【一例新城疫的诊断与治疗6000字（论文）】

一例新城疫的诊断与治疗目录TOC\o"1-3"\h\u10309摘要 19887文献综述 370461.新城疫概述 3204432.新城疫病毒的结构 3239863.新城疫的流行病学 4183914.新城疫的临床症状 520956一例新城疫的诊断与治疗 641351发病情况调查与临床症状 6243552检查方法 6142762.1整体诊断 6295912.2解剖诊断 6275592.3细菌检查 6191483.结果 6147403.1初步诊断 6250923.2解剖诊断 7322653.3细菌检查 7202053.4病毒的分离 7324083.5病毒RT-PCR验证 753754.诊断与治疗 9318124.1治疗 9140694.2治疗效果 996245.讨论与小结 9279025.1做好环境消毒 9201055.2加强饲养管理 10280645.3免疫接种 1017514参考文献 11一例新城疫的诊断与治疗摘要：目前，中国进入经济飞速发展的时代，畜牧业也进入了飞速发展的时代，畜牧业向着集约化、规模化和现代化的方向发展，人们对畜牧产品的数量和质量的需求都发生了非常大的变化。在当前规模化、集约化、规范化的畜牧生产中，在饲料禁抗、替抗的国际大背景下，用新的方法提高畜禽免疫力、促进生产性能的提高至关重要。NDV（Newcastlediseasevirus，新城疫病毒）新城疫病毒是日常生活中的一种常见病毒，其对家禽、野鸟等有着较高的感染性，被认为是危害中国乃至全世界养禽业最重要的流行病毒之一。某肉鸡养殖场突然出现雏鸡精神不佳、产蛋量下降等症状，通过诊断发现是爆发新城疫。本文就针对新城疫的诊断与治疗进行探究，通过对一起新城疫的诊断与治疗分析探究，以期对于新城疫的诊断与治疗提供参考，减少新城疫的发生，并且降低养殖户或养殖企业的经济损失。关键词：新城疫；鸡；养殖业文献综述1.新城疫概述新城疫（Newcastledisease）是禽类的一种急性、败血性和高度接触性传染病[1]，由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus,NDV）引起，是世界公认的禽类传染病之一[2-3]，为单股负链RNA病毒，其基因组结构3'-leader-NP-P-M-F-HN-L-trailer-5'[4-5]。其中融合蛋白是构成NDV小的表面纤突，使病毒与宿主细胞膜融合，介导病毒进入细胞，与病毒的毒力相关；凝集素神经氨酸酶蛋白具有血凝素和神经氨酸酶活性，能与肿瘤表面的唾液酸受体结合，介导病毒吸附细胞膜；大聚合酶蛋白具有RNA依赖的RNA聚合酶活性[5,8-10]。NDV基因组长度约为15kb,分子量约为51-57kDa，直径约为100-250nm，因囊膜破损而病毒粒子形态不规则[11-12]。病毒粒子核心由螺旋卷曲对称的核衣壳组成，直径为17nm，外面有双层脂质囊膜，表面覆盖8nm长的纤突。2.新城疫病毒的结构NDV的基因组编码多种蛋白质，这些蛋白在其复制、传播、感染、致病等方面起着决定性作用[13]。先来说说6种结构蛋白。NDV的包膜含有两种跨膜糖蛋白，HN蛋白参与宿主细胞受体的附着和病毒的释放，F蛋白则介导病毒与宿主细胞膜融合，并在NDV毒株的毒力中起主要作用，HN蛋白则辅助F蛋白的功能[14-15]。F蛋白由无活性的前体蛋白F0被蛋白水解切割活化成两个二硫键连接的亚基F1和F2生成[16]。F蛋白切割位点处的氨基酸序列决定了不同类型细胞蛋白酶的底物特异性。F蛋白裂解位点序列已被证明是NDV毒力的主要决定因素[17]。同样，F蛋白也是NDV疫苗研究中的主要抗原，由F蛋白引发的抗体可以保护鸡免受致命的NDV攻击[18]。NDV基因组RNA与NP、P和L蛋白一起形成RNP复合物，作为病毒基因组转录和复制的活性模板，在病毒的复制和传播过程中起着重要作用[19]。