药物鉴别技术-药物鉴别方法（药物分析课件）

紫外光谱（UV）红外光谱（IR）近红外光谱法（NIRS）原子吸收法（AAS）核磁共振法（NMR）（二）光谱鉴别法二、光谱鉴别法1.紫外光谱鉴别法(Ultravioletspectrophotometry)美法仑测定λmax，或同时测定λmin；测定一定浓度的供试液在λmax处的A规定λ和E规定λ和Aλ1/Aλ2经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。λ1λ21、紫外光谱鉴别法

紫外光谱法操作简便、快速。

用作鉴别的专属性远不如红外光谱法。

紫外光谱相同的物质不一定是同一种物质。紫外光谱法常有的方法测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度；

规定吸收波长和吸收系数法；规定吸收波长和吸光度比值法；

经化学处理后,测定其反应产物吸收光谱特性以上方法可单用，也可几个结合起来使用，以提高专属性

①测定最大吸收波长,或同时测定最小吸收波长乙胺嘧啶供试品在0.1mol/L盐酸介质中的紫外吸收在272nm处为峰,216nm处为谷。②规定吸收波长和吸光度比值法两性霉素在362nm、381nm、405nm波长处有最大吸收.

规定362nm/381nm处吸光度比值不大于0.6

381nm/405nm波长比值不大于0.9VB12361nm/278nm1.70～1.88361nm/550nm3.15～3.45

己稀雌酚注射液用供试品溶液250-450nm波长吸收光谱与对照品是否一致鉴别。③与对照品比较,对比吸收光谱的一致性

Ch.P示例一盐酸布比卡因的鉴别试验0.40mg/mlλmax:263nm、271nmA:0.53~0.58;0.43~0.48规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度示例三氯贝丁酯的鉴别试验

0.10mg/mlλmax:280nm、288nm

10μg/mlλmax:226nm规定一定浓度下的供试液的最大吸收波长示例二专属性相对较好USP采用对照品法

供试药与其对照品按同一方法处理，在同样条件下紫外光谱图一致。BP规定一定波长范围内，仅有一个最大或最小吸收JP与Ch.P相似

各国紫外鉴别法比较2、红外分析法

IR光谱法是有机药物分子的振动-转动光谱，能反映药物分子的

结构特点，分子中每个基团一般都由相应的吸收峰，且特征性强，（除光学异构体及长链烷烃同系物外）几乎没有两种化合物具有完

全相同的红外吸收光谱，即红外吸收光谱具有“指纹性”，被广泛地应用于化合物的鉴别。

特点

专属性强、准确度高的特点，应用广（固、液、气）

主要用于组分单一、结构明确的原料药以及结构相近的同类物质。

（二）光谱鉴别法光谱鉴别法特征区指纹区2、红外分析法

标准图谱法：Ch.P要求按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，与《药品红外光谱集》中的相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物。

对照品法：将供试品与对照品在同样的条件下绘制红外图谱，彼此对比是否一致的方法。可消除不同仪器和操作条件造成的误差。试样的制备方法压片法供试品（约1mg)+干燥KBr/KCl(约200mg)研磨均匀（玛瑙研钵）置压膜中真空加压至0.8-1GPa2-3min均匀透明片无明显颗粒供试片同法制空白KBr/KCl片，做空白校正，扣除背景干扰糊法供试品（约5mg）,滴加少量液体石蜡或其他液体制成糊状物玛瑙研钵取适量夹于两个KBr片（150mg/片）之间供试片KBr（约300mg）制成空白片，作背景校正

膜法

供试品多为高分子聚合物，可做成液膜铺展于适宜的盐片上。

溶液法

液体供试品（或溶于适宜的溶剂内），制成1%-10%的溶液，置于0.1-0.5mm厚的液体池中，即可测得。应用光谱图比对时应注意的问题1）固体药品应按规定的方法进行预处理2）盐酸盐类的药品制片时一般使用KCl做基质3）注意仪器自身的影响可与标准的聚苯乙烯薄膜比对，校正4）不适用多组分、多晶形药物5）以新版《药品红外光谱集》为准6）制剂鉴别，应消除辅料干扰，提取分离后再制片7）Ch.P4000-400cm-1

BP2000-400cm-1

各国红外光谱法比较Ch.P采用标准图谱对照法BP采用标准图谱对照法、对照品法USP采用对照品法JP规定条件下测定一定波长处特征吸收峰。（二）光谱鉴别法

3、近红外光谱法近红外谱区:12800-4000cm-1

750-2500nm

通过测定被测物在近红外区的特征光谱，进行定性、定量分析的一种分析技术。特点1、获得信息多:密度、粒子尺寸、直径、大分子聚合度等2、样品无需预处理，可直接装入样品池测定3、分析速度要快扫描：5次/s，一般扫描50次分析一次2-3min4、灵敏度高，应用范围广近红外分析一般程序（1）参考库的建立

记录一定数量批次的物质谱图（不同生产企业、物理形态、粒度差异）的信息。（2）数据预处理

对各谱图进行数学的处理，建立分析模型（3）数据评估

将待测物的谱图与谱库中的单一或平均参考谱图比较。（4）数据库验证

专属性、耐用性验证板蓝根注射液和川芎注射液的近红外图谱三个产地的异穗卷柏近红外谱图

4、原子吸收法利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度进行定量、定性分析。

主要用于元素分析

5、核磁共振通过测定供试品指定基团上的质子峰的化学位移和偶合常数进行鉴别。（二）光谱鉴别法

（三）X射线粉末衍射法X射线波长0.01-1nm的电磁波利用晶体对X射线的衍射效应来进行定性、定量分析的方法。用于结晶物质的鉴别，供试品与参照品的X衍射图比较衍射角Ө面间距d相对强度（三）X射线粉末衍射法影响因素：药物本身的特性入射X射线的波长及强度供试品的结晶度、密度、体积室验温度研磨压力等（一）化学鉴别法

