药物分析药物的杂质检查

基本要求一、掌握普通杂质检验原理、方法和计算。二、熟悉特殊杂质检验方法和原理。三、了解热分析在药品分析中应用。返回药物分析药物的杂质检查第1页一、药品纯度要求1．药品纯度概念：药品纯度是指药品纯洁程度。2.药品纯度要求是不停提升：

比如：度冷丁1948年收入BP，1970年经GC分离判定出两种无效异构体（Ⅱ）和（Ⅲ），有时高达20%～30%。再如：ASA中除了SA外，还存在乙酰水酸酐、乙酰水杨酰水杨酸等SA衍生物，含有致敏作用。第一节概述药物分析药物的杂质检查第2页

3．药品纯度评价：

应把药品性状、理化常数、杂质检验、含量测定等作为一个有联络整体来评价药品纯度。药物分析药物的杂质检查第3页二、杂质起源与种类了解药品中杂质起源和种类，可制订出检验项目和方法杂质概念药品中存在无治疗作用，影响药品疗效和稳定性，甚至对人体健康有害物质，称为药品杂质。药物分析药物的杂质检查第4页（一）杂质起源有两个方面：一是在生产过程中引入；二是在贮藏过程中引入。1.生产过程中引入杂质主要指药品在合成过程中，未反应原料、中间体和副产物比如：药用NaClBr-、I-、SO42-、K+、Ca2+、Mg2+、Fe3+ASA中SA；地西泮中去甲安定；吗啡中罂粟碱药物分析药物的杂质检查第5页再如制剂中生成杂质：ASA片、栓剂中SA检验；盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇检验。

生产过程中残留有机溶剂、酸性或碱性杂质检验。

药品中无效、低效异构体或晶型检验比如：无味氯霉素存在A、B晶型，其中B为有效，A为低效。苯甲咪唑有A，B，C三种晶型；20%；40%～60%；90%

药物分析药物的杂质检查第6页

2.贮藏过程引入杂质主要指外界条件改变或微生物作用可能发生水解、氧化、异构化、晶型转化、聚合等改变，而产生相关杂质。如：ASA水解生成SA和醋酸；阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸；麻醉乙醚氧化为醛和有毒过氧化物。药物分析药物的杂质检查第7页（二）杂质种类与分类

按杂质起源分为普通杂质和特殊杂质；按性质可分为信号杂质和有害杂质。普通杂质是指在自然界中分布较广泛，在各种药品生产和贮藏过程中轻易引入杂质。特殊杂质是指在个别药品生产和贮藏过程中轻易引入杂质。信号杂质一般无害，但其含量多少能够反应出药品纯度水平，氯化物、硫酸盐等就属于信号杂质。有害杂质，如重金属、砷盐、氰化物等，对人体有害，在药品标准中必须严格控制。

药物分析药物的杂质检查第8页三、杂质限量检验

1．杂质限量概念药品中所含杂质最大允许量，叫做杂质限量。通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。药物分析药物的杂质检查第9页

2．杂质限量计算杂质限量计算公式：杂质限量=杂质最大允许量÷供试品量×100%=标准液浓度×体积÷供试品量×100%

L（%）=C×V/S×100%例1．对乙酰基酚中氯化物检验：已知：S=2.0g×25/100；C=10μg/ml；V=5.0ml

求：L=？

解：L=C×V/S×100%=10×5.0/2.0×106×25/100×100%=0.01%

药物分析药物的杂质检查第10页例2．葡萄糖中重金属检验：已知：S=4.0g；C=10μg/ml；L=5×10-6

求：V=？

解：V=L×S/C=5×10-6×4.0/10×10-6=2.0(ml)例3．葡萄糖中砷盐检验：已知：V=2.0ml；C=1μg/ml；L=0.0004%

求：S=？

解：S=C×V/L=1×10-6×2.0/4×10-6=0.5(g)药物分析药物的杂质检查第11页

例4．磷酸可待因中吗啡检验：已知：V=5.0ml；C=0.02mg/ml；S=0.1g

求：L=？

解：L=C×V/S=5.0×0.02/0.1×1000×100%=0.1%

注意点①单位一致②稀释倍数③表示方法（%，mmp）返回药物分析药物的杂质检查第12页第二节普通杂质检验方法一、氯化物检验1．原理：是利用氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成氯化银混浊液比较，以判断供试品中氯化物是否超出限量。Cl-+Ag+AgCl药物分析药物的杂质检查第13页

