进展细胞死亡

细胞死亡项荣

中南大学生命科学学院细胞凋亡细胞坏死自噬性死亡……细胞死亡的方式Apoptosis

Apo从…ptosis飘零，落下细胞象秋天的树叶一样凋落的死亡方式

第一部分细胞凋亡左，正常胸腺细胞；右，凋亡胸腺细胞2002年诺贝尔生理与医学奖获得者悉尼·布雷诺尔、罗伯特·霍维茨和约翰·苏尔斯顿器官发育的遗传调控和细胞程序性死亡

一、细胞凋亡的研究历史、概念二、细胞凋亡的形态学和生物化学特征三、细胞凋亡与肿瘤等疾病第一部分细胞凋亡一、细胞凋亡的研究历史、概念1.

凋亡概念的形成和形态学的研究(1972）

1972年，Kerr等在英国癌症杂志发表论文，首次提出细胞凋亡(apoptosis)的概念，也宣告了对细胞凋亡真正探索的开始。2．DNA的降解和内源性核酸内切酶参与(1987）3.蛋白质水解酶活化研究(1995)4.细胞膜变化(1997)5.线粒体变化和分子生物学研究(1998-)

1）相关基因及调控

2）信号转导

3）各种分子及其相互作用、相互关系

4）疾病机制的阐明，疾病新疗法的探索及问世(一)细胞凋亡的研究历史ApoptosisIMPACTFACTOR(2013):3.949Apoptosisisaninternationalpeer-reviewedjournaldevotedtotherapidpublicationofinnovativebasicandclinically-orientedinvestigationsintoprogrammedcelldeath.Itaimstostimulateresearchonthebasisofmechanismsofapoptosisandonitsroleinvarioushumandiseaseprocessesincluding:cancer,autoimmunedisease,viralinfection,AIDS,cardiovasculardisease,neurodegenerativedisorders,osteoporosisandageing.Theeditorsintendtoencouragethedevelopmentofclinicaltherapiesagainstapoptosis-relateddiseases.国际重要期刊（二估）细钢胞凋邮亡的脆概念概念任：生理坊或病才理情况蚊下，罚发生去在机哭体内齿的，阻一个口主动都的由差基因扰决定阔的自蚀动结外束生尤命的胖过程困，骑即“主动搬性细命胞自肾杀”过封程为神细胞令凋亡姻（a惕po恶pt骡os伴is巡寿）。寨所以鬼也常挣常被蓄称为蝴细胞状编程范死亡想（pr椒og揭ra悟mm从ed钥c昆el竭l牲de床at杜h，PC鼠D），战凋亡妖细胞开将被公吞噬驱细胞盆或邻喂近细细胞吞辱噬。生物牢学意辽义细胞映凋亡画对于抹多细霉胞生予物个体蠢发育的正送常进来行，自稳平衡坛的保菜持以材及抵御外界诞各种缘瑞因素投的干事扰方等面都归起着理非常呆关键委的作响用。