金免疫技术（免疫学检验课件）

第十九章金免疫技术

（ColloidalGoldImmunoassay）

金免疫技术是以胶体金（colloidal－gold）作为示踪标记物，用于抗原抗体反应的一种新型标记免疫测定技术，是继荧光素、放射性核素、酶标记技术之后一常用非放射性核素标记技术。

该类试验的最大特点是不需要大型设备，对检测人员稍加培训即能掌握操作要求和判定标准。简便、快速，定性，“床边检验”前言胶体金也称金溶胶，是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。核心为原子金（Au），外围双离子层（内层Cl-，外层H+）。胶体金颗粒大小多在1nm～100nm，微小金颗粒稳定、均匀、呈单一分散状态悬浮在液体中，成为胶体金溶液。第一节胶体金与免疫金的制备一、胶体金的特性呈色性：不同大小的胶体金呈色有一定差别微小-呈红色；最小（2-5nm）—橙黄色；中等大小（10-20nm）—酒红色；较大（30-80nm）—紫红色。根据这一特点，用肉眼观察胶体金的颜色可粗略估计金颗粒的大小。胶体金优质劣质二、胶体金的制备

胶体金（colloidalgold）的制备一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂使金离子还原成金原子，形成金颗粒悬液，也称金溶胶（goldsolution）。

胶体金的制备及特性胶体金粒径1%柠檬酸钠加入量胶体金特性（nm)

（ml)*呈色lmax(nm)162.00橙色51824.51.50橙红色522411.00红色52571.50.70紫色535*还原100ml0.01%HAuCl4所需量免疫渗滤试验（IFA）始创于1985年，最初以酶作为标记物。20世纪90年代初金免疫渗滤技术得到了快速发展，用于检测各种传染病的抗体和肿瘤标志物等。目前临床中用于检测尿液HCG的“金标”早孕诊断试剂就是应用这种方法。第一节斑点金免疫渗滤试验将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素膜上，制成抗原或抗体包被的微孔滤膜并贴置于吸水材料上，依次在膜上滴加标本、金标试剂及洗涤液等，液体很快渗入吸水材料中，阳性反应即在膜上呈现红色斑点。一、检测原理二、方法类型双抗体夹心法测抗原

间接法测抗体

胶体金反应板胶体金标记物洗涤液抗原参照品或抗体阳性对照品

三、关键技术（一）试剂盒组成1将反应板平放于实验台面上，于小孔内滴加含待测抗原的标本1～2滴，待完全渗入，待测抗原与膜上的抗体反应而结合在膜上。2于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1～2滴，待完全渗入，使胶体金标记抗体与结合在膜上的待测抗原反应。

（二）技术要点3于小孔内滴加洗涤液2～3滴，待完全渗入，洗去未结合的胶体金标记抗体。4在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点显示者判定为阳性反应；反之则为阴性反应。斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。双抗体夹心法测抗原AB金标抗体待测标本。第三节胶体金免疫层析技术免疫层析技术（ICA）的原理与渗滤技术相同，不同点在于液体的移动是基于层析作用的横流，而不是通过直向的穿流。该方法的试剂为试纸条形式，结构简单。测定项目包括HCG等激素、肿瘤标志物、心血管病标志物、传染病的抗原和抗体等。将各种反应试剂分点固定在试纸条上，检测标本滴加在试纸条的一端，通过层析作用使样品在层析材料上泳动，样本中的待测物与试纸条上的试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），无关物则越过该区域而被分离，通过胶体金的呈色条带判读实验结果。一、检测原理

免疫层析试验的原理与IFA相同，不同点在于液体的移动不是通过直向的穿流，而是基于层析作用横流。双抗体夹心法测抗原二、方法类型AGTBC双抗体夹心法G区：金标特异性抗体(兔型)C区：羊抗兔IgT区：特异性抗体

吸水纸标本竞争法测抗原AGTCB竞争法标本G区：金标特异性抗体(兔型)C区：羊抗兔IgT区：标准抗原

吸水纸阳性结果标本G区：金标特异性抗体(兔型)C区：羊抗兔IgT区：标准抗原

吸水纸阴性结果

A、B两端分别粘贴吸水材料，G处为干燥固定在玻璃纤维膜等材料上的胶体金结合物，T处粘附有已知的抗体或抗原，C处为粘附的质控品（抗免疫金抗体），T、C点物质往往以直线的形式包被在膜上。三、关键技术（一）试剂盒组成AGTCBICA试剂条样品垫结合物垫NC膜吸水垫以双抗体夹心法为例：1将试纸条标记线一端浸入待测标本中2秒～5秒或在标本加样处加一定量的待检标本，平放于水平桌面。25min～20min内观察结果。3结果判断。（二）技术要点吸水垫结合物垫NC膜观察窗吸水垫待测标本层析金标抗体包被抗体包被抗金标抗体双抗体夹心法测抗原结果观察

阳性阴性无效TC结果观察IFA与ICA的比较IFAICA试剂形式渗滤装置及附加试剂试剂条试剂保存4~8℃6个月室温一年操作步骤3~51观察时间3min3~20min阳性反应颜色浓度操作结束颜色不变颜色逐渐加深金免疫技术具有操作简便、快速以及操作人员不需技术培训，除试剂外无需特殊仪器设备，且试剂稳定，便于保存等优点，因此特别适用于急诊检验。目前临床检验中已开展的项目有：HCG、HBV等。新项目正在不断发展中。小结金免疫技术是以胶体金作为标记物的免疫标记技术。胶体金免疫渗滤试验是将硝酸纤维素膜上包被抗原或抗体，将其置于渗滤装置中，进行免疫结合试验，抗原抗体反应后，形成大分子胶体金复合物，从而使阳性结果