缺血修饰白蛋白测

缺血修饰(xiūshì)白蛋白测定试剂的基本知识第一页，共四十一页。整理课件必须(bìxū)理解的基础知识缺血修饰(xiūshì)白蛋白测定试剂盒组成及使用；什么是缺血修饰白蛋白；什么是白蛋白-钴结合试验；白蛋白-钴结合试验与缺血修饰白蛋白的内在联系；缺血修饰白蛋白与心肌缺血的内在联系以及心肌缺血与急性冠状动脉综合征的相互关系；第二页，共四十一页。整理课件缺血修饰(xiūshì)白蛋白测定试剂盒缺血修饰白蛋白测定试剂是用于急性心肌缺血辅助诊断的体外诊断试剂，能够在各种全自动、半自动生化分析仪上使用(shǐyòng)，为液体双试剂，由长沙颐康科技开发有限公司生产；缺血修饰白蛋白的英文：IschemiaModifierdAlbumin,简称IMA；液体双试剂的组成：R1：Co2+、缓冲液、稳定剂等R2：DTT、缓冲液、稳定剂等第三页，共四十一页。整理课件缺血修饰(xiūshì)白蛋白（IMA）的概念血清白蛋白（HSA）氨基末端序列为人类所特有,是过渡金属包括铜、钴和镍离子(lízǐ)主要的结合位点,组织缺血时释放的产物使循环血液中的部分HSA氨基末端结合位点改变,与金属离子(lízǐ)结合能力下降,这部分发生了改变的HSA就称为IMA。IMA在血液中浓度升高就提示发生了组织缺血。第四页，共四十一页。整理课件缺血修饰(xiūshì)白蛋白（IMA）的形成机制冠状动脉缺血时IMA产生的确切机制尚不清楚,各种观点尚有矛盾,但已定位在HSA氨基末端N-天门冬氨酸(Asp)-丙氨酸(Ala)-组氨酸(His)-赖氨酸(Lys)序列的变化上。当冠脉局部血液和氧供减少,组织细胞进行无氧代谢,代谢产物乳酸堆积,导致酸中毒,局部微环境pH值下降,致使Cu2+从循环蛋白的结合位点释放(shìfàng),在还原剂作用下转化为Cu1+,Cu1+与氧反应生成超氧自由基,后者岐化为过氧化氢(H2O2)和氧。H2O2可通过Fenton反应形成羟自由基,羟自由基损害HSA,使N基末段序列的2～4个氨基酸发生N乙酰化或缺失,转化为IMA。第五页，共四十一页。整理课件IMA的检测(jiǎncè)方法IMA测定方法：比色测定法IMA检测是以心肌缺血可引起HSA的N末端发生变化及其与Co(LL)结合迅速减少为前提,采用白蛋白-钴结合实验测定白蛋白与外源性Co(LL)结合的能力间接测定IMA含量，所以叫白蛋白结合钴试验（ACB试验），ACB试验已通过了美国国家药品和食品管理局认证，这是FDA自1994年批准肌钙蛋白的测定试验之后，首次批准的一个用来评价心肌缺血的生化试验项目。试剂盒全世界目前有两个生产厂家：美国局部缺血技术公司（IschemiaTechnoiogies,Denver,Colorado,USA）长沙(chánɡshā)颐康科技有限公司第六页，共四十一页。整理课件IMA的检测(jiǎncè)原理

正常白蛋白以活性形式存在,加入钴试剂后,Co2+与白蛋白N-末端结合,溶液中存在的游离Co2+浓度较低;而心肌缺血患者血清标本中含有较多的IMA,加入同等量的钴试剂后,由于IMA与Co2+的结合能力降低,溶液中存在较高浓度的游离Co2+,加入二巯基苏糖醇(DTT)试剂后可与游离Co2+产生络合反应,生成红褐色产物，在470nm处测定(cèdìng)吸光度大小,其吸光度与Co2+浓度成正比，吸光度高者表示血清中存在较多的IMA。与标准品进行比较，即可计算出样本中ACB的值。第七页，共四十一页。整理课件IMA检测标本(biāoběn)采集与处理

受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样;如果病人服用抗凝血药物，血液在30分钟内不能凝固，结果解释应慎重。血清应通过物理方法尽快与血细胞分离。推荐时间最长不要超过2小时;

