项目一血液标本采集和血涂片制备

临床检验基础

鹤壁职业技术学院医学检验教研室

血液一般检验医学检验临床基础检验临床生化检验临床血液学检验临床微生物检验临床免疫学检验专业核心课程临床寄生虫检验临床检验者准入、获取专业技术资格考试的必考课程之一，该考试设置“基础知识”、“相关专业知识”、“专业知识”和“专业实践能力”四个科目，其中临检所占题量和分值约20%，位居各检验之首。临床检验基础又称为实验诊断学，是通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查，对离体的血液、体液、分泌物和排泄物、脱落细胞等标本进行化学、病原生物学、显微镜形态学的检查、分析，以获得有关病原、病理生理变化及脏器功能状态等实验资料，从而协助临床对疾病进行筛检、诊断和鉴别诊断。临床检验基础的概念绪论自动化仪器检查:电子计算机技术、自动化检验仪器取代手工法。速度快、精度高、操作易、参数多、易质控、信息大等。感官检查:直接观察标本：颜色、透明度、性状，有无凝块或寄生虫临床检验的一般方法理学检查:液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降率、红细胞比积等病理变化化学检查:定性或定量检测标本化学成分的病理变化显微镜检查:观察有形成分的数量和形态手工法自动化仪器法绪论现代临床检验的特点:检验操作的自动化、检验技术的现代化、检验方法的标准化、检验试剂的商品化、计量单位的国际化、质量管理的全程化临床检验工作流程与质量控制SCMCRME-biztransformationERP/EIP检验前医生申请

患者准备标本采集标本标记标本运输标本收检

检验中

检验后

标本检测报告结果审核报告单发放

标本储存及复检质量信息反馈正确的标本采集和转运是降低结果差错率（可减少70%以上）的关键。标本采集原则：保持当时生理或病理状态下离体标本质和量的完整性。及时送检临床检验在医学中的应用1、为疾病诊断和鉴别诊断提供客观的实验室检查依据

发热、出血、贫血倾向的患者：血涂片检查到大量原幼红细胞可诊断为急性白血病。白细胞（中性粒细胞）数量增多、血沉增快：支持急性心肌梗死的诊断，可与心绞痛相鉴别。显微镜发现病原体是确诊感染性疾病的依据。2、为疾病疗效监测和预后判断提供动态变化数据尿蛋白检测：检测肾脏疾病患者的病情变化；网织红细胞计数：对贫血患者、进行发射治疗或化学治疗的患者骨髓造血功能判断具有实际可靠的指导作用。3、为疾病预防提供检测依据

预防为主是基本方针，从标本中检测寄生虫，可对感染人群进行必要的治疗和隔离，防止疾病的传播和传染。绪论学习的基本要求1.熟练掌握临检的基本理论。（生理学、病理学基础，检验基本理论）2.掌握检验的基本实验技能。（标本的采集、规范操作、质量控制等）3.熟悉检验方法学的评价。（评估和选择灵敏度高、特异性强的检验方法，正确分析比较手工检验方法和仪器检验方法的优缺点）4.熟悉检验项目的参考值和临床意义。(记忆常用检验项目的参考值，以便结合临床，对检验结果进行有效的分析）勤学苦练重点：1.血标本采集方法和血涂片制备技术2.抗凝剂的应用难点：血细胞染色原理项目一

血液标本采集和血涂片制备一.掌握血液标本的采集方法及注意事项。

二.熟悉常用的血液抗凝剂种类及其应用。三、掌握血涂片的制备与细胞染色原理。血液组成概述概述血液理化性质1.血量：成人4～5L，占体重6%～8%2.颜色：动脉鲜红，氧合血红蛋白多静脉暗红，还原血红蛋白多3.PH：7.35～7.45，动脉稍高，静脉稍低4.比密和渗透浓度：血液比密取决于血细胞比容和hb量：男：1.055～1.063;女：1.050～1.060;血浆比密与其血浆蛋白质含量有关：1.025～1.030；血细胞比密：1.090