一、浆细胞语凋亡百的研亡究历穗史、忘概念二、艺细胞岸凋亡共的形视态学纹和生轰物化欣学特驰征三、滥细胞创凋亡钟与肿绵瘤等灶疾病第一贵部分认细缓胞凋亩亡二、愈细胞挡凋亡赵的形档态学欧和生肌物化月学特熟征（一仙）细渴胞凋友亡的津形态渐学特学征（二狼）细锤胞凋崇亡的斑生化隙特征（三）诱桂导细范胞凋牌亡的室因子（四）细修胞凋歌亡的涨检测（一）细氏胞凋吗亡的面形态辅学特赖征◆凋亡诊的起龄始：哄细胞听表面享的特桶化结泰构如到微绒烦毛消露失，章细胞寄间接触的消失，但夫细胞膜依然万完整巡寿；线爪粒体血大体桌完整较，但核糖米体逐渐问从内抖质网液上脱商离，内质柔网囊腔驳膨胀享，并医逐渐挡与质君膜融俯合；染色狼质固缩梨，形舟成新风月形皂帽状翅结构沈等形韵态，蜓沿着滋核膜迟分布◆凋亡认小体落的形赤成：懒核染色为质断萝裂为大屯小不动等的莲片段驳，与毙某些服细胞成器如旬线粒耻体一纱起聚宗集，丧为反存折的仇细胞根质膜标所包帅围。份细胞论表面采产生馋了许甜多泡核状或既芽状竟突起浙，逐写渐形崖成单痛个的凋亡怖小体◆凋亡汪小体猎逐渐枯为邻典近的层细胞捷吞噬晓并消散化。凋亡虽细胞色早期细胞父核内猪染色颗质高结度盘禽绕，驳出现搬许多蝇称为绢气穴圣现象雕（c度av萄it馆at阵io卧ns委）的你空泡但结构凋亡纪细胞使中期细胞让核的辫染色许质高爪度凝进聚、灭边缘烦化凋亡里细胞返晚期细胞惭核裂蛋解为摸碎块午，产颗生凋伤亡小附体细胞启凋亡煮过程睛中细亭胞核染色仙质的壤形态膛学改闹变分猾为三习期：早期的细羞胞核垒呈波基纹状治或呈颤折缝诉样部暖分染泳色质水出现哀浓缩多状态解；中期细胞侧核的妄染色挖质高恒度凝区聚、食边缘让化；晚期的细脚胞核盘裂解帜为碎筋块，净产生越凋亡桃小体（二）细胞摧凋亡鹅的生阻化特吐征◆凋亡件细胞馅组织证转谷鲁氨酰败胺酶tT虏G（ti捉ss编ue牵T昂ra跳ns拳gl迹ut开am违in叫as辛e）积包累并知达到较版高水督平◆细胞炼凋亡霸的主蔑要特诞征形成底大小截为18篮0～20扮0b土p特征咏性的DN乐A陆la水dd蓄er梁s细胞炒色素秋c诱发导的巡寿凋亡值细胞拴DN啊A电早泳图1．桨细胞滨色素适c诱迫导0锐h2．虑细胞煮色素培c诱油导1如h3．障细胞拌色素洲c诱食导2泽h4．良细胞捎色素置c诱社导3膀h5．饮细胞炭色素波c诱两导4挠h6．圆阴性舒对照7．闷Ma勉rk陷er？（三）诱射导细运胞凋帮亡的而因子◆物理仗性因隔子，粪包括藏射线勒（紫娇外线注，射线鸽等）忌，较温觉和的毕温度厉刺激勇（如巷热激攀，冷善激）学等◆化学圣及生谷物因捐子：堪包括卧活性阅氧基告团和习分子喂，DN联A和蛋咐白质都合成砍的抑狡制剂程，激瓶素，幻玉细胞刘生长岔因子趴，肿瘤坏喘死因疼子（TN婶F），朴抗Fa搏s/故Ap爹o-臣1/文CD像95抗体润等1.细胞亚凋亡炒的形纺态学页检测2.磷脂川酰丝绵氨酸腿外翻灾分析滨（An椅ne淘xi绘n旬V法）3.线粒虾体膜渔势能置（mt）的纸检测4.禾D担NA片断次化检薯测5.已T掘UN鞭EL法6.续C斯as匹pa柳se谅-3活性刑的检硬测7.装W械B检测8.凋亡刘相关渴蛋白绒的表炎达和龙细胞膜定位岗分析（四）细厌胞凋启亡的控检测1.细胞拒凋亡煌的形委态学炉检测光学单显微运镜和肿倒置倒显微插镜未染帮色细师胞：亮凋亡缩慧细胞塔的体迟积变次小、丙变形旁，细破胞膜剂完整智但出萌现发缴泡现棍象，妹细胞目凋亡籍晚期州可见震凋亡盐小体坦。染色织细胞砌：常丝式用姬喂姆萨歼染色守、瑞劝氏染势色、涝苏木高精染拣色等桑。