双脱氧末端终止测序法原理-过程和目标基因cDNA序列拼接和分析

双脱氧末端终止测序法原理过程和目标基因cDNA序列拼接和分析41、俯仰终宇宙，不乐复何如。42、夏日长抱饥，寒夜无被眠。43、不戚戚于贫贱，不汲汲于富贵。44、欲言无予和，挥杯劝孤影。45、盛年不重来，一日难再晨。及时当勉励，岁月不待人。双脱氧末端终止测序法原理过程和目标基因cDNA序列拼接和分析双脱氧末端终止测序法原理过程和目标基因cDNA序列拼接和分析41、俯仰终宇宙，不乐复何如。42、夏日长抱饥，寒夜无被眠。43、不戚戚于贫贱，不汲汲于富贵。44、欲言无予和，挥杯劝孤影。45、盛年不重来，一日难再晨。及时当勉励，岁月不待人。分子生物学实验双脱氧末端终止法测序的原理、过程和目标基因序列的分析教师:程琳2011年11月实验目的1、通过本实验了解双脱氧链终止法的基本原理,掌握DNA测序的基本方法;2、学会序列查询、核酸及蛋白质的同源性搜索和比对。听说读写训练的最高境界是写作，写作是一个人所思所识所见的综合体现。透过一篇文章，我们或许未必能全观一个人的思想智慧，但是它好过“以貌取人”的方面总是显而易见的。就像塞万提斯所说：“笔乃心灵之舌。”作者的视野、识见、思维或情操，透过文章总可略见一斑，形成一个初步定位。这也正是我国封建社会千百年来以一篇文章定终身的考试制度的根源所在。“十年寒窗无人晓，一朝成名天下知”，一篇文章中有十年苦读的功夫。虽当今社会取才之方式更为多元化，已不再是一篇文章定终身，但高中生的作文教学依然有着不可取代的地位。就功利的角度讲，它依然占据着高考语文的半壁江山；就人文的角度讲，更是不可限量。正是因为写作是综合能力的体现，非一朝一夕之功，而文学天才又不是人人都可以挥毫泼墨、倚马可待，只能令我们羡慕有余，心有戚戚焉。英国“悖论王子”切斯特顿说：“文学只是一种奢侈。”我们农村高中的作文教学现在陷入一种困境：古人云：“读书破万卷，下笔如有神。”但目前农村高中学生阅读量有限，有的甚至几乎没有课外阅读量。态度上，学生厌倦写作；能力上，学生写作水平踯躅不前，不见提升。教师似乎也束手无策，只好“顾左右而言他”，作文教学成了疑难杂症，陷入山重水复疑无路之境。其实，作为一个痼疾，农村高中作文教学积重并非难返，突破在于“恒”和“变”上，恒定地坚持某些理念，适当地改变一些形式。重视学生的阅读是一个方面。我们不难发现学生的阅读与写作之间的关系，学生的经验来自于他的直接经验和间接经验，除非他的直接经验足够多，感性经验极为丰富，理性认识极为深刻。我所教的班级中，稍好的作文分为两类，一类是文采好、语感强、信马由缰的；一类是格局工整、行文稳健，言必谈“苏轼”“李清照”，喜欢写历史文化大散文的。调查得知，前者往往有课外阅读的爱好，但曾经得到的阅读指导较为薄弱；后者往往没有自己的课外阅读设置，故写作难能有自己的真情实感、真知灼见，只能中规中矩，稳妥有余，不见光彩。还有一类学生，读了些书，但在写作文时，感觉完全用不到，提笔容易落笔难。这类学生一则由于快餐阅读，没有内化为自己的东西，一则由于看得太少，没有上升到一定的知识储备或形成语感。还有一部分学生，课外阅读量几乎为零，喜欢写“现代版雷锋式作文”，题材老套陈旧，甚至连写作篇幅都难以充实起来，这类学生是“零阅读”。我们在读书的时候都对一本或几本书痴迷过，对于大部分不爱阅读的学生应注意引导他们触碰到自己的阅读兴奋点，做科学的推荐，做好他们的启蒙老师。