血浆渗量（渗透压）=290～310mOsm/kg.H2O，5.血液特性：悬浮稳定性；粘滞性；凝固性概述血液生理功能1.运输功能（基本功能）2.协调功能（输送激素、酶类到各个脏器）3.维护机体内环境稳定性（酸碱平衡、电解质代谢、体温恒定）4.防御功能（白细胞、抗体、补体等）任务一血液标本的采集及抗凝一、采血部位毛细血管采血法成人：左手无名指或中指指端内侧(WHO)婴幼儿：大拇趾血液标本的采集耳垂：不宜使用手指适用于需血量少(<0.1ml)的检查。或

内外侧缘足跟严重烧伤患者：皮肤完整处？毛细血管采血法血液标本的采集二、器材与试剂：无菌一次性采血针、一次性微量吸管、消毒干棉球、无菌干棉球、小试管、75%乙醇、生理盐水等。按摩：轻轻按摩采血部位，使其自然充血。消毒：用75%乙醇消毒棉球消毒。针刺：待酒精挥发干后，用左手拇指和食指

捏紧采血部位，右手持采血针，迅速刺入2～3mm。拭血：待血自然流出后，无菌干棉球擦去第一滴血。吸血：按需要依次采血采血完毕，用干棉球压住伤口片刻。稀释：无菌干棉球擦净吸管外余液，将吸管伸入装有生理盐水的试管底部，慢慢排除吸管内的血液，上清液清洗管内余血2～3次。将试管内的液体混匀。三、操作步骤毛细血管采血法血液标本的采集1、准备2、按摩3、消毒4、针刺5、拭血6、吸血7、稀释四、注意事项1.采血部位不能有冻疮、紫绀、水肿和炎症等。2.消毒后，待酒精干后采血。3.取血时切忌用力挤压。4.进行多项检查时，采集标本的顺序依次为:PLT计数、RBC计数、Hb测定、WBC计数及分类、血型鉴定等。毛细血管采血法血液标本的采集毛细血管采血法血液标本的采集五、方法学评价1.操作方便；2.每人的皮肤厚度不同，无法控制采血刺入的深度；3.常需挤压诱导，导致组织液混入，影响结果准确性；4.标本不能重复应用；5.取血量少(<0.1ml)。1.毛细血管采血时应注意些什么？2.选择题：1）新生儿做血细胞计数，多用下列哪个部位采血A.手背B.耳垂C.足跟D.左手无名指2）关于毛细血管采血法，下列正确的是

A.耳垂血的红细胞、白细胞、血细胞比容结果均比静脉血低10%左右B.手指采血时流出的第一滴血即可用于检查C.婴儿宜用耳垂或手指采血D.成人推荐用手指采血，因其检查结果比较恒定复习思考题一、采血部位常用肘部静脉,也可手背或外踝静脉等。二、器材与试剂注射器、压脉带、垫枕、75%酒精、碘酒、无菌棉签(球)等。静脉采血法血液标本的采集用于需血量较多或全自动血液分析仪测定。四、注意事项1.防止标本溶血。2.压脉带压迫时间不能过长。3.切忌将注射器往静脉内推。三、采血步骤静脉采血法血液标本的采集毛细血管采血静脉采血缺点限制了重复实验和追加实验，标本量少，局部炎症可得假结果，可混入组织液。不同抗凝剂的使用，改变血液性质，影响有形成分的形态优点价廉、快速、操作简便，标本可直接测定标本代表性大，无组织液影响，适用于临床研究，可重复实验和追加其他实验。毛细血管采血与静脉采血优缺点比较血液标本的采集优点：防溶血防标本污染防交叉感染可多管采集缺点：成本较高血液标本的采集一次性使用静脉采血针

