《川产道地药材生产技术规程 厚朴》编制说明

PAGE4-《川产道地药材生产技术规程厚朴》（征求意见稿）编制说明目录TOC\o"1-1"\h\u一、 工作简况 -2-二、 标准编制原则和主要内容 -5-三、 主要试验(或验证)的分析、综述报告 -5-四、 采用国际标准和国外先进标准的程度 -16-五、 与有关的现行法律、法规和强制性国家标准的关系 -16-六、 重大分歧意见的处理经过和依据 -16-七、 作为强制性国家标准或推荐性标准的建议 -16-八、 实施标准的要求和措施建议 -16-九、 废止现行有关标准的建议 -16-十、 其他应予说明的事项 -17-工作简况（一）任务来源根据四川省市场监督管理局2022年6月7日发出的《关于下达2022年度地方标准制修订项目立项计划的通知》（川市监函〔2022〕295号），批准由四川省林业科学研究院牵头起草地方标准《川产道地药材生产技术规程厚朴》。（二）目的意义厚朴属于木兰科(Magnoliaceae)木兰属(Magnolia)落叶乔木，因其种类原始、分类地位特殊，被列为国家二级保护的珍稀濒危植物。在我国，厚朴是已有2000多年药用历史的传统大宗中药材，其茎皮和根皮有温中理气、燥湿健脾、消痰化食等多种作用。现代生物技术研究发现厚朴中的次级代谢产物主要有酚类(厚朴酚及其异构体和厚朴酚)、生物碱、黄酮和挥发油等成分，其中发挥药用价值的主要是厚朴酚与和厚朴酚。目前中国制药业中，采用药用厚朴配方的中西成药多达200多种，其种类还在不断增加。另一方面，我国的药用厚朴还供应出口，在日本、朝鲜籍东南亚地区广为应用。因此现代社会对厚朴酚类物质的市场需求量日益增大，中国的药用厚朴甚至出现供不应求、资源短缺的情况。四川省是中国道地药材“川朴”和厚朴资源的核心分布地，占全国厚朴种植面积的35%以上。随着人们对厚朴的大量需求，厚朴自然林的砍伐现象日益严重。此外，各地厚朴种质参差不齐，林农在厚朴栽培和生产加工方面缺乏相应的优良种质、理论规范和科学的标准依据，依然采用粗放的厚朴幼林、成林和萌芽林的管理方法，这都造成了大量的厚朴低质低效成林和萌芽林。建立厚朴生产培育技术既利于提高厚朴林地产出、满足市场对厚朴的需求、保持我省的厚朴优势，又利于提高厚朴药材质量、为以厚朴为原料的医药产业的上下游发展提供质量保障。为规范、指导四川省道地药材厚朴的生产培育，四川省林业科学研究院牵头起草制订了《川产道地药材生产技术规程厚朴》。工作过程成立起草小组四川省林业科学研究院在接到标准的制定任务后，成立了标准编制小组。起草阶段为使标准更具有代表性和适用性，于2022年6月～2022年7月，本标准编制组查阅、收集了关于厚朴生产、培育等相关内容的标准及文献资料，并对参考、引用的资料进行归纳整理，建立了川产道地药材厚朴生产的流程，在此基础上，确立本标准制定拟采用的原则、方法和技术依据，结合四川省林业科学研究院近年来针对厚朴的研究成果进行了数据汇总和分析工作，经过多次讨论，确定了本标准技术框架、内容等相关要求。标准编制组按照GB/T1.1-2020的要求编写了《川产道地药材生产技术规程厚朴》（工作组讨论稿）。2022年8月，以通讯方式与相关技术人员进行讨论，对标准的初稿进行了修改与完善，并向宝兴县林业局、北川县自然资源局、广元市众邦种养殖专业合作社、四川草笠竹农业开发有限公司、荥经县林业局、通江县林业科学技术研究所、大竹福源堂农村专业合作社共7家单位征求意见。2022年9月，编写组汇总专家的咨询意见后进行了认真讨论，形成《川产道地药材生产技术规程厚朴》征求意见初稿。2023年1月，参加“2023年度中医药领域四川省地方标准制（修）订项目第一次专家评审会”，根据专家意见对《川产道地药材生产技术规程厚朴》（工作组讨论稿）进行了修改，并于2023年4月参加“2023年度中医药领域四川省地方标准制（修）订项目第二次专家评审会”。征求意见阶段根据评审会专家意见对《川产道地药材生产技术规程厚朴》（工作组讨论稿）进行修改与完善，形成《川产道地药材生产技术规程厚朴》（征求意见稿），于2023年5月报送四川省市场监督管理局进行公示征求社会意见。