对于已经爱上阅读的学生，大可放手给他们空间，并要推波助澜，培养他们的定力，引导他们博览、内化，形成广度阅读和深度阅读。钱钟书先生进入清华读书时曾立下志愿：要横扫清华图书馆。他的夫人杨绛先生在《我们仨》中回忆，钱钟书几乎所有假期的时间都用来读书，以至于在清华4年，连玉泉山、八大处都没有去过。钱钟书入清华创造了一次又一次纪录：读书数量第一，发表文章第一，口出狂言第一……阅读对写作的影响是一个循序渐进、水到渠成的过程，也是一个毫不刻意的过程。学生的阅读速度也是一个渐进的过程，我们会发现学生的阅读量达到一定程度时，他的阅读速度可以达到一般学生的几倍以上。阅读与写作之间其实就是一个治学三境界的过程，坚持阅读，“蓦然回首，那人却在灯火阑珊处”的境界自会不期而至。培养学生热爱生活的情感，保有一颗热诚的敏感的心。诗人艾青说过：“为什么我的眼里常含泪水，因为我对这土地爱得深沉。”文人往往是有诗性的，诗性是情操和智慧的结晶，诗人的语言往往是多经锤炼的，诗意和爱，能创造一切激情。伟大的教育家陶行知是一位热爱生活、充满生活激情的诗人，陶行知善于用诗的眼光把世界看成诗的世界，以带有诗意的言行，将他的生命、事业诗化，陶行知的诗情源于他富有激情的教育生活和对美好教育生活的无限追求。学生的情感倾向可以有愉悦和伤感之别，但是一定要保有一颗赤诚的诗情的赤子之心。青春年少，往往是张扬的，情感丰盈的，敢说敢做，敢爱敢恨的，这种品格是一种天性，也需要保护、及时地捕捉及引导。同样的一个孩子，在不同的环境中，他可以是一个思维保持活跃的人，也可以成为一个麻木无感的人。麻木无感可以直接摧毁创造力。作文随笔化，随笔生活化。学生的随笔往往比作文写得好，一方面因为随笔更多的是有感而发，写的往往是肺腑之言，情更真感更实；还有一方面，便是随笔的随意化，学生卸去了心理重压，没有包袱，当然能写得更自如些。随笔的“随”，除了随意，还有随时，更易于捕捉刹那灵感。灵感是写作的最佳状态，可以遇之却不可以求之，因此，教师要给学生创造轻松的写作环境。随笔是有效构建写作和生活之间衔接的桥梁。要写好随笔，就要培养学生的生活意识。写作源于生活。学生对生活的敏感，并非是一种无意识，而一旦形成，便极为珍贵。曾经教过一个女生，成绩优异，写作视野广，且具有极强的思辨能力，她的弟弟也是如此，他们从小便被严母定下一条规矩，每次从外面回来，一定要谈谈自己在外面的所见所思所感，多年不曾间断，久而久之，便形成了一种习惯和本能，外部世界时时在她的视野和思维之中。学生的随笔要用心写。其随意当是较之于严格的定时定点定内容定篇幅的写作，形式上的自由化，而并非随便写写、草草了事。心不动则笔不动，写一句也当有一句话的匠心。学生的随笔要坚持写。动笔是一种习惯，由最初的三五句，片纸只字也无妨，慢慢来，笔耕不辍，坚持下去自当文江学海、斐然成章。随笔生活化，能够训练学生敏锐的捕捉能力和对写作的敏感能力，作文随笔化，也是有效地构建作文和生活、写作主体的衔接，是使写作有意义的手段。这一环节的实施中，王栋生先生的改革使我获益匪浅，那就是：打破每周一次的作文格局。各位有时间可以拜读《王栋生作文教学笔记》。作文教学既是攻坚之战，突围便非彗汜画涂、易如拾芥。结合自己的作文教学实践，在坚持与变通上，以上几点体会于己较为深刻：一则阅读，二则诗情，三则改辙思变。且行且得！