凋崇亡细赏胞的奖染色日质浓驱缩、旨边缘书化，逮呈新踪蝶月状湖附在填核膜传周围木。荧光飞显微秋镜和阴共聚蛾焦激望光扫框描显邻微镜一般湖以细滨胞核略染色霞质的汉形态督学改塑变来霸评判枪细胞缴凋亡支的进猎展情俗况。壶常用糠的DN淹A特异韵性染原料有车：Ho貌ec暂hs缓t虏33密34寇2;Ho赛ec塑hs付t镇33赚25晓8;耕D酷AP镰I。电子安显微谊镜观螺察2.磷脂图酰丝狗氨酸楚（PS）外抓翻分火析（An兆ne喊xi锄n卵V法）磷脂沾酰丝处氨酸富（Ph嫩os敢ph帝at忌id塘yl脚se归ri愤ne仆,士PS）正常傅位于沫细胞贺膜的咐内侧求，在口凋亡折早期昼，PS可从鞭细胞拿膜的票内侧塌翻转计到细棒胞膜全的表静面，灯暴露听在细御胞外造环境更中。An瓦ne词xi络n-弓V是一煤种分住子量孝为3536雁KD的Ca2+依赖揪性磷如脂结作合蛋宁白，水能与PS高亲志和力升特异写性结概合。缎将An映ne浩xi肤n-丸V进行栏荧光确素（FI享TC、R-左PE）或bi豪ot例in标记命，以伯标记厌了的An顺ne奖xi服n-塘V作为吹荧光造探针克，利钱用流构式细暑胞仪咽、荧芝光显钩微镜虑以及勒共聚屑焦激嗽光扫茄描显持微镜漆检测墓细胞稻凋亡仗的发监生。An音ne透xi谈n磨V-巾FI乘TC雄F那lu围or笼es机ce嚷nc共ePI喂F胞lu杯or烦es伴ce塔nc坚eTi械me踪蝶c夕ou里rs衫e舍of鹅a岔po撇pt仍os刮is逼i乞n款TF衰-1辜c思el喂ls即c油ul狡tu露re艘d津in牺G划M-贞CS宫F-岂fr翻ee忌m总ed灭iu限mAp掠op竟to扫ti匙c改He顶La疗c踏el左ls眯w穷er顿e缓st目ai梯ne喝d革wi颜th辣F眉IT冤C-恼An墨ne搁xi摄nV倒+P涨I流式聚细胞餐分析DN尤A根据悼凋亡剃细胞DN船A断裂患和丢采失，喂采用甜碘化醋丙啶聪使DN展A产生揪激发辆荧光鼠，用崇流式对细胞窄仪检资出凋炭亡的亚二艇倍体细胞，垃同时伪又能灾观察典细胞侵的周繁期状贝态。3.线粒拾体膜缴势能冲（mt）的樱检测线粒顷体荧川光染沃料：Rh划od擦am稀in棵e虹12惠3、阿Di泛OC6（3就）、贯JC侵-1畜、T江MR躲M等对春线粒监体膜厉电位脾非常脆敏感浩，其烟荧光齿的增膛强或叛减弱秧说明脾线粒咸体内潮膜电姥负性返的增胀高或蝴降低碌。线粒蚁体跨张膜电蒸位的卸存在晌使亲渡脂性攻阳离伶子荧嗓光染潮料可萄结合协到线藏粒体喜基质杆，其拴荧光俩的增灯强或樱减弱优说明多线粒胁体内腹膜电傲负性扣的增隆高或付降低裹。Bc出l-废2家族双与线壁粒体扁相关且细胞纵凋亡◆Bc畜l-怨2是药一种原癌基因敲，是射ce吴d-尘9在元哺乳凤类中闹的同底源物滤，能祖抑制凤细胞津凋亡（抑制却凋亡购蛋白圣酶的仇激活，直接否抗氧冲化，抑制雨线粒佩体释妨放促隔凋亡唇蛋白婶质，抑制近凋亡菠调节丘蛋白扎对细孔胞的衰毒作柄用）◆与线者粒体出及内秤质网婶膜相顽结合虚；B肆cl肤-2显蛋白赏的羧柏基末福端有锦一穿位膜的帅结构眨域；昆Bc丹l-惩2家待族成揪员的洪基因湖中，每常常躺含有朽三个圣保守蝇的B易cl傲-2什同源铃区，奴即B温H1柏，B峡H2暴和B昏H3◆哺革乳动券物细蚂胞中协发现课的Ap孟af膛2即跪是C仇yt辽C（B肿细胞慕淋巴侄瘤/围白血全病-送2，B触ce粮ll米l饰ym机ph音om穿a/畅le爬uk鼠em接ia响-2）分布何：造血谊细胞率，上咸皮细走胞，主淋巴筒细胞顾等多承种瘤躁细胞线粒净体凋蛛亡信睡号途洪径Mi廉to锋ch也on铜dr久ia轨l叮Pa和th掀wa英y4.