双环醇对药物性肝损伤的保护作用及机制研究

双环醇对药物性肝损伤的保护作用及机制研究I双环醇对药物性肝损伤的保护作用及机制研究药物性肝损伤是指药物在使用过程中因药物本身或其代谢产物导致的肝脏损伤,亦称药物性肝病。近年来随着新药的不断上市及临床药物联合应用的需求药物性肝损伤的发病率呈逐年增加的趋势。据文献报道目前临床约的肝炎和的急性肝衰竭由药物引起而约占药物不良反应的 - 的发生、发展是涉及遗传、药物种类等多因素过程,其发病机制与氧化应激、细胞因子释放、线粒体损伤、肝细胞凋亡等密切相关。目前停药和同时给予肝保护药物是临床治疗 的主要手段。双环醇是我所研制的治疗慢性肝炎的国家一类新药。临床资料显示,双环醇可明显改善慢性乙肝病人的临床症状和损伤的肝功能且停药后反跳率低,长期应用未发现明显不良反应。以往药理研究表明,双环醇对多种化学毒物、酒精等引起的实验性急慢性肝损伤均具有较好的肝保护作用,其作用机制与其清除自由基、保护线粒体功能、抑制炎症因子过表达、抑制损伤因素导致的细胞凋亡等密切相关。近期临床资料表明,双环醇已用于抗精神病药、抗肿瘤药和抗结核药诱发的治疗明显改善患者受损的肝功能但双环醇对 保护作用相关机制尚不明了。本研究选用抗结核药利福平 、异烟肼和 和阿托伐他汀引起的两种 模型观察双环醇的保护作用,并对相关机制进行深入探讨,为其临床应用提供科学可靠的实验依据。.双环醇对抗结核药引起大鼠肝损伤的保护作用及机制研究大鼠灌胃给予抗结核药天可出现明显肝损伤表现为血清丙氨酸氨基转移酶天门冬氨酸氨基转移酶碱性磷酸酶和总胆红素水平升高以及肝细胞浊肿、炎细胞侵润、肝细胞坏死等病理变化。双环醇给药可剂量依赖性显著抑制抗结核药引起的血清、、和升高上述肝组织病理变化也得到明显改善。氧化应激是抗结核药肝损伤的主要诱因之一。大鼠灌胃给予抗结核药30天后肝脏脂质氧化终产物丙二醛显著升高为正常对照组的倍。而非酶抗氧化物谷胱甘肽含量显著下降为正常对照组的。双环醇、、可显著抑制肝脏水平的升高并防止耗竭使其维持在正常水平。此外肝脏抗氧化物酶超氧化物歧化酶 过氧化氢酶 和谷胱甘肽过氧化物酶活性也发生显著变化与对照组相比分别降低 、和 。双环醇给药可显著抑制 、和 活性的降低增强机体的抗氧化能力。肿瘤坏死因子aas a和白细胞介素nen是介入肝损伤的重要炎症因子。抗结核药肝损伤大鼠肝脏和1a水平明显升高分别为正常对照组的 和倍。

双环醇给药可明显抑制肝脏中 双环醇给药可明显抑制肝脏中 0和a水平的升高。此外双环醇对肝损伤大鼠血清 a和 的异常升高也有明显抑制作用线粒体损伤尤其是线粒体呼吸链功能异常在肝损伤发病过程中发挥关键作用。大鼠灌胃给予抗结核药天后肝脏 I和W活性与对照组相比分别降低和 。双环醇给药 可显著增加 I和 IV活性使之恢复到正常水平。抗结核药肝损伤大鼠肝脏线粒体还出现对罗丹明的摄取量明显少于正常对照组,对高钙浓度诱发肿胀的敏感性显著降低,提示线粒体发生了膜渗透性转换。双环醇给药 可显著改善受损的线粒体功能。肝细胞生长因子 是机体抵御肝脏应激损伤的第一道防线大鼠口服抗结核药后肝脏 蛋白表达明显上调为正常对照组动物的 倍。双环醇给药 可进一步促进该蛋白的表达为正常对TOC\o"1-5"\h\z照组动物的 倍。