相信每位高中英语老师都有这样的亲身体会：自己刚刚接手的高一新生在初中阶段英语成绩非常好，英语学习的兴趣也非常浓厚，可是这些学生在升入高中之后，英语成绩却突然直线下降，更别提那些原本基础就不好的学生，应付英语的学习更是颇为吃力，从而陷入了初、高中英语学习衔接困境。通过调查发现，就主观方面来看，学生在结束初中阶段的学习进入高中后，在学习态度，学习兴趣，学习动机上都存在着一些不足之处，从而导致了学生在高中的英语学习上存在着一定的困难；就客观因素来说，高中教师在高一的英语教学中，缺乏必要的衔接意识，欠缺做好衔接工作的知识和技能指导，当学生在进入高一阶段出现衔接困难的时候没有采取正确的措施，在客观上进一步导致了学生的初、高中英语衔接学习的困难。本文仅就高中英语教师在高一学生初、高中英语学习衔接困境方面所形成的教学行为因素和改进措施，谈谈自己的看法。首先，高一英语教师的高考意识强化了高一学生对英语学习兴趣的逆向增长。相信每一个初中孩子从小学开始就被培养学习英语的热情，明白学习英语的重要性，事实也如此，小学、初中的孩子大部分都能将英语学得顶呱呱，但是随着学段的升高，学生学习英语越来越从一种兴趣爱好发展为学习任务，使得他们在学校学英语不是为了满足自己求知的欲望，更多的则是为了完成学习任务，取得更高的分数。等他们进入高一，这种功利化的倾向更加严重。而高一英语教师大部分是从高三毕业班循环下来的老师，我们从高三的应试状态突然“硬着陆”到高一的初始状态，需要很长一段时间的心理状态调整，但在这段时间内，受高考指挥棒的“前摄干扰”效应，我们对高一学生的要求是相当苛刻的，使得高一英语的教学起点偏高，搞得学生“亚历山大”，使我们失去了对英语原本仅存的一点点热情。针对这种情况，高一英语教师应该尽快从高三的备考状态调整过来，从高一新学期一开始就要以崭新的心态帮助学生规划好他们的英语学习生涯。要注意给学生一定的缓冲时间或者过渡期，让学生能自主的慢慢进入角色，熟悉高中英语的教材和教师的教学方式，结合学生的实际学习情况，同时还要精挑细选，尽量与现行的教材相辅相成，用好教材，而不是一味以高考为基准，盲目拔高。其次，高一英语教师对初中英语教材体系的盲目无知，导致英语知识点教学的遗漏或重复。再加上高中教师和初中教师之间能相互交流的机会很少，高中教师基本不了解初中英语的教法和课堂，由于存在着一种懒惰及事不关己的心理，我们也懒得去了解和钻研。因此，对于学生在课堂上显示出来的衔接困难，大多数老师都选择视而不见，认为完成自己高中学段的教学任务，搞好自己的教学就好了。但是这势必在学情的掌握和教材的把握方面，使自己陷入了被动局面，进一步导致了学生在初、高中英语学习衔接的困难。针对这种情况，高一英语教师要克服高中繁重教学任务的不利因素，争取时间尽快熟悉初中新课标和新教材，对初、高中英语教材体系做一番贯通性的把握和研究，了解初中学生的英语学习水平以及知识掌握的牢固情况，从而找好初高中英语教学的衔接点，做到有的放矢、胸有成竹，既不会产生教学时间上的浪费，也不会遗漏知识点的讲解。同时，高中英语教师还应该深入初中英语课堂，主动与初中教师进行交流、沟通与合作。教育行政部门也应该适当地安排高中老师到初中年级和初中英语教师互相听课，评课，积极地提供一个大家可以互相交流和互相合作的平台，以便为教师的合理衔接提供科学的指导。再次，高一英语教师容易忽视高一学生学习心理发展状况，对于学生初、高中英语衔接的困境缺乏相应的心理干预措施。