供试品加入适当的试剂，在一定条件下，发生化学反应，通过产生可观测到的明显现象，来鉴别药物真伪的方法。

化学鉴别法特点

操作简便、反应快速、实验成本低、应用广

但专属性比仪器分析法差

分为：

（1）呈色反应鉴别法

（2）沉淀生成反应鉴别法

（3）荧光反应鉴别法

（4）气体生成反应鉴别法

（5）试剂褪色的鉴别法（一）、化学鉴别法

（1）呈色反应鉴别法

供试品加入适当的试剂，在一定条件下，反应生成有色产物

鉴别方法①三氯化铁呈色反应（酚羟基）②有机氟化物的茜素氟蓝法③芳香第一胺类重氮化-偶合反应④托烷生物碱类-Vitali反应⑤肾上腺皮质激素类的四氮唑⑥含羰基结构的苯肼反应⑦氨基酸及氨基糖苷类的茚三酮呈色反应⑧双缩脲反应①三氯化铁呈色反应（酚羟基）蓝紫色对乙酰氨基酚

（一）化学鉴别法

（1）呈色反应鉴别法

②有机氟化物氧瓶燃烧无机氟离子pH4.3

茜素氟蓝硝酸亚铈碱液吸收蓝紫色络合物有机氟③芳香第一胺类芳伯胺+

稀盐酸0.1mol/L亚硝酸钠碱性

-萘酚试液橙黄色到猩红色重氮化-偶合反应对乙酰氨基酚红色④托烷生物碱类-Vitali反应此类生物碱中具有莨菪酸结构，有Vitali反应,显紫色。

水解3HNO3三硝基衍生物KOH(C2H5OH)KOH深紫色⑤肾上腺皮质激素类的四氮唑+2e[H]四氮唑甲臜皮质激素具有还原性，能将四氮唑还原为有色甲臜⑥含羰基结构的苯肼反应++H2O苯肼苯腙⑦氨基酸及氨基糖苷类的茚三酮呈色反应

左旋多巴+CO2+3H2O+例如：⑧双缩脲反应（开环分解）蓝紫色（2）沉淀生成反应鉴别法

供试品加入适当的试剂，在一定条件下，反应生成沉淀

（一）化学鉴别法③还原性基团的银镜反应①丙二酰脲类的硝酸银反应②氯化物的银盐沉淀⑦含氮杂环类与生物碱沉淀剂（碘化铋钾、硅钨酸）的沉淀反应⑤苯甲酸盐类的三氯化铁反应④生成氧化亚铜红色沉淀反应⑥与重金属离子的沉淀反应⑧磺胺类药物的铜盐反应丙二酰脲类的硝酸银反应+2AgNO3+2HNO3Cl-+Ag+AgCl氯化物的银盐沉淀含有还原性基团的药物——银镜反应+AgNO3+NH3·H2OAg异烟肼葡萄糖+碱性酒石酸铜试液（Fehling试液）氧化亚铜+葡萄糖酸苯甲酸盐类的三氯化铁反应+3FeCl3+OH-+7NaCl+2Cl-赭色沉淀利多卡因与重金属离子反应2+CoCl2H+亮绿色细小钴盐沉淀含氮杂环类的生物碱的沉淀反应苯并二氮杂类

+BiI3·

橙红色沉淀

氯氮氟西泮氯硝西泮+12W03·Si02

灰白色沉淀4KIC2H5OH白色C2H5OH黄色阿托品+HgCl2东莨菪碱+HgCl2托烷类生物碱吡啶环类2+CuSO4+2NH4SCNCu(SCN)2+(NH4)2SO4草绿色配合物沉淀磺胺类药物的成铜盐反应

磺酰氨基上的活泼氢原子，可被某些金属离子取代，生成有色的金属盐沉淀。磺胺类药物钠盐溶液，加硫酸铜试液生成不同颜色的铜盐沉淀，可供区别及鉴别。

(3)荧光反应鉴别法

①药物本身在可见光下发射荧光

如：硫酸奎宁溶液显蓝色荧光

②药物与适当试剂反应后发射荧光

如：氯普噻吨+HNO3后，紫外下显绿色

VB1硫色素（蓝色荧光）碱性K3Fe(CN)6（一）化学鉴别法（4）气体生成反应鉴别法

①大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后加热产生氨气。

红色石蕊试纸变蓝

硝酸亚汞试液湿润的试纸显黑色（一）化学鉴别法②化学结构含硫药物，可经强酸处理后加热产生硫化氢气体硫鸟嘌呤●7H2O强酸∆H2S（臭鸡蛋气味）使醋酸铅试纸变黑③含碘有机药物经直火加热可生成紫色碘蒸汽④含醋酸酯和乙酰胺类的药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。（一）化学鉴别法（5）试剂退色维生素C与二氯靛酚反应（6）测定生成物熔点法

制备衍生物测定熔点法药物＋试剂新化合物有一定mp;

药物酸化或碱化生成游离酸或碱。操作繁琐费时间，应用较少。（一）化学鉴别法色谱谱鉴别法适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别,具有分离、分析同时进行的特点.高效液相色谱法(HPLC)——供试品和对照品色谱峰保留时间一致.气相色谱法(GC)——同HPLC要求薄层扫描法(TLC)——对照品比较法，供试品斑点与对照品的Rf值及斑点的颜色应一致.色谱法（HPLCGCTLCMS)（四）色谱鉴别法1、薄层色谱鉴别法(TLC)

薄层色