送审稿阶段主要起草单位及人员分工主要起草单位单位名称牵头/协作单位主要工作任务四川省林业科学研究院牵头统筹协调，确定工作方案，召集并主持完成标准制定。四川省中医药科学院协作单位参与标准讨论分析、标准检索，资料复核、格式规范。北川神侬农业科技发展有限公司协作单位参与标准讨论分析、格式规范。主要起草人员姓名工作单位任务分工备注王丽四川省林业科学研究院主持项目，标准编写及审查龙思帆四川省林业科学研究院收集资料，标准起草编写李堃四川省林业科学研究院资料整理、标准起草编写白平四川省林业科学研究院标准修改、审查工作杜玖珍四川中医药科学研究院标准编制杨萍四川中医药科学研究院标准编制陈可馨四川中医药科学研究院标准编制席桢鹏北川神侬农业科技发展有限公司标准编制标准编制原则和主要内容（一）编制原则1.本规程的编制符合GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定。2.标准内容紧密联系我省厚朴栽培状况，各项技术指标先进、合理，可操作性强。（二）主要内容本标准规定了川产道地药材厚朴生产的术语和定义、产地环境要求、栽培技术、采收与加工、包装贮藏。适用于川产道地药材厚朴的生产。主要试验(或验证)的分析、综述报告（一）川产道地药材厚朴适生区研究本部分通过《中药材产地适宜性分析地理信息系统》(TCMGIS–II)和生物适生预测分析软件包最大熵模型Maxent，应用地理信息系统(GIS)对厚朴生态适宜性进行地理区划分析。1.1材料与方法厚朴分布数据：主要由4个途径获得(1)中国数字植物标本馆提供的标本资料，91条；(2)教学标本资源共享平台的标本资料，151条；(3)GBIF数据库，81条；(4)中国自然保护区标本资源平台的标本数据，21条。通过GoogleEarth和Arcgis10.0软件提取上述4个资料源的各个地区几何中心点坐标，输入至Excel，保存成CSV格式，剔除极其相似的地理数据，保证并且每个分布点都有确切的经纬度，最终得到厚朴的分布点共287个。物种分布点基于的中国矢量地图为1：400万，来源于国家基础地理信息系统，中国保护区地图下载于www.W。生态因子数据：气候数据和高程数据来源于世界气候网，坐标系为WGS84，栅格大小约为25km2。气候数据为1950年至2000年监测数据的平均值，共19个气候因子，图层中的温度数值(℃)为实际数值×10。地图资料来源于国家基础地理信息系统。MaxEnt模型参数设置：将分布点数据(CSV格式)和生态因子数据集导入MaxEnt软件中，设置参数建模运行，具体参数设置为：设置刀切法检验（jacknife_test）权重，MaxEnt自定义设置ROC评价曲线，其他参数设置为软件默认值。区划结果可信度和准确度：应用ROC曲线和AUC值对预测结果进行精度评价。ROC曲线分析法在物种潜在分布预测模型评价中得到了广泛的应用。是目前认可度较高的诊断试验评价指标。通过计算ROC接受曲线下方的面积得到AUC值，AUC的数值范围为0.5-1。值越大表示预测越精确。厚朴生态适宜区划：利用ArcGIS10.0软件对MaxEnt模型计算的结果进行叠加分析和地图制作，绘制出基于主要生态因子的厚朴生态适宜区划四川图，采用人工分级方法基于生态相似度划分出不同等级分布区域。基于MaxEnt模型获得的厚朴生态区划结果，其存在概率取值在0到1之间，对其进行归一化处理，根据专家经验法确定70％以上为相似度较高等级，以一定间隔划分出多个等级，并确定厚朴生态适宜分布区与行政归属范围。通过MaxEnt模型运行结果中的响应曲线得出生态因子适宜值范围。1.2结果与分析通过《中药材产地适宜性分析地理信息系统》(TCMGIS–II)和生物适生预测分析软件包最大熵模型Maxent，应用地理信息系统(GIS)对厚朴生态适宜性进行等级划分和生产区划分析。首先使用ArcGIS软件中的自动分类功能（图1），其生态适生分值基本在50%以上的省内区域有广元、青川、平武、旺苍、北川、安县、绵阳、梓撞、盐亭、茂县、汶川、通江、南江、万源、白沙、纳溪、达州、都江堰、彭州、大邑、什邡、绵竹、崇州、邛崃、蒲江、芦山、宝兴、天全、荥经、岷山、洪雅、峨眉、峨边、马边、沐川、雷波、美菇、宜宾、高县等地，总面积约14500万亩。