免疫学检验技术沉淀反应

知识目标1.掌握：沉淀反应的概念及特点；免疫电泳技术的种类和原理（重点）。2.熟悉：凝胶内沉淀试验的种类及原理，免疫电泳的应用（重难点）。3.了解：液相沉淀试验的原理；各种沉淀试验的技术要点和影响因素；沉淀反应的临床应用。能力目标掌握：凝胶内沉淀试验和免疫电泳技术的操作方法熟悉：双扩和免疫电泳技术的结果判读和临床应用思政-素质目标爱岗敬业、责任心、细心、耐心、质控和生物安全意识、免疫学思维教学目标沉淀反应的概念及特点。液相内沉淀试验的原理及种类。凝胶内沉淀试验的原理及种类。双向琼脂扩散试验的应用。凝胶免疫电泳技术的种类及原理。沉淀反应方法的技术要点、影响因素及临床应用。本章要点沉淀反应概述一液相内沉淀反应二凝胶内沉淀反应三凝胶免疫电泳技术四沉淀反应的临床应用五目录环状沉淀试验：抗原溶液叠加在细玻璃管内的抗体液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。絮状沉淀试验：可溶性抗原、抗体在液相中特异性结合，形成絮状沉淀物。免疫比浊度分析：透射、散射和免疫胶乳比浊法，应用于自动化。液相内沉淀反应二第一节液相内沉淀试验环状沉淀试验絮状沉淀试验免疫比浊度分析抗原溶液叠加在细玻璃管内的抗体液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。可溶性抗原、抗体在液相中特异性结合，形成絮状沉淀物。透射、散射和免疫胶乳比浊法该法受抗原抗体比例影响非常显著，常用于测定抗原抗体反应最适比例。标本需要量大、灵敏度低、分辨力差、只能定性，临床几乎不用。该法最大优点稳定性好、敏感度高、精确度高、简便快速、易于自动化。絮状沉淀试验是将抗原与相应抗体混合，在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形成肉眼可见的絮状沉淀物。方法受抗原抗体比例的影响非常明显应用于测定抗原抗体反应的最适比例三种类型：①抗原稀释法：抗原最适比例②抗体稀释法：抗体最适比例③方阵滴定法：抗原抗体最适比例絮状沉淀试验1:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀释加入抗血清各管抗体量相同振摇混匀、37℃孵育沉淀量不同出现沉淀量最多的管为最适比例管。轻摇沉示意图淀AgAbAg知识目标1.掌握：沉淀反应的概念及特点；免疫电泳技术的种类和原理（重点）。2.熟悉：凝胶内沉淀试验的种类及原理，免疫电泳的应用（重难点）。3.了解：液相沉淀试验的原理；各种沉淀试验的技术要点和影响因素；沉淀反应的临床应用。能力目标掌握：凝胶内沉淀试验和免疫电泳技术的操作方法熟悉：双扩和免疫电泳技术的结果判读和临床应用思政-素质目标爱岗敬业、责任心、细心、耐心、质控和生物安全意识、免疫学思维教学目标沉淀反应的概念及特点。液相内沉淀试验的原理及种类。凝胶内沉淀试验的原理及种类。双向琼脂扩散试验的应用。凝胶免疫电泳技术的种类及原理。沉淀反应方法的技术要点、影响因素及临床应用。本章要点沉淀反应概述一液相内沉淀反应二凝胶内沉淀反应三凝胶免疫电泳技术四沉淀反应的临床应用五目录环状沉淀试验：抗原溶液叠加在细玻璃管内的抗体液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。絮状沉淀试验：可溶性抗原、抗体在液相中特异性结合，形成絮状沉淀物。免疫比浊度分析：透射、散射和免疫胶乳比浊法，应用于自动化。液相内沉淀反应二第一节液相内沉淀试验环状沉淀试验絮状沉淀试验免疫比浊度分析抗原溶液叠加在细玻璃管内的抗体液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。可溶性抗原、抗体在液相中特异性结合，形成絮状沉淀物。透射、散射和免疫胶乳比浊法该法受抗原抗体比例影响非常显著，常用于测定抗原抗体反应最适比例。标本需要量大、灵敏度低、分辨力差、只能定性，临床几乎不用。该法最大优点稳定性好、敏感度高、精确度高、简便快速、易于自动化。絮状沉淀试验是将抗原与相应抗体混合，在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形成肉眼可见的絮状沉淀物。方法受抗原抗体比例的影响非常明显应用于测定抗原抗体反应的最适比例三种类型：①抗原稀释法：抗原最适比例②抗体稀释法：抗体最适比例③方阵滴定法：抗原抗体最适比例絮状沉淀试验1:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀释加入抗血清各管抗体量相同振摇混匀、37℃孵育沉淀量不同出现沉淀量最多的管为最适比例管。轻摇沉示意图淀AgAbAg知识目标1.掌握：沉淀反应的概念及特点；免疫电泳技术的种类和原理（重点）。2.熟悉：凝胶内沉淀试验的种类及原理，免疫电泳的应用（重难点）。3.了解：液相沉淀试验的原理；各种沉淀试验的技术要点和影响因素；沉淀反应的临床应用。能力目标掌握：凝胶内沉淀试验和免疫电泳技术的操作方法熟悉：双扩和免疫电泳技术的结果判读和临床应用思政-素质目标爱岗敬业、责任心、细心、耐心、质控和生物安全意识、免疫学思维教学目标沉淀反应的概念及特点。液相内沉淀试验的原理及种类。凝胶内沉淀试验的原理及种类。双向琼脂扩散试验的应用。凝胶免疫电泳技术的种类及原理。沉淀反应方法的技术要点、影响因素及临床应用。本章要点沉淀反应概述一液相内沉淀反应二凝胶内沉淀反应三凝胶免疫电泳技术四沉淀反应的临床应用五目录指可溶性抗原、抗体在含有电解质的凝胶内自由扩散形成浓度梯度，二者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。根据抗原与抗体反应的方式和特性，可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。凝胶内沉淀反应三根据试验形式可分为试管法和平板法两种，试管法因沉淀环不易观察及定量，目前较少应用。

抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原的浓度成正相关。本法稳定、简便、无需仪器设备。重复性和线性均可信，但灵敏度稍差、耗时长、影响因素多。一、单向琼脂扩散试验（平板法）沉淀环抗原抗体+琼脂倾注平板打孔

加样

放置37℃，24～48h观察沉淀环2.单向琼脂扩散试验（平板法）单向琼脂扩散试验结果：上排为5个不同浓度的参考品；下排为患者血清，下排右2为异常病理血清3.方法评价：稳定、简便、无需仪器设备。重复性和线性均可信，但灵敏度稍差、耗时长、影响因素多。4.临床应用：用于检测血清中Ig含量；单个补体成分含量影响因素：－抗体质量－标准曲线，质控血清－结果与真实含量不符－双环现象（不同扩散率抗原性相同的两个组分）

上排为5个不同浓度的参考品；下排为患者血清，下排右2为异常病理血清将抗原抗体分别加在琼脂糖凝胶不同的对应孔中，两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处形成白色沉淀线。沉淀线的位置、形状以及对比关系，可进行定性分析，如抗原或抗体的存在与否、相对含量估计、相对分子量分析和性质分析。本法操作简单、特异性高、结果可靠、成本低廉，但灵敏度低，耗时长，不能精确定量。二、双向琼脂扩散试验（平板法）1.抗原或抗体的定性分析。2.抗原、抗体的相对分子量和相对浓度的估计。

双向琼脂扩散试验应用A：Ag、Ab浓度及分子量近似；B：Ag、Ab浓度近似，分子量Ag＜Ab；C：Ag、Ab浓度近似，分子量Ag＞Ab；D：浓度Ag＞Ab，分子量近似；E：浓度Ag＞Ab，分子量Ag＜Ab；F：浓度Ag＜Ab，分子量Ag＞Ab抗原完全相同抗原部分相同抗原完全不同3.抗原性质的分析4.抗体效价的测定5.抗原或抗体纯度的鉴定知识目标1.掌握：沉淀反应的概念及特点；免疫电泳技术的种类和原理（重点）。2.熟悉：凝胶内沉淀试验的种类及原理，免疫电泳的应用（重难点）。3.了解：液相沉淀试验的原理；各种沉淀试验的技术要点和影响因素；沉淀反应的临床应用。能力目标掌握：凝胶内沉淀试验和免疫电泳技术的操作方法熟悉：双扩和免疫电泳技术的结果判读和临床应用思政-素质目标爱岗敬业、责任心、细心、耐心、质控和生物安全意识、免疫学思维教学目标沉淀反应的概念及特点。液相内沉淀试验的原理及种类。凝胶内沉淀试验的原理及种类。双向琼脂扩散试验的应用。凝胶免疫电泳技术的种类及原理。沉淀反应方法的技术要点、影响因素及临床应用。本章要点沉淀反应概述一液相内沉淀反应二凝胶内沉淀反应三凝胶免疫电泳技术四沉淀反应的临床应用五目录电泳分析与沉淀反应的结合产物，即可溶性抗原和抗体在直流电场的作用下，在凝胶内加速定向泳动，彼此相遇而特异性结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。该技术提高了沉淀反应的速度和敏感度，广泛用于临床实验诊断和科学研究。凝胶免疫电泳技术四无沉淀线出现表明无相应的抗原。沉淀线位于抗原抗体孔中间，说明两者比例较适合。沉淀线偏向抗原孔一方，表示抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度。一、对流免疫电泳技术单向免疫扩散和电泳的定量检测技术。固定抗体不移动，抗原向正极泳动，随着抗原量减少，基底区越来越窄，形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个如火箭的沉淀峰，峰的高度与抗原量呈正相关。火箭免疫电泳图①②③④为标准抗原；⑤⑥为标本-+二、火箭免疫电泳技术技术要点：

