质属这类。生物源性参考物质：通常这类参考物质与测定标本完全是同类，也就是用混合人血清将其中成份用决定性方法测定后进行定值。临床化学检验试剂专家讲座第29页另一个拟似测定标本生物源性参考物（其性质与病人标本很靠近），其成份浓度必须用决定性方法或几个不一样类型高准确方法进行定值，已知干扰或可能干扰物质须有说明。生物源性参考物质惯用于评价方法可靠程度或用它证实干扰物质对参考方法或常规方法偏差，以及了处理定性方法、参考方法和常规方法三种结果之间相互关系。如定值参考血清属于这类。临床化学检验试剂专家讲座第30页6.2.2二级标准物质（次级参考物）（1）定义包含用于常规分析标准液。这类标准品可有试验室自己配制或为商品，它示值必须用一级标准品和参考方法，并由训练有素、能熟练掌握参考方法操作者确定。（2）用途主要用于常规方法评价或为控制物定值和常规测定结果计算。临床化学检验试剂专家讲座第31页（3）分类纯物质（通惯用水溶液或有机溶剂溶液）和生物源性介质（如透析后血清）中含参考物质成份制品纯物质本身就是第一标准物质或含有第一标准物质定值物质。生物源性介质配制所含各种被测成份须经参考方法定值。自制订值参考血清即属这类。临床化学检验试剂专家讲座第32页6.2.3质控物质是用生物源性介质制成（如人或动物血清），基本应用于常规室内或室间质量控制。有冻干与液体两种。6.2.4标准物质与测定方法关系见下页临床化学检验试剂专家讲座第33页

决定性方法

用途：评价参考方法及一级参考物一级标准

用途：发展及评价参考方法，校正决定方法及参考方法，生产二级标准物质参考方法

用途：为二级标准定值、评价常规方法（准确性、偏差、干扰原因）二级标准

用途：常规方法工作标准及为质控定值常规方法

用途：服务性试验室定量分析

质控

用途：质量控制临床化学检验试剂专家讲座第34页6.3.3标准液配制标准液属于二级标准物质，其示值准确性对检验质量有重大影响，必须在标准物质选者、恒重方法程序、基质（包含水）质量、最优化配方和制备工艺上都要严格要求6.3.4普通注意事项（1）试剂规格要求（2）对水要求（3）合理选取衡器和量器临床化学检验试剂专家讲座第35页6.3.5配制方法方法：直接法与间接法（1）直接法①用固体溶质配制试剂普通采取称重法②用液体溶质配制试剂采取容量法（2）间接法对于易失恒重或含量不准液体试剂可采取间接配制法临床化学检验试剂专家讲座第36页说明：（1）对多数原料配制时，需先烘干，烘干温度因物而已，多为105~110OC，烘干标准是恒重，要置于干燥器冷却后方能称重，配制标准液所用水质要求较高；（2）从理论上讲，作为临床生化测定标准液最好采取与被测物质相近介质-血清作为介质，但因现在不能制备一级标准血清，故普通还采取水溶液作介质。从发展方向看，水溶液样品必将被标准血清所取代。临床化学检验试剂专家讲座第37页6.4酶校准物6.4.1酶校准物使用方法使用酶校准物方法就是用公认酶校准物使一个或各种常规方法测定结果与标准方法相同，也就是经过酶校准物将不一样方法得出结果数值按标准物测定所选定标准方法来表示。它是利用标准物作为载体，使测定结果数值在标准方法和常规方法见传递。这么使用标准校准物，就是可能统一测定结果。临床化学检验试剂专家讲座第38页6.4.2公认酶校准物起源相关公认酶校准物起源当前已经有几个国家和国际组织发表了测定酶催化活性参考方法。欧洲标准局（BCR）和美国国家标准技术研究院（NIST）已经研制出了一些酶一级标准物（有证参考物，certifiedreferensematerialCRM或standardreferencematerialSRM）。临床化学检验试剂专家讲座第39页推出部分酶有证参考物（CRM）名称代码起源类型GGTCRM319猪肾ALPCRM371猪肾肝、骨、ALTCMR426猪心脏胞浆CKCRM299人胎盘LDCRM410人前列腺*保留条件为-20℃临床化学检验试剂专家讲座第40页6.4.3使用酶校准物优点6.4.4制备温度标准：以镓熔点（29.77OC）作为30OC标准。测定方法：以国际临床生化学会（IFCC）推荐法为准。制备参考物：要求酶必须起源于人体或试验证实于人体酶极为相同，并纯化到达一定要求。介质必须是血清，最好是人血清。临床化学检验试剂专家讲座第41页6.5脂类标准品─胆固醇标准参考物质制备6.5.1制备1.血清采集：采集健康人血液（胆固醇水平适当，即在5.2mmol/L），在无菌条件下分离血清，剔除溶血和乳靡血清。2.大量血清混合：6.5.2定值临床化学检验试剂专家讲座第42页6.6质控血清制备质量控制血清名称来自英文controlserum6.6.1基础物选择人血清最理想，但大量制备时血源有困难。国内应用较多为猪血清。要求：清澈、无肉眼可见溶血；无肝炎和支原体健康牛血清，并测定布氏杆菌凝集试验为阴性。临床化学检验试剂专家讲座第43页6.6.2搜集血清和分离血清