静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺(chuāncì)成功后立即松开止血带。

标本处理：血样采集后，应在室温下凝集后离心分离血清，血清样本应不溶血。测试必须在血液提取后2.5小时内完成；如果测试不能在2.5小时内完成，必须立即在-20℃或更低温度下冷冻血清（分离凝块和红细胞），从血液提取到冷冻的时间应在1小时以内；解冻冻结的样品需在2～8℃或室温下进行，通过低速涡流混匀器或轻轻颠倒充分混合，测试必须在样品解冻后1.5小时内获得，不得含有EDTA、枸橼酸钠等鳌合剂的抗凝剂第八页，共四十一页。整理课件试剂(shìjì)与校准血清的稳定性

原包装(bāozhuāng)试剂储存在2～8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。试剂储存在18～22℃稳定28天，试剂应避免污染。试剂颜色为澄清透明液体，当试剂出现沉淀或絮状物时，按照试剂失效处理。校准血清在2～8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。第九页，共四十一页。整理课件IMA的特性(tèxìng)及应用心血管疾病是威胁人类健康与生命(shēngmìng)的头号杀手，它具有高发病率、高致残率、高死亡率及较高的治疗费用等特点。最近的流行病学资料显示，我国现有高血压患者达1.6亿，高血脂人数达1.6亿，约有400万心力衰竭病人，平均每12秒就有一人死于心血管疾病，心血管疾病已逐渐成为我国城乡居民的第一位死因。第十页，共四十一页。整理课件知识(zhīshi)的逻辑联系

心血管疾病是威胁人类健康与生命的头号杀手，它具有高发病率、高致残率、高死亡率及较高的治疗费用等特点，心血管疾病已逐渐成为我国城乡居民的第一位死因；

ACS是包括不稳定心绞痛（UA）、非ST段升高的心肌梗死（NSTEMI）和ST段升高的心肌梗死（STEMI）等一组连续进展的病症(bìngzhèng)，连续进展的特点是从心肌缺血到心肌损伤的发展，从可逆性改变向非可逆性改变的发展；

心肌缺血是ACS最常见的发病原因；

心肌缺血的早期诊断和干预能够及时阻断ACS的发展进程，对于降低AMI的发病率、致残率、死亡率具有重要的意义；

IMA是心肌缺血的早期标志物；

IMA检测试剂是检测血清IMA含量的检测试剂。

第十一页，共四十一页。整理课件急性(jíxìng)冠状动肪综合征（Acutecoronarysyndromes,ACS）ACS是指动肪粥样硬化斑点脱落、血小板聚集、血栓形成，致使冠状动肪狭窄、阻塞，引起心肌缺血和梗死的病理现象。从临床角度(jiǎodù)来看，它涵盖了一组连续进展的病症，包括不稳定心绞痛（UA），非ST段升高的心肌梗死（NSTEMI）和ST段升高的心肌梗死（STEMI）。心肌缺血是ACS最常见的发病原因。第十二页，共四十一页。整理课件急性(jíxìng)冠状动脉综合征(Acutecoronarysyndromes,ACS)

ACS诊断(zhěnduàn)通常是很困难的。在急诊有超过50%的以胸痛就诊的病人未收治入院是因为未能诊断(zhěnduàn)为ACS，致使延误治疗发展至心肌梗死。确诊为ACS的病人经早期治疗可以阻止心肌损害的进程。所以尽早明确诊断(zhěnduàn)和开始治疗对于患有ACS的病人是至关重要的。第十三页，共四十一页。整理课件ACS诊断(zhěnduàn)根据病史、症状(zhèngzhuàng)、体格检查、心电图、心肌标志物诊断患者是否ACS、有无心肌坏死或死亡的危险性，其中心电图和心肌损伤标志物已经被广泛使用。目前临床应用的心脏标志物大致可分为三类：一类是主要反映心脏组织损伤的标志物；第二类是了解心脏功能的标志物；第三类是作为心血管炎症疾病的标志物。

