蛋白粉急性经口毒性试验

蛋白粉急性经口毒性试验

蛋白粉是由豆分析的主要原料，与乳清蛋白配合而成的含有蛋白质的温和食品。它方便，脂肪含量低，不含胆固醇，长期服用没有动物蛋白质的副作用。本研究依据中华人民共和国卫生部《食品安全性毒理学评价程序和方法》对国内某厂家生产的蛋白粉进行了急性经口毒性及致突变作用的检测,现将结果报告如下。1材料和方法1.1材料表面1.1.1测试对象蛋白粉,由国内某生产厂家提供,样品呈淡黄色粉末。1.1.2试验对象动物清洁级KM小鼠、SD大鼠,由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供。实验动物生产许可证号:SCXK(湘)2009-0012。1.1.3试验中的细菌鼠伤寒沙门菌,由华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境医学研究所提供。1.2实验方法1.2.1动物分组及处理根据预试验结果,采用最大耐受量法进行正式试验。试验设20.0gkg·bw一个剂量组,分别选取昆明小鼠、SD大鼠各20只,雌雄各半,隔夜禁食16h,不限制饮水。按20mlkg·bw两次经口灌胃给予受试液(间隔4h)。连续观察14d,记录动物的中毒症状和死亡情况,试验结束称体重后处死动物作大体解剖。1.2.2阳性突变剂+回复突变法试验采用平板掺入法,在加与不加S-9的条件下进行测试。根据预试验结果,试验设8、40、200、1000、5000μg皿五个剂量,同时设自发回变、溶剂对照(蒸馏水)和阳性突变剂对照。每个剂量3个平皿,37℃培养48h后,计数每皿回复突变菌落数。如果受检样品的回复突变菌落数超过自发回复突变菌落数的2倍以上,并有剂量-反应关系者定为阳性。试验在相同条件下重复做两次。1.2.3单次给受试物法试验设2.50、5.00和10.0gkg·bw三个剂量组,另设溶剂(蒸馏水)对照及环磷酰胺阳性对照组(40mgkg·bw)。将昆明小鼠50只,体重26.5～30g,雌雄各半,随机分为5组。试验采用30h给受试物法,即两次给受试物间隔24h,第二次给受试物后6h颈椎脱臼处死动物。取胸骨骨髓进行制片,固定,Giemsa染色后,在油镜下每只小鼠计数1000个嗜多染红细胞(PCE)中含微核细胞数,计算微核的千分率。观察200个红细胞中嗜多染红细胞与成熟红细胞比值(PCENCE)。各剂量组及阴性对照组的微核率用泊松分布进行统计学处理。阳性对照组微核率按正态分布处理,按动物性别分别统计,采用U检验进行比较。1.2.4gbw对环磷酰胺阳性对照的治疗将雄性昆明小鼠25只,体重28～32g,随机分为5组,每组5只动物,试验设2.50、5.00和10.0gkg·bw三个剂量组,另设溶剂(蒸馏水)对照及环磷酰胺阳性对照组(40mgkg·bw)。灌胃体积按20mlkg·bw每日经口灌胃一次,连续灌胃5d,于首次给受试物后第35d,脱颈椎处死动物取两侧附睾进行制片,甲醇固定,2%伊红染液染色后,在高倍镜下每只动物计数1000条完整精子,记录精子畸形,畸形类型及计算精子畸形率。2结果2.1大鼠在14d的观察期急性毒性试验经口灌胃给予受试蛋白粉后,雌雄昆明小鼠、SD大鼠在14d的观察期内未出现明显的中毒症状,亦无死亡。受试蛋白粉对昆明小鼠和SD大鼠急性经口MTD值大于20.0gkg·bw,见表1。2.2回复突变实验结果见表2、表3。受试物各剂量组对试验菌株在加与不加S-9代谢活化系统条件下,回复突变数均未超过自发回变数的两倍,亦无剂量-反应关系。2.3小鼠骨髓pce微核试验结果见表4。各剂量组PCENCE比值正常,未见受检样品对昆明雌、雄小鼠骨髓细胞增殖有抑制作用。阴性对照组昆明雌、雄小鼠骨髓PCE微核率分别为1.2‰和0.8‰。各剂量组昆明雌、雄小鼠骨髓PCE微核率分别为0.4‰～0.8‰和0.8‰～1.6‰,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。阳性对照组昆明雌、雄小鼠骨髓PCE微核率分别为30.8‰和30.0‰,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。2.4精子畸变试验见表5。阴性对照组昆明雄性小鼠精子畸变率为1.64‰,受检样品各剂量组精子畸变率为1.76‰～2.12‰,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。阳性对照组精子畸变率为4.22‰,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。精子畸形类型主要表现以无钩、不定型为主。3急性毒性及致突变试验作为一种新型的营养保健食品,蛋白粉越来越受到了消费者的青睐。蛋白粉一般是采用提纯的大豆蛋白、或酪蛋白、或乳清蛋白、或上述几种蛋白的组合体构成的粉剂,具有蛋白含量高、氨基酸种类齐全、无胆固醇的特点,比普通蛋白质食品营养价值更高受试蛋白粉样品对雌雄大、小白鼠的急性经口(MTD)均大于20gkg·bw,根据急性毒性分级标准,说明受试蛋白粉属无毒级。致突变试验通常采用反映基因突变、体细胞突变和反映遗传危害(生殖细胞突变)的配套试验来检测外来化合物的诱变性。本实验采用Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验检测蛋白粉的致突变作用,研究结果