是体内参与 代谢的细胞色素代谢过程中产生的氧自由基被证实与 引起大鼠和人肝损伤密切相关。此外 可被酒精和某些药物如 诱导。体外肝微粒体温孵和体内动力学研究表明,给予抗结核药3双天后,大鼠肝脏活性和蛋白表达均明显增加。同时给予双环醇 后 活性较模型组相比降低 并可一定程度地抑制蛋白表达水平的异常升高。体内动力学实验表明大鼠灌胃给予抗结核药天后血浆 的和 与正常组大鼠相比略微下降双环醇 给药可抑制和 的降低。而双环醇给药对 和吡嗪酸的血浆药代动力学未见明显影响。此外,双环醇对三种抗结核药体外代谢影响的研究结果表明：1）双环醇低浓度 对、 在大鼠肝微粒体中的代谢均未见明显抑制作用中、高浓度双环醇 、 |J 对和 的体外代谢有不同程度的抑制作用但该浓度明显高于药效剂量的 C。双环醇2 0 J对 在大鼠肝胞浆中的体外代谢无明显影响。双环醇 、、对I 在人肝微粒体中的体外代谢均无明显影响。上述结果提示双环醇对I和 的体外代谢影响较小。综上所述,双环醇对抗结核药引起的大鼠肝损伤具有显著的保护作用,其肝保护机制可能与减轻氧化应激、抑制细胞因子表达、改善线粒体功能、促进的表达和调控 相关。此外双环醇在发挥保肝作用同时对抗结核药的体外代谢及大鼠体内血浆动力学影响较小。2.双环醇对阿托伐他汀引起高脂饮食金黄地鼠肝损伤的保护作用高脂饮食金黄地鼠每日灌胃给予阿托伐他汀 连续天可出现明显肝损伤表现为血清生化指标、和升高以及肝组织形态学改变肝小叶结构明显紊乱、肝束排列不齐、肝窦明显狭窄、弥漫性炎性细胞浸润、灶性坏死、大片状出血坏死、双环醇5 0 预防或治疗给药可剂量依赖性显著抑制阿托伐他汀引起的血清、、和 升高上述肝组织病理变化也得到明显改善。阿托伐他汀引起高脂饮食/肝损伤金黄地鼠还可见肝脏 显著升高为正

常对照组的 倍而肝脏抗氧化物 含量明显降低为高脂饮食对照组的。双环醇、 预防及治疗给药可显著抑制肝脏 水平的升高并防止耗竭使其维持在正常水平。此外肝脏、和 活性也发生显著变化与高脂饮食对照组相比分别降低 、 和 。双环醇 预防及治疗给药可显著抑制、和 活性的降低增强机体的抗氧化能力。TOC\o"1-5"\h\z本研究中高脂饮食对照组动物肝脏 、水平及、和 活性与标准饮食对照组相比未见明显变化。阿托伐他汀可引起高脂饮食／肝损伤金黄地鼠肝脏0和 a水平明显升高分别为高脂饮食对照组的 和倍。双环醇、 、 预防或治疗给药可明显抑制阿托伐他汀引起的肝脏a和0水平升高并具有一定的剂量关系。此外双环醇对血清a和0的异常升高也有明显抑制作用高脂饮食金黄地鼠给予阿托伐他汀天后肝脏 I和活性与高脂饮食对照组相比分别降低 和36.0。6环双环醇 预防给药可显著增加 I和 IV活性使之恢复到正常水平。阿托伐他汀引起的高脂饮食／肝损伤金黄地鼠肝脏线粒体还出现对的摄取量明显减少对高钙诱发肿胀的敏感性显著降低提示线粒体发生了膜渗透性转换。双环醇 给药后可显著改善受损的线粒体功能。本研究应用细胞建立了阿托伐他汀细胞损伤模型。应用此细胞模型探讨了双环醇对阿托伐他汀引起的细胞凋亡的影响。应用此细胞模型探讨了双环醇对阿托伐他汀引起的细胞凋亡的影响。存活率下降为对照组的48.7显%微镜下可见细胞出现皱缩、细胞核膨胀等形态学改变。