瑞替加滨中甲醇、异丙醇、乙酸乙酯的残留溶剂测定

瑞替加滨中甲醇、异丙醇、乙酸乙酯的残留溶剂测定

硝基溶胶药物的化学名称为n-2-氨基-4-（4-氟苯基）氨基丙烯酸二羟基磺酸盐。这是一种合成氨基吡啶，具有强烈的抗牵张效应。瑞替加滨已经由FDA批准上市,疗效确凿,作用机制新颖,很有可能成为抗癫痫药物中的重磅炸弹级品种近年来,顶空毛细管气相色谱技术逐渐普及,成为药品中残留溶剂检测的首选方法,而关于瑞替加滨原料药中残留溶剂的测定和控制文献报道很少。参照《中国药典》2015年版四部规定由于异丙醇与乙酸乙酯的沸点非常接近,均在80℃左右,为了达到有效的分离,采用了程序升温,在220℃时保持4min,进样口温度为200℃,保证溶媒二甲基亚砜全部被吹出,不会影响下一次进样的测定,避免了直接进样时原料药样品对检测的干扰和对色谱柱的污染。所建方法专属性好,准确度和灵敏度高,可用于瑞替加滨原料药中有机残留溶剂的质量控制。1实验部分1.1顶空自动进样装置气相色谱仪:7820A型,配有色谱工作站,美国Agilent公司;顶空自动进样装置:7694E型,美国Agilent公司;电子分析天平:MS405DU型,德国赛多利斯公司;二甲基亚砜(DMSO):分析纯,天津大茂化学试剂厂;瑞替加滨原料药样品:吉林省药物研究院。1.2进样温度和平衡时间色谱柱:DB–WAX123–7032石英毛细管柱(30m×0.32mm,0.25μm);柱温采用程序升温:初始温度为35℃(保持0min),以4℃/min升至60℃(保持0min),以40℃/min升至220℃(保持4min);进样口温度:200℃;分流比为5∶1;检测器温度:250℃;载气压力:68.95kPa(10Psi);顶空瓶平衡温度:60℃;进样环温度:80℃;管线温度:120℃;平衡时间:30min;进样体积:1mL1.3溶液制备1.3.1混合对照品溶液分别精密称取适量甲醇、异丙醇、乙酸乙酯,加入二甲基亚砜溶解并稀释,配制成甲醇、异丙醇、乙酸乙酯的含量分别为2.923,4.996,5.159mg/mL的混合对照品溶液。1.3.2试验溶液取适量瑞替加滨原料药样品,精密称定,加入二甲基亚砜溶解并稀释制得质量浓度约为0.5g/mL的供试品溶液,。2结果与讨论2.1溶剂的选择溶解性试验表明,瑞替加滨原料药在二甲基亚砜中溶解良好,且二甲基亚砜作为溶剂不干扰待检测残留溶剂的测定,故选二甲基亚砜作为溶剂。2.2色谱峰高的确定精密量取混合对照品溶液5mL,置于20mL顶空瓶中,密封,进行试验。考察顶空平衡温度在50,55,60,65,70℃时3种溶剂色谱峰面积的变化情况。结果表明,随着加热温度的升高色谱峰高逐渐增大,当到达70℃时,色谱峰高有减小的趋势,且峰形变差,拖尾较严重,综合考虑选择平衡温度为60℃。在顶空平衡温度60℃的条件下,选择不同加热平衡时间进行试验,分别考察加热平衡时间为20,25,30,35,40min时3种溶剂色谱峰面积的变化情况。结果显示:加热平衡时间小于30min时,随着平衡时间的增加,色谱峰面积逐渐增加;加热平衡时间为30min时色谱峰面积趋于稳定;加热平衡时间大于30min时色谱峰面积反而减小。因此选择加热平衡时间为30min。2.3对标准偏差的影响精密量取混合对照品溶液,连续进样5次,记录色谱图,见图1。由图1可知,各溶剂峰均能分开,峰形良好,没有杂质干扰。甲醇、异丙醇、乙酸乙酯色谱峰面积测定结果的相对标准偏差分别为1.97%,1.68%,2.24%(n=5)。