漠D亚NA片段扁化分闲析细胞勇凋亡票时主敏要生倚物化卫学特织征是取其染吼色质椒发生驰浓缩,染色扣质DN妈A在核恭小体令单位宰之间滩的连才接处雄断裂,形成18傲020岔0b状p整数肢倍的宫寡核总苷酸残片段,在凝吉胶电眼泳上域表现让为梯倦形电刑泳图令谱(D森NA别l仗ad负de秤r)。荧光枪素（fl计uo呀re嘴sc割ei确n）标松记的dU耐TP在脱氧廊核糖菠核苷志酸末枯端转白移酶（Td福T滚En朝zy徐me）的遵作用炉下，筹可以孕连接竟到凋绒亡细墓胞中致断裂DN赵A的3’烦-O型H末端烂，并撒与连堪接辣笔根过液氧化匠酶（HR崖P，ho资rs眉e-撤ra笼di抢sh撇p筹er吃ox懒id这as副e）的魄荧光孙素抗存体特铲异性拼结合钢，后沿者又般与HR亭P底物无二氨攀基联收苯胺碰（DA斤B）反丙应产四生很芒强的得颜色粗反应挪（呈环深棕怕色）看，特榨异准愧确地袍定位灵正在册凋亡啊的细腿胞，绍因而娱在光研学显雅微镜脱下即照可观堆察凋赖亡细欺胞；崭由于昌正常馅的或溪正在尝增殖拜的细蹈胞几贴乎没耗有DN处A断裂秧，因絮而没证有3‘铅-O总H形成沫，很贩少能涉够被喜染色救。5.臂T牢UN奸EL（Td吩T-收me闻di咬at腔ed竭d李UT绪P瞒ni妥ck锦e钥nd援l域ab友el凉in辅g）（T喇dT累-m茧ed置ia章te理d晋dU槽TP贤n筹ic妈k性en键d猜la愈be夜li要ng哗）◆Ca号sp喜as层e家族Ca汪sp浊as答e活性阳位点志是半皆胱氨块酸(C艺ys换te革in料e)，裂解辱靶蛋局白位猾点是简天冬殖氨酸蛋残基捐后的页肽键，违因此厚称为Cys检te魔in旬e宜as害pa狸rt美ic录a桌ci永c傻sp却ec覆if蒙icpr繁ot侨ea仍se，即Ca余sp驶as闸e6.绑C捕as轮pa阴se活性犹的检竭测ca哲sp消as脚e场超家院族成炎员及份其相闻应底杯物Ca邮sp料as浮e活化Ca妥sp坟as准e自身暗以非活痒化的Pr垃oc统as招pa偷se存在波，其挽激活存依赖何于其坛他的Ca组sp吉as踏e在它筐的天冬瘦氨酸位点展裂解炉活化悼或自称身活捆化荧光头物质言偶联添的短饼肽活化治的C族as邀pa狠se苹-3习能够王特异烧切割番D1五E2测V3夺D4记-X祖底物骄，水惊解D虚4-渡X肽射键7.通W裹B8.凋亡捧相关个蛋白叶的表略达和轧细胞吃定位聚分析一、邮细胞隔凋亡筐的研久究历表史、霜概念二、截细胞辜凋亡祖的形枣态学最和生盲物化怎学特到征三、盈细胞下凋亡孔与肿壮瘤等台疾病第一假部分紧细友胞凋曾亡三、终细胞多凋亡佩与疾偿病（一坛）榴细胞总凋亡朵不足1．辣肿缸瘤Bc炉l-嫁2表崭达↑P5碧3突念变或乳缺失2、自瘦身免栽疫疾遵病——胸腺睬对T细胞宗正负盘选择乘障碍正选脉择：与棕非已派抗原-M纸HC抗原峡结合拉的TC脉R的单禽阳性嚼细胞精保留归存活把，进外入外喉周T细胞兽库负选授择：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