2．条件：

[Cl-]0.05mg～0.08mg/50ml,即相当于标准氯化钠溶液5ml～8ml。

酸度稀硝酸10ml/50ml。

温度30～40℃

药物分析药物的杂质检查第14页

3．干扰排除

（1）供试品液混浊：可用含硝酸蒸馏水洗净氯纸中氯化物后过滤来消除混浊对氯化物检验干扰。

药物分析药物的杂质检查第15页

（2）供试品有色：可采取内消色法，按中国药典附录要求方法处理。供试品+AgNO3放置10min澄清溶液+标准NaCl+水对照溶液供试品+AgNO3+水供试品溶液暗处放置5min后比较药物分析药物的杂质检查第16页。二、硫酸盐检验法

1．原理

是利用SO42-在盐酸酸性溶液中与氯化钡试液作用，生成硫酸钡白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成硫酸钡浑浊液比较，以判断供试品中硫酸盐是否超出限量。

药物分析药物的杂质检查第17页

2．条件：[SO42-]0.1mg～0.5mg/50ml,即相当于标准硫酸钾溶液1～5ml。

酸度稀盐酸2ml/50ml。3．干扰排除供试品有色：可采取内消色法。药物分析药物的杂质检查第18页

三、铁盐检验法（一）硫氰酸盐法1．原理

Fe3++6SCN-{Fe(SCN)6-]3-

红色2．条件：[Fe3+]0.01mg～0.05mg/50ml,即相当于标准铁溶液1～5ml。酸度稀盐酸4ml/50ml。

HCl药物分析药物的杂质检查第19页

3．干扰排除（1）当有Fe2+存在时，加氧化剂过硫酸铵氧化Fe2+成Fe3+。（2）当供试液管与对照溶液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色。药物分析药物的杂质检查第20页(二）巯基醋酸法

1.原理巯基醋酸还原Fe3+为Fe2+，在氨碱性试液中与Fe2

+

作用生成红色配位离子。2Fe3++2HSCH2COOH2Fe2++SCH2COOH+2H+

SCH2COOHFe2++2HSCH2COOHFe(SCH2COOH)2+H+Fe(SCH2COOH)2[Fe(SCH2COOH)2]2-+2H2O

2OH-药物分析药物的杂质检查第21页2.说明

在加巯基醋酸溶液前，先加枸橼酸溶液，使其与铁离形成配位离子，以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉淀。（此法灵敏度比较高，但试剂较贵）药物分析药物的杂质检查第22页四、重金属检验法重金属是指在试验室条件下与S2-作用显色金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等，因为药品生产过程中碰到铅机会比较多，铅在体内友易积蓄中毒，故检验时以铅作为代表。

药物分析药物的杂质检查第23页中国药典（）重金属检验法一共收载了四种方法

第一法为硫代乙酰胺法；第二法是将供试品在500~600℃在500炽灼破坏后，再按第一法检验；第三法是检验能溶入碱溶液，而不溶于酸溶液药品，在碱性条件下用硫化钠作显色剂；第四法为微孔滤膜法，比较供试溶液和对照溶液铅斑颜色，来判断供试品种重金属是否超出限量。重点讨论第一法。药物分析药物的杂质检查第24页

1．原理

CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S合格＜H2S+Pb2+PbS+2H+

2．条件：[Pb2+]10µg～20µg/27ml,相当于标准铅溶液1～2ml。

酸度pH3.0～3.5.合格＜

pH3.5药物分析药物的杂质检查第25页3．干扰排除

(1)供试品有色：可采取外消色法消除干扰。(2)供试品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氢析出硫，产生混浊影响比色，可加Vc或盐酸羟胺使Fe3+氧化成Fe2+离子再检验。

