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文档简介
1基因结构与表达分析的基本策略StrategyforStructureandExpressionAnalysesofGenes分子生物学系22分子生物学的三大核心技术DNA序列分析—DNA测序,1977聚合酶链式反应—DNA扩增,1985DNA重组技术—基因克隆,19733一、DNA序列分析二、核酸分子杂交三、聚合酶链式反应四、基因芯片和微阵列五、Western免疫印迹主要内容4(扯一周)双侄脱舞氧壮末疾端涉终补止没法(锣S坐a泉n弯g慌e毕r仓,还1恒9吸7待7羽)一残、D朱N葡A序另列喝分棒析(饲二宴)D配N牲A自筋动届化票序吉列懂分乡丰析(牲三秆)兄化参学勺降区解粮法(G时i勾l兴b猪e只r泊t,岭1著9限7陷7弓)5F香r爸e昆d圈e懂r凡i塘c因k碧S笼a墙n寸g摩e天r1命9闯1皱8~W节a峡l辩t葛e困r徒G姥i其l拘b君e昌r号t1哲9句3德2~T炸h乖e介N蚕o理b勺e乞l绿P险r叉i豪z茄e吗i弓n婆C买h忽e想m躺i挠s勒t病r率y耍1屈9弃8愿0P闸a仗u秆l栗B缘瑞e夫r设g1网9舌2慰6~6D页N访A测参序燥技线术酒基沫础谎:高其分义辨农率付变巨性派聚脾丙妄烯尊酰凉胺女凝叛胶步电币泳石(p似o崭l疾y育a查c罢r盼y捆l圣a显m放i傍d鸟e裙g卖e奴l皱e眨l虾e化c岸t却r锣o异p膛h为o顿r伸e容s朴i泊s邪,P予A煎G蹈E)谊技技术绢,唉可足分肚离差探别插仅1个椅碱淹基崖的麻单跌链洋寡劲核兽苷喷酸D炒N钢A片层段热。7(一升)径双楚脱饰氧寸末码端斤终棉止京法(d黎i仓d任e液o访x孟y伯c嘉h拔a姨i颠n幕t撕e现r生m醒i豪n屡a脆t灶i围o牛n)8A楚T享P、d呜A锤T秘P和d椒d鸭A扮T导P的候结骨构A期T熊PAO斩HO弄HHHd虎A匙T弃Pd盏d嫩A誉T篇PN惠T珠P主:核券苷跨三脚磷贡酸A蜓T屋P、G复T捐P、C播T悠P、U植T格P的辉合辩称曾;d漆N煌T每P趴:脱裹氧敬核促苷溜三载磷妹酸d愈A真T客P、d窗G慕T栏P、d舟C浓T滨P、d熟T驰T锄P;d楚d鹊N锯T痛P仔:码d谷d轰A仗T耕P、d膨d摸G窗T齐P、d反d毅C跨T像P、d仓d孟T五T筹P;9掺务入N个变核蛇苷粥酸D败N纷A合捉成延反痰应问模幸式夜图1堪0D拘N晨A单路链筒模城板引芹物掺尼入d晒d协N已T增P延雨伸欲的奔新与合沃成舰链末尘端桐终甘止1纱11态.双越脱凝氧师末顿端懒终同止仍法沿原齐理D坚N墨A合礼成铲反途应企中面,d篮d福N魔T停P不听存忆在3泳′驴-透O槽H末炸端,否故罚不宴能授与鞋下圣一用个钻核挡苷傻酸抄的5类′叛-磷涛酸膜基才团形紧成3港′,5挥′毯-磷纱酸脊二饼酯勒键损,绿导敢致D羞N劣A新要链绕的睡延歉伸昼提编前送终锁止答于d膀d场N浇T浑P。1订2d涝d察C等T马Pd棕d贡A误T父Pd讲d汇T疏T魄Pd检d璃G伙T蒸Pd饥C歼T汽Pd盆A待T简Pd淡T见T惭Pd资G蒸T跪PA备G畅C对T5′T471股1G揭A拥A庸T坚G棕A贷3′ACGCT1印32奖.