肺炎衣原体抗体IgM金标检测试剂盒（胶体金法）作业指导书

肺炎衣原体抗体IgM金标检测试剂盒（胶体金法）作业指导书1目的建立肺炎衣原体抗体IgM金标检测试剂盒（胶体金法）作业指导书，确保生产过程处于受控状态。2范围适用于肺炎衣原体抗体IgM金标检测试剂盒（胶体金法）相关工序的操作者。3职责3.1操作人员应严格执行本作业指导书。3.2生产主管负责监督检查。3.3质检部质检员负责抽查执行情况。4工作内容4.1生产工艺流程图※胶体金制备胶体金制备★胶体金反应膜检测胶体金标记胶体金反应膜检测胶体金标记抗体检测抗体检测单克隆抗体制备进单克隆抗体制备进★贴板产品检测装卡分包质量检测切贴板产品检测装卡分包质量检测切条NC反应膜检测NC膜包被★NC反应膜检测NC膜包被抗原检测MOPP重组抗原的表达NC膜处理NC膜检测※NC膜处理NC膜检测入库入库抗体检测兔抗鼠IgG抗体制备抗体检测兔抗鼠IgG抗体制备注：※关键过程★特殊过程4.2作业内容4.2.1胶体金制备（柠檬酸三钠还原法）氯金酸（HAuCl4）水溶液放入三角瓶内加热至沸腾→加热柠檬酸三钠溶液→混匀，搅拌煮沸10至15分钟→待胶体金溶液颜色由蓝→紫→红，冷却即可。4.2.2金标抗体（反应膜）制备以0.1M碳酸钾溶液调胶体金溶液pH8.0-9.0→加入抗人IgM单抗，15分钟后加入聚乙二醇→离心，调532nm测OD值5～10，方阵滴定法选定标记工作浓度→用无纺布浸湿胶体金溶液，干燥、平整，检测。4.2.3金标抗体反应膜质检将制备好的金标抗体反应膜按5‰比例抽检，与标准反映膜匹配组装成品，同时与标准成品作如下对照检测：a)符合率：样品稀释液、阴性质控血清无假阳性，阳性质控血清均呈阳性；b)反应强度：+/+++（阳性反应线/阴性反应线）；c)反应时间：30s～5min。确认合格后才能转入下一工序。4.2.4NC反应膜制备亲和性高分子硝酸纤维素膜→活化处理12小时→用水洗5次，每次20分钟→室温干燥后→取纯化Cpn重组MOPP抗原和兔鼠IgG抗体溶于10%CS中，浓度均为2mg/ml，用Cpn重组MOPP抗原在NC膜上包被肺炎衣原体IgM抗体阳性检测线→用兔抗鼠IgG抗体在NC膜上包被对照线→干燥后，用BS液封闭，H2O清洗后，室温干燥，备用。4.2.5NC反应膜质检4.2.5.1常规图形模式检测：将制备好的反应膜按5‰比例抽检，与标准金标抗体反映膜匹配组装成品，同时与标准成品对照检测；观察阳性、阴性包被线及本底，要求图形规则程度均匀，无遗漏或重复包被。4.2.5.2均一性、符合率筛选：按3%比例/批，随机取样，每张5～10人份，作阴性质控品和肺衣IgM阳性血清的阳性质控品检测，无假阳性和假阴性，均一性≥98%4.2.6反应体系组装组装材料材料规格（mm）组装方式反应膜（S1）20见图1无纺布（S2）25，30吸水纸（S3）30金标反应膜（S4）10双面胶带（S5）29，48塑料垫板S678单面胶带S7154.2.6.1反应体组装程序：a)在S6塑料基板上贴双面胶带S5（29，48mm）二条；b)在S5上贴反应膜S1（20mm），S1上下缘距S6上下缘各29mm；c)在S6上贴吸水纸S3（30mm），吸水纸下缘与S1上缘交接1mm,上缘与S5的上边缘对齐；d)在S5下端贴无纺布S2-1，其上缘压住S1下缘1mm；e)在S2-1上平放金标抗体反应膜S4（10mm）上缘对齐；f)在S4上平放无纺布S2-2（30mm）上下缘分别S4、S6对齐；g)将组装成型的反应体系用电脑可调式切割机切成4.2mm测试条，装入干燥器，待包装。4.2.6.2成品包装：每支成品先装聚苯乙烯塑料外壳，再用镀铝膜包装加干燥剂，附说明书，打批号入库，每批留样100人份，以备复检．4.2.7参比品制备4.2.7.1肺衣IgM阳性血清质控品取临床确诊肺衣病人（临床症状明显、肺炎衣原体培养阳性）血清15份，间接ELISA测定肺炎衣原体IgM抗体阳性，0D492≥0.3，混合血清加防腐剂,分装-70℃保存。4.2.7.2肺衣IgM阴性血清质控品取健康人血清（体查健康，培养法和间接ELISA测定肺炎衣原体IgM抗体均阴性，0D492＜0.10）15份，混合血清加防腐剂,分装-70℃保存。4.3成品检测产品技术要求应符合《肺炎衣原体抗体IgM金标检测试剂盒（胶体金法）》产品注册标要求。4.3.1外观4.3.1.1要求检测条：表面应平整、无划伤、开裂、变形及污渍；检测卡各组分附着牢固、内容齐全；b)检测卡：外壳应平整，上下盖应均匀合拢，无明显间隙；反应芯试条在外壳内应附着牢固；4.3.1.2检验在自然光线下，用手感和目力观察方法进行检验。4.3.2符合率4.3.2.1阴性符合率4.3.2.1.1要求试剂卡测试肺炎衣原体IgM抗体阴性质控血清10份，假阳性判断结果不多于1份，符合率应≥90%。4.3.2.1.2测试a)试剂1)样品稀释液；2)测定样品液：肺炎衣原体IgM抗体阴性质控血清。b)测定方法随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定阴性IgM质控血清10份。测定时取10μl阴性IgM质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。c)结果以下结果为合格：检测线不显色，只有对照线显色。4.3.2.2阳性性符合率4.3.2.2.1要求试剂卡测试肺炎衣原体IgM抗体阳性质控血清10份，假阴性判断结果不多于1份，符合率应≥90%。4.3.2.2.2测试a)试剂1)样品稀释液；2)测定样品液：肺炎衣原体IgM抗体阳性质控血清。b)测定方法随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定阳性质控血清10份。测定时取10μl阴性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。c)结果以下结果为合格：检测线和对照线均显色。4.3.3重复性4.3.3.1阴性重复率4.3.3.1.1要求使用试剂盒检测同一份阴性质控血清10次，同一份质控血清的阴性判定结果应基本一致，假阳性判定结果不多于1份，阴性重复率应≥90%。4.3.3.1.2测定随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定时取10μl阴性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。4.3.3.2阳性重复率4.3.3.2.2要求使用试剂盒检测同一份阳性IgM质控血清10次，同一份质控血清的阳性判定结果应基本一致，假阴性判定结果不多于1份，阴性重复率应≥90%。4.3.3.2.2测定随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定时取10μl阳性IgM质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。4.3.4精密性4.3.4.1要求每批试剂盒随机抽取10个检测卡样品，用同一份阳性IgM质控血清进行检测，要求各检测卡的显色应均一。4.3.4.2测定随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡进行检测。测定时取10μl阳性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。4.3.5稳定性4.3.5.1要求a）在37C条件下加速破坏试验放置12天，检测卡的