其中，NP蛋白作为病毒颗粒中存在最丰富的蛋白质，它与基因组RNA形成核-衣壳核心，P和L蛋白则依附其中，形成人字形构造，以此来形成RNP复合物[20]。P蛋白则主要用于稳定P-L复合物中的L蛋白，然后作为病毒RNA依赖性RNA聚合酶起作用。L蛋白作为NDV基因组中最大的蛋白质，有助于基因组RNA复制，并且对新形成的mRNA进行5'加帽，甲基化和polyA聚合酶活性[21]。再来简单看一下几种非结构蛋白。M蛋白作为一种基质蛋白，主要参与控制病毒RNA合成，其次它与肌动蛋白相互作用，有助于在宿主细胞膜上组装病毒[22]。V和W蛋白是附属的，仅存在于病毒感染的细胞中。V蛋白是干扰素拮抗剂，可以决定NDV的毒力大小[23]。3.新城疫的流行病学鸡新城疫一年四季均可发生，尤其以春秋季节以及寒冷和气候多变的时节发病率更高。各种日龄和免疫水平的家禽均可感染，以20~60日龄的鸡最为易感，两年以上的老龄鸡不易感[24]。该病主要危害患病鸡的呼吸系统、消化系统和神经系统，发病特点为高热，腹泻，呼吸困难，黏膜和浆膜出血、坏死，神经系统功能紊乱。发病鸡是主要传染源，病毒可以经过呼吸道、消化道、眼结膜、泄殖腔黏膜和皮肤伤口侵入机体。由于其发病急、传染性强、传播速度快和致死率高等特点，是危害禽类养殖业的重大流行性疾病。新城疫最早发现于1926年，在印尼的爪哇岛和英国的滨海小镇新城，由于基本同时在两不同地点发现该病，不符合首次发病的流行病学规律，故新城疫的起源仍存在争议[25]。但自1926年起，在世界范围内，有三次大规模的流行爆发是公认的：第一次是在1926年时，自东南亚地区起爆发了大规模的疾病,新城疫经过亚洲缓慢地传播到了欧洲,历经三十年逐渐传播到世界各地；第二次大流行爆发于上世纪60年代末，自中东地区开始爆发以来，至1973年就已传播至许多国家,给世界禽类养殖业带来了不可估量的损失和沉重的打击[26]。上世纪七十年代末，又爆发了一次大流行，仍起源于中东地区，由中东地区传播至欧洲后迅速遍布全世界各地，发病禽类主要表现为神经系统症状。自第三次大流行结束之后，自上世纪90年代开始,新城疫时常在局部地区出现流行与发病，但在世界范围内，未再造成大流行爆发。且在局部流行时，均发病于免疫鸡群中,致死率不高,但会严重降低禽类的生产性能，从而引起严重的经济损失[27]。鸡作为NDV的主要感染者，被感染后可以诱发自身多种疾病。4.新城疫的临床症状NDV感染后潜伏期为2.15天，平均为5.6天。人工授精感染的潜伏期为2-5天。感染后，鸡的临床症状和死亡率主要取决于感染强度、途径、剂量、易感动物品系、耐药性和免疫状态是否存在其他致病因素，如生长的外部环境条件和营养管理水平。感染鸡的主要临床症状为呼吸困难、呼吸困难和腹泻。此外，排泄物呈绿色，食欲不振，产蛋量会显著减少，蛋壳和鸡蛋异常[28]。一些感染鸡在长期患病后会出现头颈偏斜、单侧或背部畸形、星状神经麻痹等症状。一例新城疫的诊断与治疗1发病情况调查与临床症状2019年3月在某养殖场进行实践调研，该养殖场采用密闭式鸡舍饲养，一日发现肉鸡在20日龄时开始发病，出现几只病鸡迅速死亡。期间与技术人员进行了病鸡的诊断与处理，现将一例报告如下。病鸡表现的症状是食欲下降、张口呼吸、拉黄绿色粪便、部分出现神经症状,有部分病鸡未表现明显症.状但迅速死亡。病鸡的体温升高。2检查方法2.1整体诊断根据病鸡的行为状态、排泄情况、以及呼吸情况做出初步诊断。2.2解剖诊断解剖可见病鸡气管和嗉囊中有粘液,肠道粘膜出血2.3细菌检查取病鸡的肝脏组织，对菌落进行涂片，严格无菌操作，将样本接种于普通营养琼脂培养基上，37℃培养24h，观察培养物生长情况和菌落形态特征，并进行记录。对菌落进行涂片，革兰氏染色后镜检，根据培养物镜检结果，选择特征性菌落接种伊红-美蓝琼脂培养基和普通琼脂、麦康凯琼脂平板培养基，置恒温箱72h重新培养，用于细菌鉴定。血凝抑制试验:NDV衣壳表面具有血凝素，从而能使鸡血红细胞发生凝集现象。因此，利用此反应现象可以进行NDV的定性和半定量检测。