图1ArcGis自动分类的厚朴适生分布区域进一步通过人工设置适生区域赋值，简化适生区域类型获得更为直观的适生图，以>95%为高适生区、90-95%为中适生区、75-90%为低适生区，其他认为非适生区，结果显示（图2）厚朴在四川的主要适生区大体有四个片区：广元-绵阳片区、成都周边片区、达州东部片区、泸州东南片区。图2ArcGis人工分类的厚朴适生分布区域（二）川产道地药材厚朴栽培技术研究2.1造林密度选取四川省阿坝州(厚朴酚的含量最高地区)的厚朴树，并对种子性状以及苗种进行了筛选，确保种子出芽率>99%，栽培的幼苗粗壮、抗虫害能力强。林场培植密度是影响厚朴生长速度与活性物质产量的重要因素，表1为厚朴林栽培密度与生长速度的关系数据结果。厚朴作为药材林进行培育，根据实验结果，选择厚朴栽培间距为2m×2.5m的偏密集种植，8年后郁闭度约0.8，地表保留厚密的厚朴林落叶，可以减少底层地表杂草的生长；8年后即可开始间伐，同时隔一伐一的模式也保证了厚朴成树冠幅不会叠加，避免空间竞争，同时较早的间伐时间既能保持厚朴林分较高的新陈代谢速率，又提高了经济效率，在生产实践中具有现实意义。表1厚朴林栽培密度与8年生林木树高、胸径关系阵列树高(m),胸径(cm)1m1.5m2m2.5m3m1m9.5,9.71.5m10.1,10.210.3,10.42m10.2,10.410.9,10.511.0,10.92.5m10.2,10.410.9,10.711.3,10.811.4,10.83m10.4,10.610.8,11.011.3,10.211.4,10.911.4,10.92.2施肥技术2.2.1试验地概况以四川省北川羌族自治县林峰村同一坡向和位置条件的厚朴适生区为实验田，试验地点适宜厚朴生长，具有种植厚朴的历史。2.2.2试验方法采取随机区组试验，以3个试验点做3次重复，考察施肥措施对不同试验田的影响。采用不同尿素、磷肥、钾肥比例的肥料，同时采取不同施肥方式的追肥，A开沟施肥覆土，B挖穴施肥覆土。每公顷施加肥料及处理情况如表2。表2不同肥料配比及施肥方案处理尿素/kg磷肥/kg钾肥/kg施肥方式A1100300300开沟施肥覆土A2300300100A3300100300B1100300300挖穴施肥覆土B2300300100B3300100300施肥时间试验：采用最佳的比例的肥料，进行不同追肥时间的研究，在3月15日，5月15日，7月15日，9月15日进行追肥，并统计施肥时间对厚朴生长的影响。数据采集与统计：通过不同肥料比例和追肥时间下，四年后测定厚朴生长情况及有效成分增长情况，通过生长量的全面调查，分析施肥对厚朴林的影响。2.2.3结果与分析本研究通过厚朴有效成分分析与施肥试验研究，结合当地生产实际，总结出厚朴种植实现高产优质的施肥技术措施，得出每公顷追肥总量(尿素300kg、磷肥300kg、钾肥l00kg)及的挖穴施肥覆土的施肥方式对厚朴生长最佳，同时在5月份施肥对于厚朴来说，肥效有效元素吸收最佳（表3，表4）。为我省厚朴管理提供了方法，同时也为厚朴的科学种植提供科学的指导。表3不同肥料配比及施肥方案处理平均胸径/cm平均树高/m冠幅/cm林分保存率/%A92A94A89B86B94B93表4厚朴生长率与施肥时间试验调查表日期平均胸径/cm平均树高/m冠幅/cm林分保存率/%1.692.191.591.194（三）川产道地药材厚朴采收与加工技术研究3.1厚朴采收技术使用HPLC法测定不同树龄厚朴中厚朴酚与和厚朴酚的含量,以期了解随着树龄的增加,这两种有效成分的动态变化规律,进而指导药材的合理采收和质量控制。3.1.1材料与方法厚朴采收时间对其有效成分的影响：通过之前的研究，以及实地调查后总结出厚朴的采收时间为每年5-6月，为了进一步确定最佳采收时间，通过检测12年的厚朴中厚朴酚与和厚朴酚的含量来确认最佳时间。选取8、10、12、14、16、18、20年树龄的厚朴10株，剥去其树皮，测量树皮厚度，然后进行适当处理，并混合在一起，粉碎后萃取测其中厚朴酚与和厚朴酚的含量。