《中国药典》中对系统适用性有明确要求,待测物的色谱峰理论塔板数一般不低于5000,与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5。实验中以混合对照品溶液为测试液,在优化色谱条件下进样,甲醇、异丙醇、乙酸乙酯各组分的保留时间分别为1.415,1.544,1.936min;分离度分别为2.98,6.55,1.80;理论塔板数分别为17561,19533,31330。结果表明建立的分析方法能够满足药典对系统适用性的要求。2.4标准工作溶液的制备精密量取混合对照品溶液0.5,1,2,3,4,5mL置于5个50mL容量瓶中,加入二甲基亚砜至标线,摇匀,得系列标准工作溶液。分别量取5mL,置于20mL顶空瓶中,密封,按实验方法测定。以待测组分的质量浓度X为横坐标,以峰面积Y为纵坐标进行线性回归。甲醇、异丙醇、乙酸乙酯的线性方程、相关系数及线性范围见表3。由表3可知,3种溶剂线性方程的相关系数均为0.996,符合检测质量控制要求。采用外标曲线法可实现药物中溶剂残留量的准确定量。2.5检出限的确定取混合对照品溶液逐级稀释,然后按样品分析方法平行测定6次,按照国际理论和化学联合会(IUPAC)的规定,以S/N=3计算方法的检出限。经计算得甲醇、异丙醇、乙酸乙酯的检出限分别为0.036,0.213,0.062μg/mL。所建方法灵敏度高,满足《中国药典》2015年版四部规定的安全检测要求。2.6测定结果的标准偏差移取混合对照品溶液6份,分别进行测定,记录各组分的峰面积,计算甲醇、异丙醇、乙酸乙酯色谱峰面积测定结果的相对标准偏差,结果见表4。由表4可知,甲醇、异丙醇、乙酸乙酯色谱峰面积测定结果的相对标准偏差(RSD)分别为4.96%,4.52%,4.34%,均小于药物质量控制方法的规定[RSD不大于5.0%(n=6)],可见所建方法的精密度良好,满足原料药溶剂残留的质量控制要求。2.7回收率2.7.1混合标准品溶液精密称取瑞替加滨原料样品各0.5g置于顶空进样瓶中。移取混合标准品溶液1mL,用二甲基亚砜稀释至10mL。精密量取稀释液5mL分别置顶空进样瓶中,密封,使样品溶解,按实验方法测定,计算回收率,结果见表5。2.7.2标准品回收率精密称取瑞替加滨原料样品各0.5g置顶空进样瓶中,精密量取浓度为2.5715mg/mL和2.6575mg/mL的异丙醇和乙酸乙酯的混合标准品溶液5mL,分别置于顶空进样瓶中,密封,使其溶解,按实验方法测定,计算异丙醇和乙酸乙酯的回收率,结果见表5。实验结果表明,甲醇的平均回收率为103.83%,RSD为1.96%;异丙醇平均回收率为105.16%,RSD为2.40%;乙酸乙酯平均回收率为101.36%,RSD为1.85%。可满足准确度实验平均回收率在90%~110%,RSD小于5.0%的规定,表明本方法准确度良好。2.8样品检测结果分别精密称取3批样品(批号为140924、140927、150107)各0.5g,置顶空瓶中,加人二甲基亚砜溶解,摇匀,顶空进样测定,结果见表6。由表6可知,3批样品中甲醇残留量分别为0.019%,0.042%,0.035%,异丙醇和乙酸乙酯均未检出。根据《中国药典》2015年版四部规定,甲醇属于第二类溶剂,限度为0.3%,异丙醇、乙酸乙酯属于第三类溶剂,限度为0.5%。可见被检的三批样品中甲醇的含量均小于限度,异丙醇和乙酸