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文档简介

第一部分

工具酶与基因工程

一.限制性核酸内切酶1.限制性核酸内切酶的发现

2.I类和III类限制和修饰酶的基本特征

3.II类限制和修饰酶的基本特征

4.甲基化酶的基本特征

二.其它工具酶

1.DNA连接酶2.聚合酶3.末端脱氧核苷酰转移酶(TdT)4.SI核酸酶5.Bal31核酸酶6.碱性磷酸单脂酶

限制性内切酶(RestrictionEndonuclease)

*存在于任何一种原核细菌中.

*在特异位点上催化双链DNA分子的断裂,产生相应的限制性片段.

*各种生物呈现特征性的限制性内切酶切图谱.

*在生物分类,基因定位,基因重组,疾病诊断,刑事侦察领域极为重要.

一.限制性内切酶的发现:(宿主细胞的限制和修饰作用)宿主细胞的限制和修饰作用:两种不同来源的入-噬菌体入K;入B,能高频感染各自大肠杆菌宿主细胞(K株,B株)。当它们分别与其它宿主菌交叉混合培养时,感染下降数千倍。一但入K噬菌体在B株成功,由B株繁殖出入K后代,能感染B株,不能感染原来K株.1宿费主赶细善胞灭的趣限债制希和滴修刊饰钳作逝用肿;1纠.梢两材种赵不闲同招来盾源希的召入概-练噬氧菌荡体肺(辛入灯-箩K排,吧入鸣-炕B来)卡。2庭.闯能敞高流频跟感俯染款各努自堡大偏肠武杆贿菌霉宿动主呀细贷胞赶(垮K秆株愉,壁B探株资)庄。3吸.小当羡它宫们倾分挺别俱与乓其纺它评宿溪主捧菌声交敲叉棵混傻合吴培亦养矿时侍,(违入烘K递-盯B唤,叛入茶B席-宿K浮)愁感宵染拖下厨降环数稍千肺倍灯。4陈.行一晨但凉入很K叮噬陪菌昏体蹄在正B樱株羞成玻功纽奉,挖由椒B旷株候繁圣殖混出入齿-艳K蜡后主代睬,盗能佩感秀染询B踪蝶株把,不很能睁再资感催染俭原镜来盒K宫株冬.称骗为向:穴宿角主别细吩胞伸的雹限陡制葬和可修鸽饰易作希用二掌.鄙限往制警和催修腾饰派作渡用同的个分伴子播机崇制1毯.洋大诸肠绞杆饲菌尊宿惨主撞细郊胞衫K找株饼,起B辞株竿,很有难各孩自涨的堂限移制株和有修谊饰角系晌统呢。1雅)它查们英均仆有捷三稳个禾连致续团的适基皂因煤位严点似控弃制还,保h溪s振d弄R劫;勺h火s户d偶M待;明h饶s堡d纷S个.2女)h屋s区d然R伯编市码绢限愁制厌性率核络酸坐内秒切义酶菜-念-锣-疗识挎别键D填N承A开分款子跨特笛定齐位涛点昆,矮将腊双置链碎D笔N势A鼓切吹断重。酿(是D粮N腾A睁分淋子辆转悼化牛细扒胞秋:孙受怕体杀细托胞楼去着掉拨h炮s住d鞋R客基颗因历位洒点困)3革)h处s周d轧M裂编偶码饼产商物露是燥D堆N盐A市甲题基件化掩酶团-境-决-然催凑化婶D产N斩A帽分迁子匀特码定卡位秆点条的其碱注基武甲狂基滩化忍反封应易。4辩)h偶s栋d诉S王表钢达遥产志物笨的伍功灰能议是球-烛-颂-坝协朗助鲁限船制到性删核欧酸姑内挠切设酶旅和倡甲狸基诊化联酶非,葡识肚别加特宣殊溉的党作未用互位传点球。2沉.建入射噬角菌足体粘长水期煮生我长谅在杜大老肠堡杆积菌潜宿岔主职细磁胞屑K棵株布,牺B付株胃中键,1绣)茎宿因主胁细多胞壁甲痛基拦化献酶承,收将品染继色茄体偷D会N猾A紫和节噬泉菌宫体贿D校N私A特娱异斤性石保淡护腰.2够)喉封拒闭虎自慌身甚所凶产杯生牵的食核极酸科内摔切寺酶晕的嘉识件别雄位间点雅。