第十四页，共四十一页。整理课件目前常用的心肌(xīnjī)损伤标志物目前诊断ACS常用的生化标志物是肌钙蛋白(cTnI和cTnT)、肌红蛋(myoglobin)、肌酸激酶同工酶(CK-MB),尤其是cTnI和cTnT在诊断、危险(wēixiǎn)分层和治疗中具有非常重要的作用,但它们均在心肌组织坏死后释放入血才能测出。而评估ACS患者的心肌缺血往往需要在细胞死亡之前做出,以实现心肌损害可逆阶段的及时治疗第十五页，共四十一页。整理课件传统方法(fāngfǎ)检测心肌缺血的局限性心电图常首先用来评估(pínɡɡū)以胸部不适就诊的病人，但心梗的病人也可多表现为心电图未见异常，其灵敏度低于50%；第十六页，共四十一页。整理课件传统(chuántǒng)方法检测心肌缺血的局限性心肌(xīnjī)肌钙蛋白I(cTnI)或T(cTnT)具有高特异性,但其在心脏损伤发生6～12小时之后才能从血中检测出，且对心肌(xīnjī)细胞损伤的特异性高，对可逆的心肌(xīnjī)缺血多为阴性第十七页，共四十一页。整理课件肌钙蛋白三种亚型:TropI（TnI）、TropT（TnT）、TropC（TnC）TropI只特异心肌表达，不在骨骼肌表达发病(fābìng)后12h达高峰持续7~10天恢复正常，此阶段不用来检测再梗塞血浆TnI或TnT升高可诊断AMI肌钙蛋白轻度增高可见：UA，CAD和肾衰第十八页，共四十一页。整理课件传统(chuántǒng)方法检测心肌缺血的局限性当心脏受到损伤时，肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Myoglobin)从心肌细胞释放入血，但这些(zhèxiē)酶也存在于骨骼肌，骨骼肌损伤时这些(zhèxiē)酶也会释放入血，故特异性差，第十九页，共四十一页。整理课件CK-MB用于ACS诊断12-24hours高峰,2-3天后恢复正常CK-MB升高5倍后又恢复正常，诊断AMI24-48hCK-MB再次(zàicì)升高诊断再梗塞第二十页，共四十一页。整理课件影响(yǐngxiǎng)CK-MB升高的因素不稳定型心绞痛急性冠脉综合征心脏炎心肌疾病循环衰竭(shuāijié)和休克横纹肌溶解症恶性高热心脏手术骨骼肌创伤皮肌炎 多发性肌炎肌肉(jīròu)萎缩症高强度运动慢性乙醇中毒第二十一页，共四十一页。整理课件知识(zhīshi)的逻辑联系

心血管疾病是威胁人类健康与生命的头号杀手，它具有高发病率、高致残率、高死亡率及较高的治疗费用(fèiyong)等特点，心血管疾病已逐渐成为我国城乡居民的第一位死因；

ACS是包括不稳定心绞痛（UA）、非ST段升高的心肌梗死（NSTEMI）和ST段升高的心肌梗死（STEMI）等一组连续进展的病症，连续进展的特点是从心肌缺血到心肌损伤的发展，从可逆性改变向非可逆性改变的发展；

心肌缺血是ACS最常见的发病原因；

心肌缺血的早期诊断和干预能够及时阻断ACS的发展进程，对于降低AMI的发病率、致残率、死亡率具有重要的意义；

IMA是心肌缺血的早期标志物；

IMA检测试剂是检测血清IMA含量的检测试剂。

第二十二页，共四十一页。整理课件心肌缺血

心肌缺血是由于心肌细胞没有受到充足的血液灌注而发生的生理功能受损；心肌缺血是ACS最常见的发病原因。

心肌缺血的主要依据是临床症状和心电图的改变；

心肌缺血的临床表现往往是不典型的和多方面的，给诊断带来困难；

心肌缺血可能导致(dǎozhì)心肌细胞的死亡，即心肌梗死；

急性心肌梗死的临床诊断目前主要根据测定血清中的CK-MB、cTnIc、cTnT和心电图等改变作出诊断。第二十三页，共四十一页。整理课件理想(lǐxiǎng)的心肌缺血标志物的特征理想的心肌缺血标志物应具备以下特征：（1）灵敏度及特异性均高，必须能检测心肌缺血，但在健康个体、炎症及其他器官损伤期间均不增加；（2）心肌缺血期间应该能够早期检测，且与心肌受累的范围成比例增加；（3）在循环中稳定性好，可持续检测以保持一个足够的期间，提供一个适宜(shìyí)的诊断窗口期；（4）24h内血中浓度恢复到基础水平，以便检测复发性缺血，使劳累缺血的稳定性冠脉病的混淆减到最小；（5）试验方法简单，TAT（来回时间）应为30～60min或更短；（6）应有可靠的分析特性、精密度良好（CV%低）；（7）合理的价格。第二十四页，共四十一页。整理课件IMA的特征(tèzhēng)IMA的特征:心肌特异性;肌缺血后迅速增高;循环中稳定性好;24h内血中浓度恢复基础水平;容易检测(jiǎncè),可很快得到结果;具有较好的分析特性。第二十五页，共四十一页。整理课件缺血修饰白蛋白测定的临床(línchuánɡ)应用缺血修饰白蛋白测定是通过测定白蛋白-钴结合能力（ACB）来间接测定IMA的含量，检测的临床意义是以心肌缺血可引起HSA的N末端发生变化及其与Co(LL)结合迅速减少为前提,当人体发生心肌缺血时，血液中缺血修饰白蛋白含量升高；缺血修饰白蛋白（IMA）测定的临床应用主要包括：作为诊断急性心肌缺血的早期生化标志物用于急性心肌缺血的辅助(fǔzhù)诊断；辅助ACS的排除诊断和危险分层；预测肌钙蛋白检测结果；判断心肌缺血的严重程度；

