第二十二二十三章 免疫学的临床应用

免疫学的临床应用陈水亲生化与分子生物学教研室第二十二章免疫学检测技术第一节体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素一、抗原抗体反应特点1．高度特异性

由抗原表位与抗体分子中的超变区互补结合所决定的。

2．表面化学基团之间的可逆结合

3．适宜的抗原抗体浓度和比例抗原抗体结合后能否出现肉眼可见的反应取决于两者适当的浓度和比例。4．抗原抗体反应的两个阶段二、抗原抗体反应的影响因素

1．电解质

抗原、抗体通常为蛋白质分子，等电点分别为pH3~5和5~6不等。实验中常用0.85%的NaCl溶液，以提供适当浓度的电解质。2．温度适当提高反应的温度可增加抗原与抗体分子的碰撞机会，加速抗原抗体复合物的形成。通常37℃是抗原抗体反应的最适温度。3．酸碱度抗原抗体反应的最适pH在6~8之间，pH过高或过低，均可直接影响抗原、抗体的理化性质。

第二十二章免疫学检测技术第二节检测抗原或抗体的体外试验一、凝集反应（agglutinationreactions）细菌、细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒状物质（如聚苯乙稀乳胶等）与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团现象。1.直接凝集反应：颗粒性抗原本身直接与相应的抗体反应出现的凝集现象，如红细胞凝集或细菌凝集。2.间接凝集反应：将可溶性抗原或抗体先吸附在某些颗粒载体上，形成致敏颗粒，然后再与相应抗体或抗原进行反应产生的凝集现象。直接凝集反应和间接凝集反应亦常用于溶血性疾病的诊断，如Rh血型不符的新生儿溶血症及药物相关的溶血性疾病。第二十二章免疫学检测技术二、沉淀反应（precipitationreactions）毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物。1.免疫比浊法利用抗原抗体复合物在液相中形成浊度来测定抗原含量的方法。2.单向琼脂扩散常用于血清中免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、C3、AFP等定量测定。第二十二章免疫学检测技术3.双向琼脂扩散①检测可溶性抗原或抗体②对复杂的抗原或抗体成分进行纯度鉴定③免疫血清效价测定第二十二章免疫学检测技术4.免疫电泳常用于血清蛋白的组分分析第二十二章免疫学检测技术三、免疫标记技术（immunolabelingtechnique）将抗原抗体反应与标记技术相结合，以检测抗原或抗体的一类试验方法。

常用的标记物有酶、荧光素、放射性核素、胶体金及化学发光物质等。

1.免疫酶测定法（EIA）

这是一种用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原或抗体的方法。①双抗体夹心法

②间接EILSA第二十二章免疫学检测技术血清检测中：肝癌、骨肉瘤-----血清碱性磷酸酶（ALP）升高。

前列癌-------血清酸性磷酸酶升高。2.免疫荧光技术是用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法。123.放射免疫测定法

是用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。敏感性可达到pg/ml水平，常用的放射性核素有131I和125I等。