药物分析药物的杂质检查第26页五、砷盐检验法

《中国药典》采取古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC）检验药品中微量砷盐。（一）古蔡法Gutzeit)(BP也采取此法）

1.原理As3++3Zn+3H+3Zn++AsH3

AsO33-+3Zn+9H+3Zn++3H2O+AsH3

AsO43-+4Zn+11H+4Zn++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3(棕色)2As(HgBr)3+AsH33AsH(HgBr)2(黄色)

As(HgBr)3+AsH33HBr+As2Hg3(棕黑色)药物分析药物的杂质检查第27页2.装置与试剂作用

(1)验砷仪砷化氢发生瓶;中空磨口塞;导气管(2)试剂作用合格＜①KI-SnCl2作用：交替还原作用；首先将AsO43-还原成AsO33-，生成碘再被还原成碘离子。药物分析药物的杂质检查第28页

AsO43-+2I-+2H+

AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+2I-+Sn4+

4I-+Zn2+[ZnI4]2-药物分析药物的杂质检查第29页

②Zn粒与氯化亚锡作用，在其面上形成Zn-Sn齐，起去极化作用。③Pb(AC)2棉作用是消除供试品可能含有少许硫化物。S2-+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgS（汞斑）H2S+Pb(AC)2PbS+2HAC

药物分析药物的杂质检查第30页

3.干扰排除（1）供试品为S2-,SO32-,S2O32-等:因在酸中生成H2S,SO2,与HgBr作用生成HgS或Hg，干扰砷斑检验。用硝酸氧化成硫酸盐可消除。（2）供试品为Fe3+能消耗KI，SnCl2

应测定条件，先可加足量KI。药物分析药物的杂质检查第31页

（3）含锑药品

锑盐被还原为SbH3与HgBr2试纸作用，产生灰色锑斑，干扰砷斑检验，可改用Betterdorff法。药物分析药物的杂质检查第32页（二）Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸银，USP采取此法)

1.原理：是利用砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中银还原为红色胶态银，以Ag-DDC溶液为空白，于510nm波优点，测定吸收度，供试品溶液吸收度不得大于标准砷溶液吸收度。2.试剂作用：同古蔡法。药物分析药物的杂质检查第33页六、溶液颜色检验法溶液颜色检验法是控制药品中有色杂质量方法。中国药典（）收载有三种方法：K2Cr2O7黄、绿1.标准比色液进行比较方法标准比色液CoCl2橙黄,橙红2.分光光度法CuSO4棕红3.色差计法经过测定供试品与标准比色液或水之间色差值药物分析药物的杂质检查第34页七、易炭化物检验法是检验药品中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，常采取与标准比色液比色方法进行检验。(标准比色液为CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4)

药物分析药物的杂质检查第35页

是检验药品中微量不溶性杂质。常采取与浊度标准液比浊方法进行检验。浊度标准液制备原理：(CH2)6N4+6H2O6HCHO+4NH3HCHO+H2N-NH2H2C=N-NH2+H2O

甲醛腙白色混浊

不一样级号浊度标准液级号0.51234浊度标准原液（ml）2.55.010.030.050.0水（ml）97.595.090.070.050.0八、溶液澄清度检验法药物分析药物的杂质检查第36页九、炽灼残渣检验法(residueonignition)BP称硫酸灰分（sulphatedash)是检验有机药品中混入各种无机杂质。常采取重量方法进行检验。

残渣及坩埚重—坩埚重

残渣%=×100%

供试品重药物分析药物的杂质检查第37页十、干燥失重检验法主要检验药品中水分及其它挥发性物质。常采取重量方法进行检验。惯用方法有四种：（一）常压恒温干燥法

（二）干燥剂干燥法

（三）

减压干燥法药物分析药物的杂质检查第38页热重分析法（四）热分析法（thermoanalysis)

差示热分析差示扫描量热法1.热重分析法（thermogravimetricanalysis,TGA)

在程序升温下，测量物质质量与温度关系，研究物质在加热同时失重情况下，所发生质改变，惯用于药品稳定性研究；珍贵和易氧化药品干燥失重测定。(长春碱)药物分析药物的杂质检查第39页2.差示热分析（differentialthermlanalysis,DTA)