饼-浇-肌-巧-见-腐-沸(危修咽饰站)3冶.文当喇外尽来砖D持N劲A喊入催侵伙时铺,蜡遭鼻到河宿们主童限担制卸性读内改切谷酶份的坑特勉异脖降盆解-忧-皆-瞒-出-超-唱-洗-泊-樱-此(暮限历制导)4待.委由浩于编降夺解硬不梨完瓦全娇,陆外托来溪少估数嫌D禁N屑A档分之子舌在美宿柏主梳细慈胞什中沈繁跪殖概过堤程在中鬼被瞧宿霸主天细蠢胞陡的催甲胆基摆化拖酶尸修睛饰辛,树虽茅然听是维外小来早却庙不备被挂降该解孕。5观.盐但仰丧糟失深在丽原恩宿本主称细怠胞条中型的狼存匀活船能喊力道,垦因朗为站接芒受精了醉新饺宿昆主裕菌撇甲汤基勇化壮修贸饰可的财同绣时傻丧典失抛了房诚原免宿腹主序菌验修旨饰槐的醉标岛记令(蜘一刮但温入竟-典K任噬盲菌伯体役在借B烤株衰成慎功垃,衫由怨B挎株分繁纤殖汗出震入华-牧K荷后房诚代疗,搜能帜感挪染斑B白株骄,由不悼能蹈感堡染偏原封来乔K璃株搏.询)6瓣.挡细抖菌组利嫌用事限闷制占和涌修墨饰巡寿系袍统谅来吉区咱分六自谣身奶D勒N足A陷与筋外篇来您D疗N背A址。迟C般株会不静能管产招生洽限动制雨性宁内相切嫁酶练,杠其搏它密来故源拆入断-互噬肆菌谎体搏可查以束感宵染糟C析株决,蚂而皇在朱C赴株朴繁壁殖茧入适-匀噬床菌雨体列则工在师K撞株鱼和红B低株卫受奥到刊严独格闸的浓限型制呢作扁用三勉.筑限此制猪性吐内旁切帐酶县的贫分遍类底:犹(屈三稻大菜类担)I迟.遥I惯类啄,诱I飘I做类哥,太I乡丰I围I油类才.2宴.辜I赠类惹,终I辫I盟I争类离为根限布制拆-沾-截-产修皇饰串酶枝。限贩制状性蜡内泡切刊活玩性损和钟甲盯基它化寇活铲性网,沾都库作斧为边亚蓬基作的得功焰能乖单仁位霉包谊含班在洞同茂一姨酶映分盯子矿中衔。3悔.巾I刻I巨类床限蛛制穿性北内燃切稻酶打与木甲纵基绘化用酶铅是梅分滴离所的雹,胞切符割固位电点带专躬一蛙,逢适览合票于匪D垮N成A刺重秃组尘。四御.购原杠核露细较胞蓄中袍限炉制省和厨修游饰嫩系武统四场.森原糖核然细震胞齿中浮限沾制丹和演修嗓饰蜻系愤统I链类宜酶拆I铜I份类茎酶袖I示I节I速类雁酶酶崇分乞子喝三灭亚胖基度双或功赖能宽内敞切阳酶扰与坝甲好基浮化衡酶新分柱离无二值亚敏基棕双掉能识街别亩位等点轿二辣分圾非舞对终称的序渔列沃4娘-霉6恰b丝式p敞序斧列耳,统回源文扭结里构猴5斜-棒7探b年p浅非租对腐称物序书列切绵割阴位哄点猪距吃识聪别扬位害点登1惰0旨0辆0携b宇p胶在杆识朝别顽位屿点世中判或床靠所识铁别述位妈点晚在崇识越别垒位赶点下可游枝2睛4饥-栗2卫6忽b吵p限喘制懂性偶反箩应浮互胜斥歼分稍开刊反肌应糕同范时栋竟产争与拍甲亮基总化财反森应限耀制眯作匹用葛需这要膨A门T容P询需遮要适需境要京不孤需敢要五旬.艘I茅类只酶阿,潜I证I过I绸类伴酶膜限皮制卖-货修暂饰乞酶颜基死本克特身怔1绕)孤I携类退酶挣,投E旧c班o齿K消,米E棚c痰o份B皇。(愧1鲁)医异烟源油多喂聚玻体铅,丈亚绳基疫R桥.鹅M轻.修S准分死别遗具瞒有粗限狱制边,扇修般饰宵酶糕的趣作围用回,质特晋异忆性尤位惨点宴识逮别碧活秆性纵。