虎D相N捆A测卷序谜主匙要免步庸骤1稼4A反应管G反应管G反应管T反应管C反应管T反应管1勉51盾6G环A滔T爸C1衣7●变拘性茅聚句丙拦烯书酰戒胺谦凝突胶蓄电朱泳●迷单脏链D短N摸A模撞板宅的色制虏备●D完N管A模害板湿与丙测孩序胁引暮物傍退湖火●纲掺盈入涛法府标谨记据反萄应●音延敏伸-终驼止虏反疗应●根放券射别自虹显伪影●涉阅赠读号测沙序何结橡果测窜序沃步搁骤1奴8(雅二剧)D球N贺A测狼序胃自抢动馋化及原绣理采花用4种德不宾同膏的饱荧鬼光旧分肺别克标女记4种d断d剃N政T命P终耗止斑反阴应丝式产脊物歌,卸替偿代饼放喝射跳性稍同搜位大素酸标驻记涝是惯实亮现D脸N耗A测碑序可自队动董化垦的扭基谅础链。1看9d就d休C裤T派Pd心d哲A充T垂Pd模d容T晌T品Pd附d陵G莲T粘Pd编C惹T省Pd聋A股T联Pd叼T涌T育Pd瞎G策T血P5′TGAATGA3′ACGCT2锻02肤1表飘示细一箭个S污N馆P位库点还,恨该组位省点欠出旦现沃了朴双关峰谦,恭对斗应耍的付核仰苷纱酸迅分喊别弄为C和T踩,因邮此乐该私位致点千为C叹T杂晒合剩型兽,炮如弯果芬该汗位齿点详只姨有拨一泪个竹峰C或填者T,您则指该斩位玩点鲁基绵因若型漏为C磁C或T颂T纯物合架型2抖2D为N尤A自贺动如测盛序割步买骤4种持不课同事荧榴光久染驰料奇标吊记括终型止页物d亦d头N殃T禾P她sS盈a腔n咽g允e常r测蜘序岩反讨应反骑应栗产洲物同修一泳朱道职电振泳蓝分涌离激龄光碍激神发结不梦同麦大碧小D膀N患A片周段携上衔的派荧侦光宴分疏子呀,贿发西射愚出海四深种湾不决同焰波才长览的睡荧抵光荧室光稍信减号良采型集告、息计翠算滥机宣分阵析歌与D仆N淹A自丸动合排膨序2蛮3D久y冈e逢l蓄a量b红e匀l录e跌d醋d吗i礼d异e华o估x训y版t两e气r私m驳i土n沉a峡t蚊o盛r夹s杠o福n击A踩B氏I眉3钞7优3熊0驼c该a牌p慕i迟l闯l拾a到r描i茅e絮s2丙4
与末端终止法不同,化学降解法是建立在对原有DNA的化学降解过程基础上。
(三)化学降解法2围5
将待测DNA片段3′或5′端进行同位素标记,标记的DNA片段分成五个反应,分别用不同的化学试剂处理,造成碱基特异性切割,使DNA片段分别于某一种(类)碱基处断裂。电泳分离5组DNA混合物,放射自显影检测末端标记的DNA链的电泳区带位置。化学降解法原理2狐6化歌学仪降畜解G反辅应惰模暴式纹图硫酸二甲酯哌啶M洗e照tM舌e假tM土e杏tM谱e畜t2纽奉7最盲新闪测切序缓技希术4屿5常4技吹术(R秧o匙c游h瞎e)焦晕磷男酸醉测则序悼(P烈y笛r浆o骗s武e偶q畅u票e右n筐c阴i脾n配g)S娃o存l迁e矮x恒a测陵序振技封术(I爪l托l奏u飞m枝i钟n坐a)S罢O盘L虏i貌D技尺术(A促B欠I)连挑接渡法杏测森序2腥8举民例序:S抱o胁l森e票x犁a测造序H讲i术S祖e陷q显2嘴0忆0肃02稳9S稿o仗l如e甜x竹a测杨序窄:野在曲一考个帆反猾应仍中身同搅时淹加蹲入4种具核拒苷察的尼标顺签逝,列采仓用竭边漫合泳成公边失测划序霜(S懂B善S-s艳e您q歇u勒e纱n泛c妹i椅n贫g孟b员y州s高y籍n慨t秆h币e椒s荐i头s)凝。完枪成度人拉类艘基蚁因筒组杀草免图吵不碌同酒测泰序年仪椒的怕比趴较饺图3罩0二、核握酸躬分戴子戴杂富交(N湖u黑c篮l凡e露i稼c蕉A逼c谢i像d村H码y晚b锣r礼i躲d聋i托z满a仗t城i巩o莫n)(芹一栽)S靠o虫u全t盛h成e旷r鸽n印违迹侦杂话交臂:唱检削测D巩N缴A(我S怜o失u止t悼h烦e略r辜n壁b犹l穿o竹t相h材y饲b全r扫i键d啊i桐z贯a瞧t基i弯o守n墓)普S杠o黑u钥t准h桃e依r宰n扮E英M,归1灭9我7像5(孝二皆)N夜o惜r惜t提h鼠e咬r浪n印猾迹趋杂愁交研:龟检剑测R迟N妄A(肿N钓o楚r惠t权h娘e唐r息n坊b睁l狭o忧t咽h近y岔b蓝r基i佩d炉i驾z强a绿t穿i畜o富n垫)矮S盗t筝a祸r摄k能G凶R,1劣9精7那73室1核援酸型分凝子睬杂帖交扑原慈理标浪记岁的单隆链泉核鞋酸黑探件针与抄待流检歇测止的朽靶搏单隶链D纷N唇A或R蔑N懂A局但部铅互蔑补窄结施合窗形击成愈杂床交肃双欠链甘。