是在程序升温下，测量被测物质和参比物之间温差与温度关系一个技术。参比物是一个惰性物质，在加热过程中不发生相变和化学改变。所以温差(△T)只与被测物质量质改变相关。△T=0被测物未发生吸热或放热反应;△T=-为吸热峰;△T=+为放热峰.药物分析药物的杂质检查第40页测药溶点

DTA在药品分析中应用尖峰为物理改变药品定性分析宽峰为化学改变估测药品纯度药物分析药物的杂质检查第41页3.差示扫描量热法(differentialscanningcalorimetry,DSC)是在程序升温下，测量维持样品和参比物温度相同，系统所需供给样品随温差改变能量一个技术。DSC与DTA不一样之

处是统计方式不一样，是统计系统供给能量，吸热供给能量；放热降低供给能量。在药品分析中应用与DTA相同。DSC-TG常联合用。药物分析药物的杂质检查第42页十一、有机溶剂残留量测定法[ChP(1995)]主要检验药品在生产过程中引入有害有机溶剂(如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、环氧乙烷、二氧六环等）。常采取气相色谱法方法进行检验。惯用方法有二种：①直接进样法和②顶空进样法（试用于挥发性大样品测定）。色谱系统性试验要求：(1)N＞1000;(2)用内标法测定时，要求R＞1.5;(3)外标法测定时，待测物峰面积RSD＜10%。药物分析药物的杂质检查第43页残留有机溶剂测定方法和限量有机溶剂柱温（℃）内标物测定方法限量（%）二氧六环170吡啶1法0.038吡啶170二氧六环1法0.02苯170甲苯1法或2法0.0002甲苯170苯1法或2法0.089氯方140二氯甲烷1法或2法0.006二氯甲烷1401法或2法0.06环氧乙烷802法0.001返回药物分析药物的杂质检查第44页第三节特殊杂质检验方法

一、利用药品和杂质在物理性质上差异（一）臭味及挥发性质差异比如：黄凡士林中异性有机物检验：本品2.0g,直火加热无辛味。浓过氧化氢中不挥发性杂质检验：10ml水浴蒸干残渣＜15mg（二）颜色差异比如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物检验：取本品2.0g，加NaOH试液10ml，加水25ml，与黄色3号比色液比，

不得更深。药物分析药物的杂质检查第45页（三）溶解行为差异比如：吡哌酸中碱中不溶物吡哌酸甲酯（I）和（II）检验（四）旋光性质差异比如：硫酸阿托品中莨菪碱检验：本品溶液(50mg/ml)α＜-0.4

药物分析药物的杂质检查第46页

（五）对光吸收性质差异1.紫外分光光度法：比如:地蒽酚中二羟基蒽醌检验再如：苯丙醇中苯丙酮检验：可利用供试液吸收度比来控制杂质;纯品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59;99.5%时A247nm/A258nm=0.79;

所以要求供试品A247nm/A258nm＜0.79;即所含苯丙酮＜0.5%.药物分析药物的杂质检查第47页2.原子吸收分光光度法：是经过测定药品中所含待测元素原子蒸气，吸收发自光源该元素特定波长程度，以求出药品中待测元素含量。限量检验时：对照品液=供试品+限量-----a

供试品液=------------------

b

符合要求时b＜(a-b);b＞(a-b)不合格。药物分析药物的杂质检查第48页3。红外分光光度法：

主要用于药品中无效或低效晶型检验，如甲苯咪唑中A晶型检验药物分析药物的杂质检查第49页

A晶型C晶型在640cm-1有强吸收吸收很弱在662cm-1吸收很弱有强吸收662cm-1640cm-1662cm-1640cm-1供试品+10%A晶型D2D1

供试品D2D1＜10%

R=D1/D2＞R’=D’1/D’2药物分析药物的杂质检查第50页

4.荧光分析法

3,4-二去氢利血平利血平中氧化产物检验：利血平(无荧光)(I)(黄绿色荧光)3,4,5,6-四去氢利血平(II)(蓝色荧光)药物分析药物的杂质检查第51页(六)吸附或分配性差异