(桃2励)葬I况类滔酶搏与瘦D桌N局A舍识锯别惰位伪点辩结描合邮依漂赖旅亚刮基鹊M叼与惰辅侦助纽奉因亮子着S馋—愿腺弊苷狐甲炸硫督氨捆酸煮(暗S备A沫M字)流相巡寿互雾作曲用妹。(熄3艰)科S交—搬腺削苷亭甲浓硫轿氨传酸湿(藏S渴A则M浇)痛通木过珍变郊构茎作跟用绪使读酶料处宋于抛活渐性喝状师态取,扛酶醋与器D骑N誉A抵识段别鞠位页点省结数合荐后奶,滴根描据惊甲黎基敬化挨状锣态家发铲挥化相遇应烟酶庆的绸活强性鼠,疾或鸽限犁制剂,坐或毛限罩修丸饰灭,邮或坛不枝限什制阿不稳限玻修线饰2恩)膀I尼I裤I您类扮限犁制除修门饰若酶桨基线本险特座怔(垂1饲)雷亚悬基勿R响,阻M火S收亚闪基浪组队成贴。梦M衰S读亚催基摊具盛有格识缩慧别钟和嫁甲毫基退化斧修仿饰扇双斧重宾作盐用摘.(狗2垂)捡修湾饰酬与逮限电制拜取现决农于分两沫亚君基惜之圈间害的霞竟她争滴。(骡3奴)佛切专割催位墨点歇无语特穿异徒性坑,纤只脑与纪识该别哈位虎点素的简距犬离别有狗关M图b酿o姻I上I瘦识电别请5费’竞-劲A设A咬G典A沉-仍3蹈’切仆割休位怖点疼5推’骡-坝G扔A港A俭G楼A摄N加N饿N照N效N潮N弃N锻N安/居N坝-厚3究’3咱’助-猴C营T执T努C挣T逆N蛾N脖N伶N左N机N响N厨/尿N站N迅-态5驴’3滩)遇I耀I治类证限胡制井修毙饰述酶访基锐本签特盐怔(内1也)命田名收规熔则柜:生泄物啦体追属贤名朱的捎第陡一领大搅写雾字之母健和汤种础名期前企两摄个俩小索写登构丛成狡基狭本摄名塔称基痰本防名烛称校+填菌宜株锯名迷的望字破母炮+烛罗单马轨字搏母成(询发宪现吉顺踪蝶序慈)H盛i乖d赔I辉I萝IH挠a纯e挨m协o窑p赶h赴i去l蕉u苏s席i甚n洞f燥u鲜e康n曾z光a伙e杰d脑株泄中张的碌第患三宴个担酶E丛c针o辛R姨I基腐因万位归于苗E孩s章c等h虫e眨r欺i先c略h做i艘a瓦c僵o膝l配i冤抗摆药寨性对R福质辨粒淡上E储c务o处R桐I细倒菌非属释名剂细写菌闸种镇名袖种重菌组株肆类溜型艳有统几财种爆限循制废酶(楼2坡)调特吨点A痕.斥识绸别敬序沸列舒–汽4粗,丽5艇或架6扬个而碱步基自对梨,E笑c胸o很R边I巩识既别放5细’唱-林G乘/哗A秃A喷T睛T愈C疏-糕3讨’亦序斑列3折’袋-询C舞T偿T雄A陶A邪/谈G赞-芬5芳’B蓄.沫1态8梯0股度谨旋貌转毒对已称册回羡文戏结漆构难,每对盼称恐轴米在取第保三饺,拢四猛碱嫩基档之示间斑。C拦.尘任骗何扰一而个描D周N查A界分碎子堆,配每乏9旧对铺碱预基凭出骆现驳一椅个亦I舒I臂类梢酶很切宗口社。(胸3启)孟切晚割指方滴式A饶.辛以浑酶楼切品特忘点极来等分同奋位父酶量:罢识唯别拾相功同仰序松列盒切死点隆不速同宰。同脉裂创酶辰:粘识低别超位慌点会相消同鼠,决酶抗的乏来抛源蜘不磨同谈。同斧尾争酶太:时识茅别携位翻点仰不级同诱,喘切注出绞片绑段婶有集相果同乏末严端优序想列品。B美.欲以甚切幕出叔片吉段溪末驱端团性剧质珍不妈同泼可柳分正,矛粘墙性吨末绪端词和导平邮末城端每。粘谅性掉末疗端泛:访(棚C辜o秒h胖e概s渔i散v膝e狡E眼n床d涝s存)罪两驶个申突精出竭末堡端阴可滥退圾火昏互絮补侄—存—D伪N怎A排是的分叛子雨重衰组放的躲基叨础限升制皇内框切唐酶说切笛出宵的琴三丢种严断樱口六.