第二十二章免疫学检测技术于1977年因创建放射免疫测定法而获得医学诺贝尔奖。最敏感4.化学和发光影免疫偿技术是将语化学鼠发光顶分析狗和免驼疫反闪应相缘瑞结合绵而建程立的赖一种搬新的浊免疫条分析撞技术妖。5.免疫蛋胶体听金技种术用胶弊体金叶颗粒假标记像抗体谈或抗捉原，躁以检担测未陶知抗掉原或图抗体遥的方良法称赛免疫肉胶体这金技蚕术。四、赖蛋白狐质芯豪片技零术是指市固定伶于支贞持介企质上瞎的大俩量蛋太白质泡构成导的微赴阵列珠。6.免疫绩印迹帽技术咱又称We艘st步er厅n喘bl那ot题ti羡ng第二鞭十二厅章限免疫凳学检贯测技郊术蛋白阅定性哪定量宏应用部最广金泛第三辨节构免骄疫细诞胞功谦能的踩检测一、靠免疫峡细胞幻玉的分毯离1.外周猴血单智个核箭细胞题的分个离第二耕十二正章须免疫四学检伴测技虾术2.淋巴查细胞乓及其浙亚群鹿的分图离和回分析有：免疫不吸附办分离正法画、磁嘉珠分观离法晕、荧光析激活燃细胞笋分离杠仪分岭离法、抗原阿肽-M培HC分子娱四聚谋体技沸术第二毫十二议章阿免疫极学检嗓测技舒术流式惧细胞量术可用巡寿于分离阀混合洪的T、B细胞。用独于细胞雪分离认鉴定畜的最闻好方离法。二、绸免疫及细胞虑功能趋的测咳定1.面T细胞翼功能魄测定①T淋巴葡细胞专增殖打试验牌：T细胞伐受到辆特异币性抗升原或现有丝夕分裂何原（PH易A、Co沸nA）刺跃激后斗可发骄生增排殖，具可通谅过以鹅下三脖种方耽法检买测。形态和计数暮法3H-啊Td蚊R或12爪5Ｉ-Ud号R掺入添法MT轮T比色应法第二鬼十二商章体免疫瓜学检波测技谣术②迟发蒜型超倡敏反狗应（DT眉H）的殊检测此方辛法为按体内察检测敌细胞栋免疫瞧功能堪的简傅便易泡行的动皮试毕方法执。2.缺B细胞朽功能吹测定抗体仗形成宋细胞蒙测定酿：常坊用溶狼血空停斑试讨验。3.细胞查毒试竹验培养4-塞6小时51Cr释放殿法乳酸串脱氢紧酶释愚放法细胞强染色臭法凋亡藏细胞宁检测届法第二芝十二袭章席免疫箱学检窜测技鹅术4.吞噬补功能播测定①硝劝基蓝恭四氮旱唑试孕验②巨亭噬细氧胞吞劣噬试林验5.细胞拾因子捡的检男测①生瓣物活绩性检秩测法②免全疫学顽检测失法酶联梢免疫封斑点两试验第二幅十二浇章营免疫市学检透测技骂术用于构功能也性细东胞的汁定量萍检测第二出十三菊章汤免疫陕学防愧治第一弊节趣免需疫预敬防特异刚性免原疫的丽获得呈方式业有自拴然免性疫和额人工械免疫针两种楚。自然律免疫主要靠指机肉体感看染病懒原体院后建议立的举特异辱性免哈疫，像也包貌括胎顺儿或处新生四儿经旧胎盘炼或乳拴汁从耗母体撞获得刺抗体佳。人工祥免疫则是擦人为懂地使利机体粮获得缠特异彼性免墓疫，惹是免躁疫预证防的认重要蒙手段而，包煤括人工进主动绕免疫和人工点被动掩免疫。一、欣疫苗毯的基角本要拾求习惯屯上将私细菌招性制掏剂、统病毒葱性制河剂以即及类邪毒素丙等人尤工主俩动免障疫制渠剂统厅称为疫苗。1．安切全2．有炊效3．实无用第二宰十三辞章剩免疫备学防稍治二、嫌人工体主动搏免疫用疫捆苗接怠种机答体，因使之翅产生塌特异瓣性免财疫，疤从而剑预防贞感染帝的措萄施。1.灭活摧疫苗又称绸死疫屈苗，樱是选袍用免大疫原陷性强湖的病得原体棕，经鸽人工贺大量灭培养蠢后，辆用理龄化方卵法灭相活制围成。2.减毒邀活疫萌苗用减裁毒或狭无毒仆力的月活病畜原微颠生物刻制成戴。3.类毒双素用细俗菌的巴外毒岭素经0.悉3%晴~0谜.4冤%甲醛象处理疑制成脂。因逮其已浓失去补外毒脂素的赢毒性型，但念保留榨免疫乏原性觉，接而种后呈能诱组导机毁体产绝生抗盏毒素凭。第二凝十三斑章让免疫络学防织治第二梳十三史章秃免疫技学防膀治三、御人工炮被动射免疫给人誓体注夜射含斜特异怒性抗冲体或糟细胞环因子吵的制宇剂，米以治菜疗或异紧急碌预防加感染疯的措老施。1.抗毒隔素用细透菌外准毒素虽或类布毒素经免疫姻动物逐制备率的免桌疫血滥清，拉具有充中和模外毒耐素毒杏性的疲作用海。2.人免冷疫球好蛋白艘制剂从大证量混叫合血旗浆或症胎盘奴血中盐分离根制成推的免唤疫球狂蛋白矛浓缩暗剂。3.细胞帖因子方与单禁克隆霉抗体细胞道因子复制剂瞒与单转抗制部剂是农近年臭来研堂制的级新型响免疫洒治疗惜剂，盒可望突成为起肿瘤辉、艾焦滋病邀等的赵有效误治疗随手段俭。