高一的学生，尤其是刚刚步入高中学校的新生，其学习心理状况仍然处在好动、感性的状态，他们渴望依赖兴趣去学习，他们喜欢在活动中去学习，他们不喜欢枯燥乏味的课堂讲授和浩瀚无边的题海战术。而我们的高一英语课堂相比较初中英语课堂，要做的改变显然是非常必要的。我们在改变老旧的教学观念，死板的教学方式，沉闷的教学氛围的同时，针对语言学习的特点，尤其是英语学习的特点，要适当展开一些必要的活动课程。英文歌曲的学唱，英语影视作品欣赏，英语演讲比赛，英语话剧比赛，诗歌朗诵，外语角，英语书法大赛形式多样的英语课外活动能从很多方面锻炼学生的英语能力，实现在英语课堂上想象不到的效果。另外，要在课堂课下建立平等和谐的师生关系，遵循学生的身心发展规律，挖掘学生的潜在能量，关注学生独特的个性，尊重学生、理解学生，相信学生，在课堂上大胆的放手让学生自主学习。加强心理调适和人文关爱，让学生在高中起始阶段，尽量缩短高中英语教学的高原区效应的适应过程。总而言之，作为一线的高中英语教师，我们要在实际的英语教学活动中积极探索，不断总结，努力减轻学生初、高中衔接阶段的学习不适感，帮助学生在思想上和学习上实现平稳地过渡，在英语的学习上取得巨大的进步。【分子生物学实验双脱氧末端终止法测序的原理、过程和目标基因序列的分析教师:程琳2011年11月实验目的1、通过本实验了解双脱氧链终止法的基本原理,掌握DNA测序的基本方法;2、学会序列查询、核酸及蛋白质的同源性搜索和比对。、DNA测序的方法DNA测序技术主要有两种方法,都是在20世纪70年代中期发明的。A.双脱氧链终止法(thechainterminationmethod),是通过合成与单链DNA互补的多核苷酸链来读取待测DNA分子的顺序。化学降解法(chemicaldegradationmethod)是将双链DNA分子用化学试剂处理,产生切口,用同位素标记进行测序。dNTPA.C,G或T基本原理诚基√聚丙烯酰胺凝胶电泳可以HO-P-0-P-0-P-0-CH2/O区分长度只差一个核苷酸的DNA分子√利用DNA聚合酶不能够区分dNTP和ddNTP的特性,ddNTPAC使ddNtP参入到寡核苷酸链的3-末端。因为ddNTP3不H0-P-0-P-0-P-0-CH2∠0是OH,不能与下一个核苷酸聚合延伸,从而终止DNA链的增长模板TAGCAACT引物ATCGTTGA荧光标记」引物延长和合成阳断双脱dATPdATPdATPdATP+ddATPdGTP+ddGTP氧ddTTpdCTP+ddCTPdCTP法dTTPTTPdTTP原-ATCGTddTaddsATCGTTddGATCGTTGddA理ATCGddT-ATCddGddAAddT示意长排列图ATCGTTGddATddGAAA自造接雷AddT2、具体操作:测序时分成四个反应,每个反应除上述成分外分别加入23-双脱氧的A,C,G,T核苷三磷酸(称为ddaTp,dCTP,ddgtp,ddTtp),然后进行聚合反应。在第一个反应中,ddaTP会随机地代替dATP参加反应,一旦dATP加入了新合成的DNA链,由于其第3位的OH变成了H,所以不能继续延伸,于是第一个反应中所产生的DNA链都是到A就终止了同理第二个反应产生的都是以C结尾的;第三个反应的都以G结尾,第四个反应的都以T结尾,电泳后就可以读出序列了假如有一个DNA,互补序列是GATCCGAT,我们试着做一下:在第一个反应中由于含有dNTP+ddatP,所以遇到G,T,C三个碱基时没什么问题,但遇到A时,掺入的可能是dATP或