1.2%巴比妥琼脂糖约55℃，加入适量抗血清，混匀后制板，打孔，孔内加待测样品，样品孔放负极侧，6h后观察琼脂板上沉淀峰，绘制标准曲线，求出待测样品浓度。影响因素：琼脂（无电渗或电渗很小的）影响火箭形状不规则;电泳终点时间的确定;

标本数量多时应先通电后加样,防止宽底峰形;IgG定量时，可用甲醛与IgG上的氨基结合（甲酰化），抵消了电渗作用。三、免疫电泳技术技术要点：制备琼脂板，打孔，加样于孔内，电泳2～3mA/cm，0.5～1h后，槽内加入相应抗血清作双向扩散。影响因素抗原抗体比例不当,需测抗原抗体最适比;抗血清的抗体谱，混合抗血清的使用;电泳条件直接影响分辨率。应用

纯化抗原和抗体成分的分析及正常和异常免疫球蛋的识别与鉴定SPGAMκ

λSPGAMκ

λSPGAMκ

λ四、免疫固定电泳技术分辨率强，敏感度高，操作周期短，仅需数小时，结果易于分析。应用最常用于M蛋白的鉴定与分型，也用于尿中本周氏蛋白质的检测与κ、λ分型，脑脊液中寡克隆蛋白的检测与分型。优点免疫固定电泳知识目标1.掌握：沉淀反应的概念及特点；免疫电泳技术的种类和原理（重点）。2.熟悉：凝胶内沉淀试验的种类及原理，免疫电泳的应用（重难点）。3.了解：液相沉淀试验的原理；各种沉淀试验的技术要点和影响因素；沉淀反应的临床应用。能力目标掌握：凝胶内沉淀试验和免疫电泳技术的操作方法熟悉：双扩和免疫电泳技术的结果判读和临床应用思政-素质目标爱岗敬业、责任心、细心、耐心、质控和生物安全意识、免疫学思维教学目标沉淀反应的概念及特点。液相内沉淀试验的原理及种类。凝胶内沉淀试验的原理及种类。双向琼脂扩散试验的应用。凝胶免疫电泳技术的种类及原理。沉淀反应方法的技术要点、影响因素及临床应用。本章要点沉淀反应概述一液相内沉淀反应二凝胶内沉淀反应三凝胶免疫电泳技术四沉淀反应的临床应用五目录沉淀反应的临床应用五沉淀试验的临床应用1.经典的沉淀反应均可用于抗原抗体性质、效价、纯度及相对分子质量和浓度的分析。2.免疫浊度法目前主要用于蛋白质的测定，如血液中的免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、κ轻链、λ轻链，补体C3、C4，血浆蛋白，C-反应蛋白，类风湿因子等；尿及脑脊液微量蛋白和半抗原（激素、毒物、治疗性药物等）；还可用于血浆药物浓度的测定。

3.对流免疫电泳与火箭免疫电泳因存在电渗作用，目前已不推荐使用。4.免疫电泳扩散时间长，影响因素多，结果较难分析。5.免疫固定电泳分辨力强，敏感度高，结果易于分析，现常用于鉴定迁移率相近的蛋白和M蛋白，免疫球蛋白轻链，尿液、脑脊液等微量蛋白，游离轻链，补体裂解产物等，临床最常用于M蛋白的鉴定与分型，并已列入临床实验室的常规检测工作。1.主要用于血液、体液中蛋白质的测定。2.优点：稳定性好，敏感度高，精确度高，简便快速，易于自动化，无放射性核素污染，适合大批量标本检测。

3.对流免疫电泳与火箭免疫电泳技术由于电渗的缘故已不推荐使用。4.免疫电泳扩散时间长，影响因素多，结果不易分析。5.免疫固定电泳分辨力强，敏感度高，结果易于分