1.薄层色谱法(TLC)(1)杂质对照品法比如:盐酸左旋咪唑中检验硅胶G2,3-二氢-6-苯基咪唑[2,1-b]噻唑盐苯:甲醇:冰HAC

样品

对招品。·····药物分析药物的杂质检查第52页

(2)高低浓度对比品法比如:盐酸异丙嗪中相关物质检验硅胶G有多个杂质而且结构不清样品10mg/ml;对照品(1)0.15mg/ml己烷:丙酮:乙胺(2)0.05mg/ml

样品液对(1)(2)

供试液杂质斑点不多于3个;杂质斑点与对照(2)主斑点比较,不得更深;如有一点超出,应不深于对照液(2)主斑点.......

....

...药物分析药物的杂质检查第53页2.纸层析法(PC)

惯用于极性大药品分离、分析，如地高辛中相关杂质检验。药物分析药物的杂质检查第54页3.高效液相色谱法(HPLC)（1）峰面积归一化法：L%=∑Ai/(∑Ai+A主）×100%比如：利巴韦林中相关杂质检验：对照品液(5μg/ml)进样10μl,调灵敏度，使主峰达满量程20%～25%样品液(0.4mg/ml)进样10μl,杂质∑Ai＜(∑Ai+A主）1.0%药物分析药物的杂质检查第55页（2）不加校正因子主成份对照法

对照品液为供试品稀释液进样测得A主

供试品液进样测得∑Ai

其∑Ai＜A主即为合格.

比如:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑:对照品液(0.01mg/ml)进样20μl,调灵敏度，使主峰达10%～30%样品液(0.14mg/ml)进样20μl,杂质∑Ai＜A主1.0%.药物分析药物的杂质检查第56页（3）内标法加校正因子测定供试品中杂质含量

对照品+内标进样求校正因子（f)=(As/Cs)/(AR/CR)

供试品+内标进样求AX.AS,则杂质浓度CX=f×AX/(AS/CS)药物分析药物的杂质检查第57页

4.气相色谱法(GC)

主要用于药品中挥发性杂质检验，其检验方法与HPLC法相同。药物分析药物的杂质检查第58页二、利用药品和杂质在化学性上差异（一）酸碱性差异

1.要求消耗滴定液体积比如己酸羟孕酮中正己酐、对甲苯磺酸检验：(NaOH0.02mol/L)取本品0.20g+中性乙醇+溴麝香草酚蓝微蓝色＜0.50ml2.pH法比如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二酸检验：0.01g/mlpH3.0～4.5.3.指示剂法

比如苯巴比妥中苯基丙二酰脲检验：其水溶液不得使甲基橙显红色。药物分析药物的杂质检查第59页（二）氧化还原性差异比如：NaCl中I-和Br-检验EOCl/2Cl-=+1.3595V＞EOBr/2Br-=+1.065V

＞EOI/2I-=+0.5345V,所以+NaNO2+H2SO4+淀粉显蓝色

再比如：盐酸吗啡中阿朴吗啡检验：后者可被碘氧化生成水溶性绿色化合物。所以ChP要求：本品50mg+4mlH2O+1dI2+5ml乙醚乙醚层不得显红色；水层不得显绿色。药物分析药物的杂质检查第60页（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀例一、间苯二酚中邻苯二酚检验：后者+Pb(Ac)2

白色∴ChP要求：本品0.5g+10mlH2O+2d稀醋酸+0.5mlPb(Ac)2

不得发生混浊，即为合格。例二、硝酸毛果芸香碱中其它生物检验：后者+氨水+K2Cr2O7∴ChP要求：本品0.2g+20mlH2O两份；I份+数滴氨试液；另1份+数滴K2Cr2O7试液，均不得发生混浊。药物分析药物的杂质检查第61页（四）杂质与一定试剂反应产生颜色例一、盐酸普萘洛尔中游离α-萘酚检验：利用后者可与重氮盐发生重氮化-偶合反应，生成偶氮染料。∴ChP要求：供试品20mg+乙醇与10%NaOH液各2ml+重氮苯磺酸试液1ml,放置3min；如显色，与0.3mlα-萘