从鸡群中发病和未发病的鸡中采血分离血清进行血凝抑制试验(HI),主要检测流感(H5,H9)和新城疫的效价。3.结果3.1初步诊断病鸡出现腹泻症状，精神不振、食欲下降，排出白色粥状稀便，根据这些特点，可做出初步诊断为病菌感染。3.2解剖诊断病鸡气管和嗉囊中有大量，粘液病鸡气管有轻微的出血现象;腺胃乳头有出血点、肠道粘膜出血严重、胰腺轻微出血、盲肠扁桃体肿大出血，其他部位没有明显的病变。3.3细菌检查发现未发病鸡新无菌采取肝脏组织进行涂片染色镜检,没有发现细菌。城疫的HI抗体效价平均值为5lg2~6lg2,而病鸡中的效价则高达9lg2~10lg2,禽流感效价为5lg2~6lg2。3.4病毒的分离（1）在血凝板中，从左向右每孔分别加入50μL的PBS缓冲液备用。（2）从4℃展示柜中取出冷藏时间≥4h的鸡胚消毒后放入超净台中，用镊子将上方气室地蛋壳敲碎，沿着接种线将鸡胚壳揭开，并露出鸡胚气室（切勿弄破内卵壳膜以免漏出尿囊液），用100μL量程的移液枪戳破卵壳膜吸取50μL鸡胚尿囊液（尽量避免吸入组织结构或者变性的蛋白等多余的杂质成分），加入至血凝板最左边第一个孔内吹吸混匀，自左到右倍比稀释至最后一个孔，弃去最后多余的50μL混合液，确保血凝板中每一个孔中都只有50μL的混合液。（3）每次都应分别设置一个病毒阳性对照组和一个PBS缓冲液阴性对照组，阳性对照病毒稀释操作方法如上步骤，阴性对照组不需要加入病毒。（4）在血凝板中，从左向右每孔依次加入50μL的1%浓度的鸡血红细胞悬液，混匀，水平静置20min，观察鸡血红细胞凝集现象。（5）观察结果：待阳性对照组中鸡血红细胞已发生沉淀后即可进行实验结果观察。将血凝板竖直，鸡血红细胞全部铺于板底部呈薄膜状，沉于孔底部时，为100%凝集，鸡血红细胞由于重力作用出现“流泪现象”，则为不凝集。以100%凝集的尿囊液最大稀释度为该重组病毒的凝血效价，此为一个凝血单位。（6）收集HA试验结果为阳性的鸡胚尿囊液，于-80℃保存备用。3.5病毒RT-PCR验证（1）取高压灭菌的1.5mLEP管，向其中加入200μL上述融化的尿囊液、350μL的BufferRLT（已1：100加入β-巯基乙醇）、550μL的70%的乙醇，移液枪吹打混匀。（2）将混合液移入RNeasy红色离心柱中11000rpm离心15s，弃滤过液，直到将所有的混合液全部通过离心柱。（3）将700μL的BufferRW1加入离心柱中，11000rpm离心15s，弃滤过液。（4）将500μL的BufferRPE加入离心柱中，11000rpm离心15s，弃滤过液。（5）重复步骤（4）一次。（6）12000rpm空离2min。（7）将过滤柱移入新的无菌EP管中，向其中加入35μLRNasewater，室温静置2min，11000rpm离心1min。（8）将洗脱后的液体再次加入过滤柱中，室温静置2min，11000rpm离心1min。（9）使用TranscriptOne-stepRFPCRsupermix试剂盒在冰上进行操作，配置40μL的RT-PCR反应体系如表1所示。表1RT-PCR反应体系试剂体积La-PF0.8μLLa-PR0.8μLRNA模板(步骤8的洗脱液)18μL2×one-stepReactionmix20μLTransscript-Ⅱone-stepEnzymemix0.8μL（10）进行PCR，反应条件如表2所示。表2PCR验证反应条件温度时间循环数50°C22min94°C3min94°C30s55°C30s3072°C1-2kb/min72°C10min反应结束后用1%的琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行鉴定。扩增出一条362bp的强毒株特异性目的片段,生理盐水对照组则为阴性。4.诊断与治疗4.1治疗隔离患鸡，用LaSota弱毒疫苗4倍剂量进行全群紧急免疫，并在白天温度较高的时候多开门窗，加强鸡舍的通风换气。病鸡饮食添加电解质，连续饮用3d，对于腹泻严重的病鸡，注意补充水分，并使用5％的葡萄糖盐水。