第二十六页，共四十一页。整理课件IMA测定的临床(línchuánɡ)应用作为诊断急性心肌缺血的早期生化标志物IMA与传统的心肌坏死指标不同,在心肌缺血发作后5～10min血中浓度即可升高,而不需发生心肌细胞的不可逆损伤,能够辅助临床医生早期明确缺血的诊断,早期干预治疗(zhìliáo),改善患者的预后和减少病死率。第二十七页，共四十一页。整理课件IMA测定的临床(línchuánɡ)应用辅助ACS的排除诊断和危险分层鉴于IMA对急性心肌缺血诊断的高阴性预测值,FDA于2003年批准其用于ACS的排除诊断,以降低(jiàngdī)对非心肌缺血性患者的收治率和心血管病高位个体的漏诊率,节省医疗资源。第二十八页，共四十一页。整理课件IMA测定(cèdìng)的临床应用预测肌钙蛋白检测(jiǎncè)结果Christenson等进行一项研究,在临床症状和体征出现4h之内采血测定IMA,探讨IMA预测6～24h以后cTnT结果阳性或阴性的能力。结果显示,白蛋白-钴结合实验的ROC曲线下面积是0.78,在最佳临界值75U/mL时,IMA预测cTnT结果的敏感性和特异性分别是83%和69%,阴性预测值和阳性预测值分别为96%和33%。从而得出结论,ACS患者到达急诊科时,测定IMA的白蛋白-钴结合实验有望成为6～24h以后cTnT结果阳性或阴性结果的早期预测指标。第二十九页，共四十一页。整理课件IMA测定的临床(línchuánɡ)应用判断心肌缺血的严重程度IMA不仅可早期诊断ACS而且可做为判断心肌缺血严重程度的指标应用。Quiles等观察了34例接受选择性单支血管PCI治疗的稳定性心绞痛患者PCI前后IMA水平变化并对其相关因素进行了分析。在PCI术前10min及最后一次球囊扩张后5min之内从股动脉鞘管取血测定IMA水平。结果显示,球囊扩张前后IMA水平明显升高(59.5uömLvs80.9uömL)。球囊扩张4次及以下患者与球囊扩张5次或以上的患者比较,IMA水平也明显升高,且IMA水平与扩张压力及扩张时间之间均呈显著(xiǎnzhù)相关。这些结果提示,IMA是反应心肌缺血程度的指标。第三十页，共四十一页。整理课件ACS患者就诊时各项检测(jiǎncè)的临床特性

灵敏度(%)特异性（%）IMA8246ECG4591CTn2099ECG+cTn5390IMA+ECG9243IMA+cTn9044IMA+ECG+cTn9542第三十一页，共四十一页。整理课件ACS患者就诊时各项检测(jiǎncè)的临床特性

灵敏度(%)特异性（%）IMA8246ECG4591CTn2099ECG+cTn5390IMA+ECG9243IMA+cTn9044IMA+ECG+cTn9542第三十二页，共四十一页。整理课件第三十三页，共四十一页。整理课件第三十四页，共四十一页。整理课件第三十五页，共四十一页。整理课件肌钙蛋白作为心肌损害标志物具有较好敏感性和特异性,但约需4～6小时才释放入血。IMA与传统心肌坏死指标不同,在心肌缺血数分钟内,心肌局部灌注减低氧供减少,组织细胞进行无氧代谢,代谢产物(如乳酸)堆积,局部微环境pH值下降,使循环蛋白释放铜离子,后者导致羟自由基(OH·)增多,人血清白蛋白被氧自由基修饰转化(zhuǎnhuà)为缺血修饰白蛋白(IMA),并可经白蛋白钴结合实验检测到,从而在传统检查尚未发现异常的急性心肌缺血发生早期即可做出诊断。本研究入选的ACS患者中80%入院即刻测定cTnI无升高,仅40%可在入院即刻根据ECG诊断,而IMA显示明显优势,敏感度达85%,明显优于传统检测方法ECG和生化指标cTnI。在现用指标cTnI和ECG基础上加用IMA后,诊断敏感性明显提高,证实IMA是传统