3.1.2结果与分析通过对不同树龄厚朴树皮中有效成分的含量分析发现，随树龄的增加厚朴的树皮越来越厚，但是增幅也越来越小（表5）。其中的厚朴酚与和厚朴酚的含量都较高，超过国家药典规定，并且会随树龄的增加而积累，树龄越大含量越高，但是高于12年后增幅减缓，综合分析，最佳采收树龄为12年。通过不同采收时间厚朴中有效成分的含量分析，发现在5月末采收时能达到最高的有效物质，超过5月末之后含量减少量加大（表6）。表5不同树龄厚朴树皮中有效成分的含量分析树龄（年）树皮厚度（cm）厚朴酚含量（%）和厚朴酚含量（%）总含量（%）80.298.92.311.2100.3612.92.415.3120.4114.83.618.4140.45160.4815.74.720.4180.5016.14.921.0200.5117.25.622.8表6不同采收时间厚朴树皮中有效成分的含量分析采收时间厚朴酚含量（%）和厚朴酚含量（%）总含量（%）5月10日5月20日5月30日6月10日6月20日12.62.915.56月30日12.32.715.03.2厚朴产地初加工工艺3.2.1“发汗”工艺试验方法将厚朴分为10组进行如下不同处理：第1组：水煮后“发汗”，用草覆盖，将厚朴堆堆放10cm；第2组：水煮后“发汗”，用塑料薄膜覆盖，将厚朴堆堆放10cm；第3组：水煮后“发汗”，用塑料薄膜覆盖，将厚朴堆堆放20cm；第4组：水煮后“发汗”，用塑料薄膜覆盖，将厚朴堆堆放30cm；第5组：水煮后“发汗”，用塑料薄膜覆盖，将厚朴堆堆放40cm；第6组：水煮后“发汗”，用塑料薄膜覆盖，将厚朴堆堆放50cm；第7组：水蒸后“发汗”，用塑料薄膜覆盖，将厚朴堆堆放20cm；第8组：烫淋后“发汗”，用塑料薄膜覆盖，将厚朴堆堆放20cm；第9组：甄蒸后“发汗”，用塑料薄膜覆盖，将厚朴堆堆放20cm；第10组：水煮后，不做“发汗”处理，直接阴干，厚朴堆堆放20cm。共计10组实验，以厚朴酚、和厚朴酚总量为评价指标，评价厚朴的质量。厚朴酚与和厚朴酚的测定方法：厚朴酚与和厚朴酚是厚朴的主要有效成分，也是《中国药典》厚朴质量控制的指标性成分，故将其总质量分数作为重要的质量评价指标，按照《中国药典》所规定的方法对不同加工方法的厚朴药材进行HPLC测定。结果与分析通过第1组和第2组的比较可得出，厚朴经水煮后，以薄膜代替青草覆盖“发汗”时所含厚朴酚与和厚朴酚的量最高；实验显示，不同年份新鲜厚朴干皮的水分都接近60%，没有表现出太大差异，但“发汗”后，水分显著下降，同时木脂素含有量明显增加，厚朴酚与和厚朴酚的含有量大幅度提高。有报道指“发汗”能使厚朴酚与和厚朴酚大幅度提高，最高可达40%；通过第3组，第7组和第10组比较可看出：与直接阴干品相比，煮后“发汗”品、蒸后“发汗”品其主要的药效成分厚朴酚与和厚朴酚质量分数增加（表7）。综上所述，第4组，“发汗”前以水煮为佳，“发汗”时以塑料薄膜覆盖为佳，厚朴堆堆积30cm为佳。表7厚朴不同工艺处理后厚朴酚和厚朴酚的质量分数编号和厚朴酚含量（%）厚朴酚含量（%）总酚含量（%）113.5312.45825.987213.0013.13826.138313.9212.15526.075414.3913.9328.32513.2111.9725.18612.8812.4325.31712.9811.2324.21811.4410.9922.43910.8611.3722.23109.6710.6420.313.2.2“发汗”时间为探究“发汗”时间对厚朴质量的影响，利用上述最佳“发汗”工艺结论，将实验材料生品厚朴干皮均放置在同一环境中，温度为25℃，采取水煮后“发汗”，用薄膜覆盖，并堆积30cm，并在1天，3天，5天，9天，12天，15天对厚朴中厚朴酚与和厚朴酚含量进行测定。实验结果表明，厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的总含有量为20.31%，“发汗”12d后增至28.8%。覆膜水煮“发汗”时，两者含有量最