瓶塞穿刺针套（防止血液泄漏）抗凝：用物理或化学的方法，去除或抑制某些凝血因子，阻止血液凝固。概念血液标本的抗凝物理方法抗凝：脱纤维蛋白将血液注入到有玻璃珠的器皿中，转动，纤维蛋白缠绕凝固在玻璃球上，从而防止血液凝固成块。适用于免疫学检验、红斑性狼疮细胞和细菌培养血培养基的制备。常用抗凝剂：枸橼酸钠、草酸钠、二草酸盐、乙二胺四乙酸二钠（EDTA)、肝素抗凝剂(anticoagulant)：能够阻止血液凝固的化学试剂或物质。一.枸橼酸钠（柠檬酸钠）适用项目：凝血象检查、红细胞沉降率、血液保养液常用的抗凝剂血液标本的抗凝抗凝原理：与血中钙离子结合形成螯合物二.草酸钠三.双草酸盐抗凝剂抗凝原理：与钙离子形成草酸钙沉淀。适用项目：血细胞比容、红细胞(计数）草酸钾(钠)使RBC皱缩，草酸铵使RBC胀大。常用的抗凝剂血液标本的抗凝不适于血小板计数和白细胞分类计数四.乙二胺四乙酸（EDTA）盐抗凝原理：与钙离子结合形成螯合物适用项目：EDTA-K2用于血细胞计数(ICSH)

血细胞比容测定常用的抗凝剂血液标本的抗凝不适于凝血象检查及血小板功能试验。五.肝素适用项目：红细胞渗透脆性试验、血细胞比容测定血液流变学检查、多种生化分析抗凝原理：加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成、抑制血小板聚集。不适于白细胞计数及分类计数常用的抗凝剂血液标本的抗凝临床常用的采血试管血液标本的抗凝柠檬酸钠抗凝（抗凝比例1：9）用于凝血象检查

加入促凝剂，用于普通生化检查EDTA-K2抗凝，用于血常规检查肝素钠抗凝，用于血流变学检查等柠檬酸钠抗凝（抗凝比例1：4）用于红细胞沉降率的测定1.毛细血管采血时应注意些什么？2.常用的血液抗凝剂有哪些？3.选择题：1）新生儿做血细胞计数，多用下列哪个部位采血A.手背B.耳垂C.足跟D.左手无名指2）关于毛细血管采血法，下列正确的是

A.耳垂血的红细胞、白细胞、血细胞比容结果均比静脉血低10%左右B.手指采血时流出的第一滴血即可用于检查C.婴儿宜用耳垂或手指采血

复习思考题

3）不与Ca2+作用,但能阻止血液凝固的抗凝剂是A.草酸盐B.EDTA-K2

C.肝素D.枸橼酸钠4）下列几种抗凝剂，哪种最适宜用于血细胞计数

A.

乙二胺四乙酸二钾(EDTA－K2)B.枸橼酸钠C.草酸钠D.草酸钾

5）肝素作为抗凝剂,下列叙述错误的是A.具有较强的抗凝能力B.不影响血细胞体积C.过量使用可引起白细胞聚集

D.适用于做白细胞分类计数

血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。血涂片的用途：血细胞形态学检验、网织红、寄生虫检验。

任务二血涂片制备和细胞染色一、手工推片法将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度向2的方向滑动。图1-3血涂片制备示意图（上：侧面观，下：正面观）

血涂片制备推片载玻片血液将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（薄）一张满意的血涂片应厚薄均匀头体尾鲜明涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B123血涂片的观察低倍镜观察1.染色情况(满意、偏酸、偏碱）2.细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。李四123

嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞姬姆萨染色法

[原理]

吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更不清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释吉姆萨液代替缓冲液，按瑞特染色法染10min。或先用瑞特染色法染色后，再用稀释吉姆萨复染。吉姆萨染料1.0g甘油66.0ml甲醇（AR）66.0ml[染色方法]1.甲醇固定干燥血膜3-5min2.将血膜在染液中浸染10-30min3.流水冲洗,待干后镜检