应半用训:核挠酸顷靶D椅N极A或R趟N盗A序租列链的师定肥性议与格定盗量燥分较析么。3架23坊33鞋3印等迹什技某术利称用顽各袭种焦物赌理屿方玩法狐使最电闸泳滔胶尺中竞的座生节物挑大盏分挡子秤转榆移争到N催C等裙各掏种及膜蔽上火,宪使趴之般成使为门固眼相椅化设分倦子幅。这帆一巡寿技推术讽类肾似激于姑用哭吸走墨魄纸申吸屈收捎纸叹张置上厅的踪蝶墨简迹珍,条因旁此激称仗之翻为“b究l罩o穷t谋t命i雀n咳g”,译塞为碧印看迹浇技削术割。3伶43迟4探霞针侧技贪术用恶放胃射腐性方核汇素固、秩生伏物取素尖或概荧馅光纷染挪料秆标宴记额其挂末沿端课或现全壶链闸的挤已钢知女序苦列循的暑多芝聚农核耍苷希酸毅链喝被惹称触为“探冶针”。探率针时可幸以蹦与逆固动定遥在N咸C膜绑上毁的葵核喊苷臂酸动结满合蔑,阳判买断真是斤否宿有亏同乌源繁的家核赞酸注分股子怎存邮在伤。3环5S怪o柳u赴t公h神e里r吃n印阀迹题杂涝交架原串理将偿电耕泳鸽分串离跃的待泛测D睛N牛A片饲段乘结事合筒到誉一喇定距的谱固徐相花支垃持书物棚上种,牺然吵后辩与耽存宋在毅于尼液锋相奸中烈标壤记萝的基核福酸揭探掏针绿进窑行幻玉杂鞭交花的谊过渠程趋。(同一色)S何o籍u聪t枪h命e域r益n印迅迹火杂关交应排用须:D肚N剧A(号基规因翅组D再N舌A)探分挤子眉的蓄定栏性直或税定量遇分熟析丈。3岛61参.制炕备气基透因追组D页N警A2麦.用漏限族制野性泽内蕉切床核妥酸恩酶揪消脆化耽基咱因垂组D嫂N标A3领.琼尸脂滩糖可凝坚胶安电航泳汉分医离D汗N耽A酶霜切电片得段4越.凝牢胶邀预漂处床理(庙如击强皆碱放,D娘N柴A双导链副变蛇为销单蛋链荐)5快.敌S译o禾u拍t京h绒e坡r邀n印轮迹译转娘移6省.标竭记磨核渣酸房诚探针针锯、绘探鹊针隔与D殊N井A片偶段毯杂纲交7屠.杂呢交悉结悄果责显阳示S非o起u脚t赤h羡e害r叉n印刑迹诸杂畏交沾基秘本救过宁程3赌7S告o释u鄙t后h皮e庭r领n印葡迹红杂揉交授示剥意狮图3捉8将斗电康泳付分会离腥的待面测D零N辜A片母段准结持合级到坦一宋定洞的盈固骂相串支魔持方物纯上季,厉然肢后音与冤存乔在灭于眉液塞相闷中腊标阳记酬的劲核壳酸停探叉针婆进脏行骆杂壤交禾的叉过蹄程孔。3酱94乌0地云中胃海趴贫宗血杠的S泪o胁u匀t怕h泡e裂r路n亭b车l印o纽奉t基磨因辅诊掩断(1)项仅枕一啄条翻染视色旧体凝上巾的划一歌个α基抄因微缺容失揉或宫缺败陷蹄,茄则α链汇的匆合弯成坡部送分丸受火抑扶制眼,仔称赢为α填+地住贫蜂;(2)篇每眉条迎染扶色织体巡寿上护的2个α基首因旅均穗缺剥失朋或瞎缺停陷全,皆称体为α窑0地冷贫省;(装3澡)经α勒1、α夜2序际列治基位本五一弦致坝;杂基犹因预不偿同咏程尼度晌的螺缺骨失偷可量引绩起称不捷同谜类爽型峡的招地毛中熄海重贫拍血狼。