双环醇、、M可显著抑制阿托伐他汀引起的细胞存活率下降并呈一定的量效关系细胞形态学改变也明显减轻。阿托伐他汀 、、可引起细胞中参与细胞凋亡最主要的终末剪切酶 活性明显升高为正常对照组的倍。双环醇0、可显著抑制阿托伐他汀引起的细胞 活性的异常升高。细胞线粒体膜电位检测和 双荧光细胞核染色实验结果表明阿托伐他0、处理细胞后细胞发生早期凋亡。双环醇、可明显抑制阿托伐他汀引起 细胞的凋亡。阿托伐他汀给药后细胞浆内无活性的 蛋白表达量显著升高为正常对照的倍双环醇 可显著抑制 蛋白的表达上调使其表达水平趋于正常。此外本研究可见 细胞经阿托伐他汀、、处理后 活性下降至正常细胞的 。双环醇、对阿托伐他汀引起的细胞活性的下降具有明显的保护作用。由此可见双环醇对阿托伐他汀引起的高脂饮食金黄地鼠肝损伤和 细胞损伤具有良好的保护作用。双环醇的保护作用机制与减轻氧化／硝化应激、抑制细胞因子表达、改善线粒体功能、调控功能和抑制细胞凋亡相关。综上所述双环醇对抗结核药、和 和阿托伐他汀引起的具有明显的保护作用。其不仅可抑制血清转氨酶、 和 的升高、还可改善肝脏病理学损伤其保护作用的机制可归纳为：代谢酶调控：抑制活性并下调其蛋白的异常表达。改善氧化应激：抑制脂质过氧化恢复 含量改善抗氧化物酶、- 的活性。改善硝化应激：抑制升高及 蛋白的过表达。抑制炎症细胞因子表达：下调血清和肝脏 a、 0蛋白的过表达。减轻线粒体损伤：维持线粒体膜完整性和正常膜电位增加 和活性。调节凋亡和肝保护相关蛋白:提高细胞活性和促进肝脏的表达。上述研究为进一步了解双环醇的肝保护作用特点以及临床治疗提供了有参考价值的实验依据。II抗新化合物的代谢产物与同工酶的相互作用是基于天然产物化学修饰的新型非核苷类抗 化合物。药效学研究表明其体外抗活性及治疗指数均比天然产物高倍。与已上市药物奈韦拉平的抗 活性相当并具有较好的协同作用尤其是对临床主要耐药病毒株 对耐韦拉平等药物不敏感也具有明显抑制作用 小于。急性毒性实验表明该化合物毒性较低。因此有望成为临床治疗艾滋病的新药。前期药代研究结果表明大鼠和人肝微粒体中可检出个的I相代谢产物其中氧化脱氯产物为主要的I相代谢产物。大鼠口服后代谢产物可进一步经尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶催化生成葡萄糖醛酸结合物但介入 II相代谢的 类型及对 的影响尚不明了。因此本研究应用人肝微粒体和重组人源 同工酶体外温孵体系选择 同工酶探针底物和抑制剂鉴定了参与II相代谢的同工酶类型评价了对 活性的体外抑制作用并进一步探讨了 与底物药物和 的体外相互作用。实验结果表明：1）在人肝微粒体和6个重组人源并进一步探讨了 与底物药物和 的体外相互作用。实验结果表明：1）在人肝微粒体和6个重组人源同工酶中是1参与II相结合反应的主要同工酶和 部分参与。M可显著抑制人肝微粒 和的活性肝微粒体 和 也有一定抑制作用抑制率分别为和在人源重组酶中和 的抑制作用较人微粒体中在人源重组酶中和 的抑制作用较人微粒体中更为显著对 和未见明显的抑制作用。 以混合性方式抑制人肝微粒体 介导的霉酚酸 II相葡萄糖醛酸化反应值为±1