卫生学检查技术-热原和细菌内毒素检查法

第三节第五章中药制剂的卫生学检查热原检查法

（一）基本概念热原(pyrogen)系指药品中含有的能引起体温升高的杂质，主要为细菌性热原。方法：家兔检查法，即将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限量是否符合规定。（二）检查对象供静脉滴注用的注射剂以及容易感染热原的品种。

第三节热原检查法一、基本知识

第三节热原检查法3只兔：0.5小时测1次，共6次，最高-最低＝升高的温度结果：均升高在0.6℃以下且升高的总数在1.3℃以下认为符合规定家兔检查法第四节第五章中药制剂的卫生学检查细菌内毒素检查法

（一）基本概念细菌内毒素检查法系指利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。（二）检查方法即凝胶法和光度测定法。凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。是中国药典的“仲裁”方法。第四节细菌内毒素检查法一、基本知识

第四节细菌内毒素检查法二、仪器和试剂

37±1℃恒温水浴或适宜的恒温器具、超净工作台、漩涡混合器、内毒素工作标准品、加样器、鲎试剂、鲎试验用水、pH调节剂等。鲎试剂漩涡混合器加样器第四节细菌内毒素检查法三、测定方法供试品限值确定最大有效稀释倍数（MVD）确定供试品干扰实验正式实验结果判断实验流程第四节细菌内毒素检查法供试品内毒素检查：凝胶限度试验编号内毒素浓度／被加入内毒素的溶液平行管数A无／供试品溶液2B2λ／供试品溶液2C2λ／检查用水2D无／检查用水2A为供试品溶液；B为供试品阳性对照；C为阳性对照；D为阴性对照。λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml)。第四节细菌内毒素检查法

将试管轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37±1℃的恒温器中，保温60±2分钟后，将试管取出，缓缓倒转180°，若管内凝胶不变形，不从管壁脱落为阳性(+)，凝胶不能保持完整并从管壁脱落为阴性(-)。第四节细菌内毒素检查法3.结果判断

观察结果时，若2支供试品阳性对照管和2支阳性对照管均为（+），2支阴性对照管均为(−)，试验有效，否则试验无效；若2支供试品管均为(−)，判定供试品符合规定；若均为（+），判定供试品不符合规定；若2支供试品管中1支为(+)，1支为(−)，则另取4支复试，4支中有1支为(+)即认为不合格。第四节细菌内毒素检查法四、注意事项1．防止鲎试验用水被污染；2．开启内毒素标准品和鲎试剂时，要将粘附在安瓿瓶上的粉末尽可能弹落下去。用砂轮划过安瓿后，要用酒精棉（最好能用沾异丙醇的无纺布，以避免产生假阳性结果）擦拭，防止开启时玻璃屑落入安瓿内。开启内毒素标准品时，要在安瓿曲颈上部，并尽可能保留较长的安瓿颈，准确加入1.0ml鲎试验用水复溶。第四节细菌内毒素检查法3．细菌内毒素要充分混合均匀，内毒素工作标准品溶解后要在漩涡混合器混合15分钟，以后的每一步稀释前至少混合30秒钟。4．保温和拿取试管过程中应避免受到振动造成假阴性结果。5．对灵敏度标示值的误解：如λ=0.06E