血清搜集采血可用静脉放血或屠宰动物时接血两种方法

分离血清方法（1）搅动血液直到血块出现，用手拉出凝快，弃去纤维蛋白。可是血清及红细胞成游离状态，离心沉淀时分离快；但注意不能过分搅动，要防止溶血可使血钾含量升高。（2）待血液自然凝固后划成小块，使血清尽快自行析出。临床化学检验试剂专家讲座第44页搜集血清置大型离心机沉淀两次，要除净红细胞等有形成份。操作过程尽可能采取无菌技术并防止溶血。将血清置于-20~-50OC低温条件下冰冻二十四小时以上，取出在室温中融化，增加冻融次数可减轻血清浊度（7次）。另一方法是化学沉淀法。临床化学检验试剂专家讲座第45页6.6.3加入及调整各成份质控血清普通分为高、中和低浓度三种。测定血清中各成份含量，依据需要进行透析除去小分子物质，或用将血清稀释后补加水溶性成份或酶等方法来制备不一样浓度血清。临床化学检验试剂专家讲座第46页6.6.4过滤WHO材料介绍要进行微生物检定。将除菌后所得血清，1滴加入巯基乙酸盐培养基中，置37OC；1滴加入胰酶水解大豆肉汤中，置25OC，1滴于血液琼脂平板上划线，置37OC。均经48小时孵育，检验有没有细菌生长。临床化学检验试剂专家讲座第47页8.6.5液体血清保留临床化学检验试剂专家讲座第48页

6.6.6分装临床化学检验试剂专家讲座第49页6.6.7贴瓶签临床化学检验试剂专家讲座第50页6.6.8储存

6.6.9判定临床化学检验试剂专家讲座第51页3.无菌检察。4.含水量测定。6.6.10单项质控血清制备高脂质控血清临床化学检验试剂专家讲座第52页6.6.11对质控血清要求（1）均匀一致，瓶间差异小，小于均数0.5%，普通不致显著影响分析精密度。（2）稳定，在使用期内控制成份应稳定不变或改变很小，不影响质控使用。（3）质控成份应有一个适合浓度，最好有三种不一样浓度（低值、正常值、病理性高值）质控血清，且高浓度、低浓度分别应到达该项目分析范围上限和下限。用3种浓度血清更轻易发觉分析范围线性改变，更准确判断系统误差性质和大小。如仅有一个浓度时，应采取生理参考值上限偏高为宜。临床化学检验试剂专家讲座第53页（4）一个控制血清“控制”项目应包含常做全部试验项目。临床化学检验试剂专家讲座第54页§

7.临床化学试剂盒

优点:节约了实际、时间和劳动力，提升了试验室工作效率;确保试验室结果可靠;节约试验时间。

试剂盒生产必须考虑到:使用方便及方便性、低干扰、质量和结果可靠性及成本—存在一个平衡关系，研制试剂盒时就要找到一个尽可能好平衡点。对试剂盒效期要求普通在六个月以上。临床化学检验试剂专家讲座第55页§

7.1试剂盒分类

按物理性状分：固体型（片剂型或干粉型，冻干型）；液体型；干片型

按组合方式：单剂型；双剂型；多剂型

交叉组合分类：冻干单剂型；冻干双剂型；液体单剂型；液体双剂型临床化学检验试剂专家讲座第56页7.1其它类型试剂盒1.快速反应试剂盒2.一步试剂盒3.多项同测组合试剂盒4.卡式试剂盒5.浓缩试剂盒临床化学检验试剂专家讲座第57页7.1液体双试剂盒特点1.提升了抗干扰反应能力2.使试剂更科学合理3.稳定性能良好4.试剂组分高度均一临床化学检验试剂专家讲座第58页7.2临床生化试剂盒质量控制7.2.1线性及线性范围

7.2.2准确性主要测定回收率、质控血清定值、对照试验剂干扰试验7.2.3精密度

7.2.4抗干扰作用

7.2.5灵敏度临床化学检验试剂专家讲座第59页7.2.6稳定性稳定性指标有三个（1）原包装试剂稳定性（2）复溶后试剂稳定性（3）不一样温度下保留期7.2.7正常参考范围7.3惯用临床化学试剂盒配置所用水均为二级交换水，化学试剂除特殊指定外均为分析纯，配制温度为室温，试剂在分装前均需用2号沙芯漏斗过滤，除去不溶物质。临床化学检验试剂专家讲座第60页7.4试剂盒性能评价7.4.1说明书审查7.4.2理学检验与评价

7.4.3性能指标检验与评价临床化学检验试剂专家讲座第61页§

8.试剂级水8.1自来水中污染物8.2试验室用水分级

8.2.1美国NCCLS等级水要求8.2.2GB6682-92分析试验室用水等级标准临床化学检验试剂专家讲座第62页美国NCCLS等级水要求指标Ⅰ级Ⅱ级Ⅲ级微生物含量（CFU/ml）<10<103

未定pH未定未定5.0~8.0电阻率(MΩ.cm)25OC102.00.1硅酸盐（SiO2mg/L）<0.05<0.1<1.0颗粒物质0.2μm微孔膜过滤未定未定有机物质活性碳过滤未定未定临床化学检验试剂专家讲座第63页分析试验室用水规格（GB6682-92）指标一级二级三级pH值范围25

OC——5.0~7.5电