第二辩十三杀章茅免疫剪学防喘治第二伸十三荷章忍免疫盆学防弊治四、竭佐跳剂是一秋类与单抗原袋合用载时能陪增强家抗原泽免疫港效应紧的物堤质。可能兽的作殖用机均制1.在淋棒巴细障胞接侧触抗脆原的政局部帅可浓汇缩抗洽原，派即储奔存效把应他；2.通过弊诱导值细胞陈因子艺的产宗生，注调节发淋巴卫细胞步的功杀能。种类氢氧场化铝修、磷调酸铝烛、磷抖酸钙圈等无瞎机盐卧以及环结合者细菌桃类毒泥素的泳百日下咳杆湖菌。1.IS逼CO盈Ms是一促种缓领释的霜复合汽物。武含磷冻脂、旅皂素辞、胆苦固醇溜及蛋玩白质闭，为30钥~4冠0n瓦m直径鹅的二武十面柿体对浴称结兆构，歉能捕许获大恒量抗窑原分枣子并团释放若给抗朱原提赚呈细磨胞。IS药CO扯Ms可上码调MH非C分子诊的表毁达，谊促进壤细胞厅免疫锻尤其陵是CT辩L活性败。2.Cp川G寡核耗苷酸指人钟工合饲成的骆一段尾含非绞甲基昆化胞露嘧啶-鸟嘌姻呤的合寡核练苷酸止链，稀其受斜体是TL后R9，能咳诱导忌细胞拆因子藏的产爽生，钓活化B细胞缓、NK细胞屋及树狱突状炎细胞覆，对逢蛋白召疫苗歉和核拌酸疫拿苗均午有明想显佐泼剂活若性。第二艰十三狂章气免疫恢学防策治五、在计划凤免疫根据明某些行特定关传染架病的街疫情葱监测座和人哑群免吸疫状敞况分夺析，远有计贵划地煎用疫饼苗进姻行免踢疫接钓种，汤预防威相应波传染御病，必确保难儿童径健康必成长些的重计要手醒段，班最终色达到楚控制劫以至冬消灭池相应虑传染钱病的悼目的剃而采茶取的弦重要德措施缴。第二富十三牵章炒免疫疾学防轰治六、劝新型季疫苗揪及其适发展1.亚单饶位疫男苗去除缩慧病原续体中雅与激肺发保疮护性蕉免疫伞无关贤的甚享至有脚害的酷成分壁，保位留有嚼效免痕疫原缸成分哪制作舅的疫完苗。2.结合承疫苗能引井起T、B细胞俘的联总合识凯别，B细胞澡可产割生Ig耀G类抗赴体，竹明显极提高秃了免蜻疫效亮果。3.合成框肽疫怒苗根据牵有效点免疫触原的躺氨基内酸序桨列，效设计钉和合猛成的钉免疫旧原性院多肽体，以在期用截最小扬的免袭疫原嗓性肽项来激茄发有炭效的瘦特异傅性免著疫应绢答。4.基因区工程林疫苗①重将组抗披原疫且苗：扣是利逃用DN牲A重组巨技术纷制备巴的只西含保料护性凝抗原辅的纯嚼化疫涉苗。②重矩组载就体疫旱苗：译是将越编码幻玉病原的体有伴效免抖疫原毯的基夏因插伤入载扮体（雀减毒栽的病戏毒或齿细菌忘）基略因组窜中，愚接种爹后，负随疫湾苗株胖在体盗内的枣增殖勇，大孔量所急需的岔抗原揭得以老表达哲。第二披十三除章谊免疫底学防丝式治③DN轰A疫苗宜：用竞编码涉病原夜体有谷效免派疫原纽奉的基孤因与捕细菌钻质粒动构建拖成重赢组体程，经凝注射组等途当径进鸭入机头体，衫重组企质粒镇可转释染宿朗主细腥胞，促使其索表达匀保护销性蛋景白抗为原，呢从而正诱导驰机体旧产生帆特异随性免总疫。④转俯基因若植物堤疫苗五：用娘转基陆因方预法，基将编职码有仰效免慌疫原蒙的基弃因导浑入可洋食用违植物梢细胞射的基戒因组迟中，脸免疫瞒原即崖可在愿植物脖的可构食用狼部分恭稳定菌的表闲达和冷积累柿，人摩类和众动物圣通过追摄食滚达到唇免疫骂接种眉的目蛛的。七、忆疫苗良的应劣用1.抗感摄染抗感曾染仍融是未岂来应岗用疫稀苗的干首要斯任务喷。2.抗肿戒瘤一些玩病毒萌的感亿染与拆肿瘤虏的发砍生密母切相至关，生这些孤病毒键的疫分苗可寺被看味作是丈肿瘤广疫苗铜。3.计划督生育避孕露疫苗未也是论近年测来活集跃的舱研究辞领域慎。4.防止闷免疫母病理静损伤第二轻十三篮章肆免疫各学防浴治第二钢节博免巩疫治垮疗免疫讲治疗是指轨利用糠免疫费学原攻理，态针对恢疾病柿的发岗生机震制，慢人为虚地调贝整机冷体的印免疫毙功能蔽，达扔到治棋疗目乓的所着采取竿的措奇施。第二纯十三捎章桑免疫收学防我治一、态分子货治疗分子俯治疗指给梨机体辰输入奶分子障制剂拨，以琴调节拴机体需的特质异性常免疫巷应答辱，例钻如使习用抗池体、蒜细胞旁因子聪以及借微生民物制仿剂等床。1.分子后疫苗2.抗体3.细胞活因子4.微生训物抗欺原疫覆苗二、直细胞殖治疗细胞包治疗指给计机体肉输入纳细胞洞制剂叹，以担激活友或增维强机麦体的抛特异昼性免