植物油脂中苯并(a)芘的测定

植物油脂中苯并（a）芘的测定-高效液相色谱法本方法参考国标方法：动植物油脂苯并（a）芘的测定反相高效液相色谱法，GBT22509-2008；该国标源自ISO15302:2007，MOD方法。相关技术差异为：对仪器设备作了改动；氧化铝柱采用天津博纳艾杰尔科技有限公司的商品氧化铝固相萃取柱；将洗脱溶剂改为采用重蒸后的石油醚；待测液定容体积改为300pL,采用仪器自动进样，进样量为20pL；采用外标法定量计算。方法内容：1．适用范围本方法适用于动植物油脂中苯并（a）芘的检测。本方法的最低检出限为0.3-0.5pg/Kg，该最低检出限为对应所使用的仪器的检出限，因此仪器荧光检测器的灵敏度对应检出限。2．方法原理样品经石油醚溶解，通过商品氧化铝固相萃取柱（活度为W级，粒径大小为100-200目）吸附脂肪酸等，用石油醚洗脱苯并（a）芘，采用反相高效液相色谱法分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，采用峰面积外标法定量。3．试剂与材料3.1色谱纯正己烷；石油醚，每升加4g氢氧化钾重蒸；3.2氧化铝固相萃取柱：100-200目，brockmann活度W级，在室温下避光保存，天津博纳艾杰尔科技有限公司；3.3苯并（a）芘标准储备液：称取10mg标准品于10ml容量瓶中，用正己烷定容，配制的标准储备液浓度为1000mg/L；3.4标准工作液：用正己烷稀释标准储备液，稀释的浓度为10pg/L。4．仪器和设备旋转蒸发仪，大于150ml的圆底旋蒸瓶或鸡心瓶，勿用平底旋蒸瓶；氮吹仪；4.3涡旋混合器；QL-866江苏海门产；2ml色谱瓶；250pL色谱瓶玻璃内插管；高效液相色谱仪，配自动进样器，荧光检测器。5．样品前处理5.1样品净化称取约0.300g的油样，用5ml石油醚溶解涡旋混合器上充分混匀。首先采用约30ml石油醚将氧化铝柱预先活化，活化的程度：按氧化铝柱末端正己烷自然滴下约5ml，滴出的过程要不断添加石油醚，千万注意不能让正己烷低于柱子的上筛板，这样会使空气进入柱子导致结果不准确！将5ml滴出的石油醚去除。将溶解好的油样添加到预活化好的氧化铝柱子中开始上样，不断添加石油醚约80ml用150ml的旋蒸瓶接收，直到80ml的石油醚完全自然滴出。上述过程不允许加压或抽真空加快流速，只能让其自然洗脱。将收集的洗脱液在45°C水浴中旋转蒸发至干；用10ml的石油醚分三次淋洗旋蒸瓶，合并10ml的石油醚到氮吹管中，用氮气吹干，如果还有油存在而导致无法吹干，则说明氧化铝柱不合格，需要进行二次净化；添加300pL的正己烷到氮吹管中，用涡旋混合器充分混匀；氮吹过程避免气流过大溅出；涡旋过程避免正己烷蒸发。将上述300pL的正己烷转移至色谱瓶内插管中，进样分析。色谱条件色谱柱：SB-C18，250mmx4.6mmx5.0pm；或多环芳烃专用柱：PAH250mmx4.6mmx5.0pm；流动相为乙腈：水88%：12%；流速为1.0ml/min；进样量为20pL；荧光检测器：发射波长406nm，激发波长384nm。标准曲线绘制将标准工作液稀释到浓度分别为：0.5，1.0，2.0，3.5，5.0，7.5，10.0pg/L，根据峰面积建立标准曲线。根据实际油样可以将标准曲线延伸到50pg/L。6.样品分析将5.1的样品进样分析，采用外标法定量。7．测试结果的表示苯并（a）芘含量按下式计算：mcwX=其中:w为样品中苯并（a）芘含量，单位为pg/Kg；c为从标准曲线得到的待测液中苯并（a）芘的浓度，单位为pg/L；V为待测液体积，单位为pL,本方法为300pL；m为称取的样品质量，单位为g，本方法要求不能超过0.3100g；8•采用本方法的所得到的图谱£I?卅nI/82610mli!\ii|128&127£I?卅nI/82610mli!\ii|128&127&FLD1A.Ex=364.Em=406(BAP'.W10^702.0)Noim1265图10.5pg/L苯并（a）芘的标准样品的色谱图FLD1A:Ex=384.Em=406i：BAP\10W^702D：