用5％碳酸氢钠，每次20mL；干扰素每次20mg，腹腔注射的防疫效果更好。在此基础上，增加中药治疗，中药服用白头翁35克；加热后，每天服用一次黄柏黄汤75克，每天一次，持续3-4天。或者，使用乌木20克；橙皮20克;黄连35克;甘草15g，研末，拌食。4.2治疗效果采取上述措施后，疫情得到控制，病鸡愈合情况良好，一周后再未发现鸡只死亡。5.讨论与小结本次针对一例新城疫的病鸡进行诊断与防治，发现导致鸡感染新城疫的原因有很多:新城疫毒株不断的发生变异是一方面，免疫失败即疫苗使用不当、免疫程序不科学、免疫操作失误等都是造成新城疫发生的重要原因。因此,预防新城疫是养鸡工作中的关键,主要是靠综合性防控措施,消毒、免疫、检测和饲养管理等环节缺一不可。因此，对鸡新城疫的防治提出以下建议：5.1做好环境消毒为了避免雏鸡的疫情传播，在雏鸡繁殖过程中应做好消毒工作。即合理设置产房，做好产房的消毒工作，及时清理产房，保证产房的清洁卫生。建立并完善养鸡场生物安全体系，以卫生清扫及消毒为中心，将消毒卫生工作贯穿于养鸡场生产的各个环节。确保生物安全体系发挥应有的作用，最大限度地控制场内外病原的扩散传播。养殖户还要建立严格的卫生防疫制度，并认真监督执行。除按免疫程序做好鸡群的免疫接种工作外，还要搞好鸡舍与附近的环境清洁卫生，例如在鸡场的进出口配备消毒池，进出人员务必要进行消毒操作。养殖人员在进出鸡舍应当换工作服与工作鞋，防止病原体进入鸡舍，而这些服装应当定时进行消毒，如此就能够为防疫工作提供一定的保障。5.2加强饲养管理为避免因避免鸡饲养管理不善引起新城疫的发生，必须加强饲养管理，增强抗病能力，预防疾病的发生。保证鸡舍环境、食具、食物和饮水的清洁卫生，并保持干燥和通风，鸡舍要经常打扫，定期消毒，饲养管理用具也定期消毒，消灭传染源;及时清理粪便，做发酵处理，防止感染其他鸡。健康鸡要与患鸡隔离饲养;可以在满足蛋白质和能量的基础上特别注意矿物质和维生素的供给，提高机体的免疫力。一些常见的药物以及维生素能够增强土杂鸡的免疫力，例如维生素A、维生素K以及盐霉素等等，不仅能够对于鸡的肠道进行保护还改善鸡的生产性能，提高饲料的转化率，减少新城疫的发生。5.3免疫接种接种疫苗对预防新城疫有重要作用。左旋咪哇作为一种有效的免疫调节剂，目前认为从以下三方面调节免疫应答首先左旋咪哇具备拟胆碱能样活性，可作用于CAMP，促进其水解，而对CGMP的水解效果不佳，所以可促进淋巴细胞增殖；另有大量研究显示，左旋咪哇还可以诱导个体低下的免疫功能恢复到正常水平，在肿瘤治疗、慢性感染性疾病治愈、过敏性疾病及自身免疫系统异常病的治疗产生良好的临床效果[23]。因此可以对鸡群做好免疫工作。参考文献杨涛,李守刚,方桂明.一例蛋鸽新城疫诊断与治疗[J].畜禽业,2018,29(5):2.YoonSS,NakamuraH,CarrollNM,etal.Anoncolyticherpessimplexvirustype1selectivelydestroysdiffuselivermetastasesfromcoloncarcinoma[J].FasebJournal,2000,14(2):301-302.Cheow,Pheik-Sheen,etal.AnimprovedmethodfortherescueofrecombinantNewcastlediseasevirus[J].Biotechniques,2020,68:96-100.El-TholothM,BranavanM,NaveenathayalanA,etal.Recombinasepolymeraseamplification-nucleicacidlateralflowimmunoassaysforNewcastlediseasevirusandinfectiousbronchitisvirusdetection[J].MolBiolRep,2019,46:6391-6397.