α泛1α教2α站αα适α+α+α+α洋α0α+α0α0α04园1B吉a弹m轻H伶IB阁a西m龄H诵Iα2α1α21未0氧k翁b1悉4揭k仪bprobe地栽中废海锦贫肥血市的捧直返接栽基里因星诊胃断4毁2αα府/太α条α廊α震α爪/仪α拆-斜α潮α浅/睁-杀-醋α往-舱/挎-辽-刮-差-糊/福-尽-正矩常道缺1缺2缺3缺41沫4皂k插b1嘴0为k篮b4蜓3(级二纽奉)N摘o肆r已t碰h赞e土r听n印舱迹湾杂浊交(围N讯o帽r赵t趋h增e撞r嘉n独b蹄l贝o静t虑h脖y海b陷r送i唇d房诚i览z梅a凭t裕i坦o候n受)指虹将R先N伐A变缘瑞性脚及营电某泳弃分框离手后喉,位并粗转尖移猪到眼固杏相随支房诚持匪物坐上乳,咳用极杂味交遍反衔应扭来龟鉴馆定回其牛中持特剖定m顾R焦N蠢A分家子坚的番含铸量虾及后其秆大上小脱。用摸于m批R歇N音A进印行柳定控性凡和滩定场量而分蔽析奋。4烈4R筑N详A琼灵脂帜糖牛凝处胶扣电首泳3kb0.4kbNt36382604623N词o没r宅t捡h挡e简r颂n披b圣l图o谱t芝h科y每b有r炒i陵d萝i材z弱a灵t跃i拖o看n28S18S应戚用五举厨例4大5GAPDH0d2d4d6d8dN要o蛙r乞t际h指e饿r负n粥b聚l咳o诸t杂蜜交永分贩析m环R甩N县A的短表良达靶m孩R遇N敬A3剑-磷效酸冰甘尿油右醛各脱威氢券酶4股64竿6三史、喜其花他秋杂比交得技抖术1丽.斑症点解杂旱交(治d孟o兔t棕b约l显o炒t稠h班y总b楼r佛i主d拜i富z犁a啊t虏i绘o核n)将R蹲N对A或D狱N喘A变扫性救后盲直秤接姓点碍样蕉于远硝新酸锅纤糠维广素瘦膜异或选尼省龙来膜岂上掘,男用狭于欧基贷因仪组西中陈特涉定东基康因查及蹦其骑表锻达恳的轻定备性迷及善定收量占研熊究阴。4布74象72朵.原逆位币杂静交悉(i学n舟s掌i柜t火uh热y抹b扬r镰i砌d役i棚z慌a捧t大i封o苦n)用烫标删记蛋的猪核送酸弟探脆针择与圣组范织笑切究片犁或初细申胞蜓中摧的赴待送测黄核培酸蛾互呈补怀序爹列转杂槐交侧,晌可咸对边核仁酸圾进真行胶定绵性围、氏定零位摄和畅相绢对桐定渠量抖分占析单。4也83.娇核泽酸泰酶S引1保木护汽分略析棵法(筹n狐u妹c薄l杨e矿a枣s狼e终S外1差p魔r稿o撞t纺e矛c蚕t雕i福o勇n些a论s亩s掌a揭y)单戏链D牲N晓A探党针与忙待隆测R量N泄A形饶成D描N悼A外/不R云N均A杂槐交煮双乳链俭,达加刘入欠核桃酸建酶S示1专乒一北性鼻地悲降孝解快未把形肥成神杂损交勿体挡的D旋N勒A或R够N勉A单验链框,D滨N树A锁/键R返N菠A杂罪交界双腥链队则剥受主到虏保闪护讨而全不蛋被难降蔑解拉。4浊94.R绝N脊A酶贿保烧护制分浙析肢法(R虑N额a元s谈e过p宏r浮o拒t佳e伴c姻t蛾i穷o修n每a微s骄s佛a础y,R收P盆A)5柿0R贼P披A基膜本困程父序屿:●待习测R玻N接A的党分批离●体绵外伟转柿录北标贡记R负N猜A探际针●待责测R截N锻A与脾探窝针R队N母A进蒜行呢液绑相枣杂肢交●R梳N掏A酶树消续化●不射同庆大隔小留杂受交嘱片鸣段条凝地胶裹电狡泳侧分名离5洒1三疼、缩慧聚刻合斑酶营链坊式晌反候应(现P牌o凝l谈y抄m殖e兵r医a馒s答e暴C课h何a惧i妥n属R差e争a疲c佩t仔i营o闻n务,庄P验C粘R晒)(悟一扰)P姐C驾R技拔术流原但理(斧二控)争耐拔热D财N辨A聚敢合翠酶(傻三然)P患C役R引昏物较及辛设应计孟原功则(匪四滤)P笔C唇R条机件尤的牺优炎化(捧五信)P悉C血R改江进报技膀术(矩六鞭)锅其桨它P荷C扶R技溜术5赴2聚检合赠酶敏链赢式撒反披应(款P术C略R闭)愚:(单一截)P柄C拒R技莫术循原锣理
Mullis
K.
1985年发明的一种模拟天然DNA复制过程的核酸体外扩增技术。
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