油甲膏基钢化寒酶斗的随基码本和特错征例:1紧)伙Ⅱ针类桐限锦制擦性努内忘切惭酶肺有访相咐应爆甲寸基裕化昌酶这伙拉伴樱,a望)牙限践制地性叮内无切似酶岸,液甲会基滩化劫酶矿的锄识衣别钻位却点沈相势同塌,宇序欠列欣内娃使歇碱说基串甲返基重化坡,班封待闭秋酶应切债口介。b脖)浙甲凝基经化树酶果封抹闭除一殃个孩限态制卸性锻内狗切鲜酶沉切叹口守同购时板产伞生欠另鬼一似种勾酶虑切欺口梁。c捞)鸦D见N稻A逼腺掉嘌营呤殃甲构基乡丰化霜酶睬D焦a椅r局nD炕N市A像胞晃嘧腾啶埋甲这基自化爸酶晒D改c注m七素.肠酶录切骗图跌谱煎示筐意绳图1宗。一妻圈早表图示惩一双种犹酶答。2坚.单衫切中口坟酶漂在菜里筛圈拜,榨越还多购切壳口蒸酶炸越技在险外钞面年。3旨.大遮写俭英姑文令字慕母季表矩示禽片欠段携(辰A怀,分B蚂,愈C衔…斧A拍>逆B已)优。4尤.两弹种丢片御段嫌同心样鸣大凯小可(者A和1炉A晴2生A翻3遵…庙E俗1爬E阴2念E添3论…阿)乞。户几神次甜实芝验文后治,区大仗小虹不匹一油致释以蚀虚友线陷表浇示乖不欺肯贺定劫。八元.粱D膝N摇A论切馒接援反织应况的珠影璃响页因矿素1码.限塑制眠性赠内嚼切衬酶悟的镇切带割按反昌应1件0乎-油5乖0膛m胆m愉o薄l摔/刻L寨T赔r催i辈s苹-医H舱C额l勿(救P养H鉴7旨.舌5努)联,1我0示m安m锈o跨l非/大L岩M很g盲C喷l洽2绿,1患m薯m瓶o局l开/灾L仇D鼻T贫T享(膝二榜硫避苏沟糖浸醇编)只受是阀盐防浓件度僵不沿同史,嗓分筑低漏盐泡,魂中侮盐射,糟高液盐泳组怠,1阵)跃需防两禾种甚酶牙切挣同渣一战分插子努,熟酶炕对既盐唉浓唐度券相诞同统,他可急同权时旧反傍应违。2世)狼需爬两蜂种勒酶佛切市同狠一蝇分刑子绸,屯酶薯对色盐洽浓暴度萌要亚求设差抗别散不裕大民,大中餐,甘高盐依,谨可射同球时驾反折应米。蜓利陪于汤酶屠较碎贵册重烧的墓盐阁浓叫度挪缓娃冲哪液低。3妹)简两断种位酶陕切死同系一穴分廉子燥,娇酶梯对谣盐赤浓懒度棉要充求敏差腐别穿大润,汉低扁,忍高扯盐埋,不玻可匀同摸时念反微应冤。a渡)英低涂盐迷组掉先蓄切长,聪加泄热申灭拿活包后队,肚补在加块盐祖浓塞度峰再海切泪。b开)娱沉氧淀梢后来重暂新救加傅入姿另伞一快种圆盐辞浓蝴度演缓姨冲够液c订)巩两解种惩酶服不叙能悠同款时著反铃应奇,橡有誓先麻有询后百。州图遇3睛-谅1巷62朗.爽酶贴量标抄准悼反骨应嚷3泥7垃度箱反盏应菠1禽小猎时你完刺全谅水筑解靠1荣微敬克古所亭需葛的垮酶午量昌。0闭.倦1—1播.刮0获微派克杨D疤N雄A盐5脂微箭升1旷0停倍恼缓山冲兽液芦2体微循升酶变1稀微希升悉(滩1似0劫倍程过音量刘)无金菌题水锐1搁2谅微葛升总动体井积滚2企0稠微此升酶美加扶入定量长不骗超刻过权总籍体涝积毕十像分磨之灶一氏.九宫.表酶摆切倾位薪点谷的倦确揉定l颗i车n变e社D宣N芦A彩W选=备N壮+鹿1皂c园c剪c毫D答N齿A倒W绘=傻N1破.片物段加大你小卵2均4震5泥0均l扬i挪n具e历D兴N帝A警W越=零N欢+费1森c回c愉c快D疼N辨A户W售=潮N2临.两蜜单泼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