[5]魏星,杨静,魏冬梅.一例土鸡非典型新城疫的诊断与治疗[J].吉林畜牧兽医,2020,41(5):1.[6]王永磊.一例非典型新城疫的诊断与防治[J].江西饲料,2019(4):3.[7]HwangSY,SunHY,LeeKH,etal.5'-Triphosphate-RNA-independentactivationofRIG-IviaRNAaptamerwithenhancedantiviralactivity[J].NucleicAcidsRes,2012,40:2724-2733.[8]HoqueMA,BurgessGW,Karo-KaroD,etal.MonitoringofwildbirdsforNewcastlediseasevirusinnorthQueensland,Australia[J].PrevVetMed,2012,103:49-62.[9]FerreiraHL,TaylorTL,AbsalonAE,etal.PresenceofNewcastlediseasevirusesofsub-genotypesVcandVIninbackyardchickensandinapparentlyhealthywildbirdsfromMexicoin2017[J].VirusGenes,2019,55:479-489.[10]EdrisS,AnandanP,ManoharanVK,etal.ARecombinantNewcastleDiseaseVirus(NDV)ExpressingSProteinofInfectiousBronchitisVirus(IBV)ProtectsChickensagainstIBVandNDV[J].ScientificReports,2018,8(1):11951-11964.[11]韩艳杰,付媛媛.一例鸭新城疫与传染性浆膜炎混合感染的诊断与治疗[J].兽医导刊,2020(18):1.[12]尹俊,杨艳明.一例鸡新城疫与球虫病混合感染的诊治[J].中国畜禽种业,2020,16(1):1.[13]FournierP,WildenH,SchirrmacherV.Importanceofretinoicacid-induciblegeneIandofreceptorfortypeIinterferonforcellularresistancetoinfectionbyNewcastlediseasevirus[J].IntJOncol,2012,40:287-298.[14]HuZ,HuS,MengC,etal.GenerationofagenotypeVIINewcastlediseasevirusvaccinecandidatewithhighyieldinembryonatedchickeneggs[J].AvianDis,2011,55:391-397.[15]JiangK,SongC,KongL,etal.RecombinantoncolyticNewcastlediseasevirusdisplaysantitumoractivitiesinanaplasticthyroidcancercells[J].BMCCancer,2018,18:746.[16]刘英吉.一起非典型新城疫的诊断与防治[J].山东畜牧兽医,2019.[17]刘献军.一例青年蛋鸡非典型新城疫与禽霍乱混合感染诊治[J].畜牧兽医科学：电子版,2020(4):2.[18]陈立华,白宪华.新城疫诊断与防治[J].畜禽业,2019(3):2.[19]张日欣.一例庄河大骨鸡滑液囊支原体与非典型新城疫混合感染的诊治[J].现代畜牧兽医,2018,000(010):37-39.[20]LiuH,deAlmeidaRS,GilP,etal.CangenotypemismatchreallyaffectthelevelofprotectionconferredbyNewcast