免疫学检验技术-抗原抗体反应

知识目标掌握：抗原抗体结合力和抗原抗体反应特点（重难点）。熟悉：影响抗原抗体反应因素（难点）。了解：抗原抗体反应原理（难点）、抗原抗体反应类型。教学目标能力目标利用抗原抗体反应的特点进行免疫学检测。思政-素质目标严谨求实的作风、质控、生物安全意识等抗原抗体反应特点。影响抗原抗体反应因素。抗原抗体反应原理。本章要点二三四目录一抗原抗体反应原理抗原抗体反应特点抗原抗体反应的影响因素抗原抗体反应类型抗原抗体在体内体外能发生特异性结合。由于抗原理化性状和抗体类型不同，抗原抗体结合后表现出不同的反应类型，可用于疾病的诊断、病原鉴定、药物分析等检测。如何利用抗原抗体反应的特点准确的进行免疫学检测是一个重要内容。前言基本概念抗原抗体反应

抗原与抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。抗原抗体反应的原理和物质基础:抗原表位与抗体高变区间的互补结合在极短距离内才能发生一抗原抗体反应原理一、抗原抗体结合力静电引力：又称库伦引力指带电离子基团（如：—NH3+和COO-）之间的引力，距离越近引力越大。范德华引力：

原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，其决定分子空间构型。能量小于静电引力。氢键：由分子中H原子与电负性大的O和N原子等相互作用形成的引力，结合力较范德华力强，因为需要受氢体和供氢体之间的互补形成氢键，因此更具有特异性。疏水作用：疏水集团相互排斥水分子而趋于聚集的力。作用力最强，占总结合力的50%。

二、抗原抗体亲和力和合力亲和力(affinity)抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间的结合强度，用平衡常数K值表示，K值越高抗原抗体结合越牢固亲合力(avidity)

一个完整的抗体结合部位与若干个抗原表位之间结合的强度。三、亲水胶体转化为疏水胶体形成可见抗原抗体反应抗原/抗体结合水化层变薄，失去亲水性电解质中和胶体粒子表面电荷，使各疏水胶体进一步靠拢疏水胶体知识目标掌握：抗原抗体结合力和抗原抗体反应特点（重难点）。熟悉：影响抗原抗体反应因素（难点）。了解：抗原抗体反应原理（难点）、抗原抗体反应类型。教学目标能力目标利用抗原抗体反应的特点进行免疫学检测。思政-素质目标严谨求实的作风、质控、生物安全意识等抗原抗体反应特点。影响抗原抗体反应因素。抗原抗体反应原理。本章要点一三四目录抗原抗体反应原理二抗原抗体反应特点抗原抗体反应的影响因素抗原抗体反应类型二抗原抗体反应特点

特异性：抗原与抗体结合反应的专一性。分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性。交叉反应：两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应。缺点：影响检测的准确性优点：协助检测一、特异性抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性（非共价键结合）影响因素：抗体对相应抗原的亲合力：亲合力越高，结合越牢固，越不易解离。环境因素对复合物的影响：pH（破坏离子间的静电引力）、离子强度（破坏离子间的静电引力）二、可逆性前带(prezone)：抗体过量后带(postzone)：抗原过量等价带(equivalencezone)：抗原抗体比例合适三、比例性

免疫学检测时，由于带现象的干扰，导致假阴性结果。抗体的两个Fab段分别结合两个Ag分子，相互交叉结合连接成巨大的网格状立体聚合物，（可见）。二者比例合适过剩方的结合价得不到饱和，大多数游离存在，只形成小分子复合物（不可见）。由此可知：确定

的浓度非常重要，即在实验中需对Ag/Ab进行适当的

，调整二者的比例，产生可见反应。

一般原则：固定

含量（Ag/Ab）的浓度，稀释

含量的(Ab/Ag)。

一般可溶性Ag稀释

，颗粒性Ag，稀释

。Ag/Ab稀释低高AgAb第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见（数秒或数分钟内完成）。第二阶段：反应可见阶段，反应慢（数分钟或数小时或数日）），出现凝集、沉淀和细胞溶解等现象。受电解质、温度和酸碱度影响。四、阶段性知识目标掌握：抗原抗体结合力和抗原抗体反应特点（重难点）。熟悉：影响抗原抗体反应因素（难点）。了解：抗原抗体反应原理（难点）、抗原抗体反应类型。教学目标能力目标利用抗原抗体反应的特点进行免疫学检测。思政-素质目标严谨求实的作风、质控、生物安全意识等抗原抗体反应特点。影响抗原抗体反应因素。抗原抗体反应原理。本章要点一二三四目录抗原抗体反应原理抗原抗体反应特点抗原抗体反应的影响因素抗原抗体反应类型三抗原抗体反应的影响因素一、自身因素抗原：抗体来源：

驴和马免疫血清：等价带较窄（H型抗体）兔：等价带较宽（R型抗体）

浓度：比例合适出现可见反应亲合力

可溶性抗原＋相应抗体→沉淀颗粒性抗原＋相应抗体→凝集单价抗原－－不凝集或沉淀二、环境因素知识目标掌握：抗原抗体结合力和抗原抗体反应特点（重难点）。熟悉：影响抗原抗体反应因素（难点）。了解：抗原抗体反应原理（难点）、抗原抗体反应类型。教学目标能力目标利用抗原抗体反应的特点进行免疫学检测。思政-素质目标严谨求实的作风、质控、生物安全意识等抗原抗体反应特点。影响抗原抗体反应因素。抗原抗体反应原理。本章要点一二三四目录抗原抗体反应原理抗原抗体反应特点抗原抗体反应的影响因素抗原抗体反应类型四抗原抗体反应类型反应类型实验技术结果判断凝集反应直接凝集试验观察凝集现象间接凝集试验同上抗球蛋白试验同上沉淀反应液相沉淀试验观察沉淀，检测浊度免疫电泳技术观察扫描沉淀峰、沉淀弧补体参与的反应补体溶血试验观察测定溶血现象补体结合试验同上抗原-抗体反应的类型反应类型实验技术结果判断中和反应病毒中和试验检测病毒感染性毒素中和试验检测外毒素毒性标记免疫反应荧光免疫技术检测荧光现象放射免疫技术检测放射性强度酶免疫技术检测酶底物显色发光免疫技术