我的细胞融合与单克隆抗体

学习目标1、掌握动物细胞融合与植物体细胞杂

交的区别与联系。2、简述动物细胞融合和单克隆抗体制

备的过程。3、了解单克隆抗体在医学实践中的应

用，并能说出应用实例。本文档共44页；当前第1页；编辑于星期二\1点54分自学指导怎样才能顺利达到上述目标？要靠大家紧张有效的自学。请同学们认真阅读教材P52-54，思考下列问题，8分钟后进行检测。比一比，看谁知识掌握得最牢固.本文档共44页；当前第2页；编辑于星期二\1点54分1、动物细胞融合的概念是什么？2、动物细胞融合的原理是什么？诱导动物细胞融合的方法有哪些？3、抗体是由何种细胞产生的？4、一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗

体吗？5、融合后培养液中有几种细胞？6、怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有

何优点？本文档共44页；当前第3页；编辑于星期二\1点54分先学（一）学生认真阅读教材P52—54，独立完成上述思考题（教师巡视，保证每位学生都集中精力)(时间8分钟）（二）提问：随机点名学生回答，如有错误，

教师引导其他学生更正、讨论。（三）检测、板演1.出示检测题2.让三名学生板演，其他学生做到笔记本上，教师巡视，搜集检测中出现的错误。本文档共44页；当前第4页；编辑于星期二\1点54分1.动物细胞工程技术的基础是：（）A．动物细胞融合 B．胚胎移植C．动物细胞培养D．核移植２．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A．结果是相同的B．杂种细胞的形成过程基本相同C．操作过程中酶的作用相同D．诱导融合的手段相同CB本文档共44页；当前第5页；编辑于星期二\1点54分3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）

A.容易产生各种变异B．具有更强的全能性

C.取材十分方便D．分裂增殖的能力强4、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）

A.经过免疫的B淋巴细胞

B.没经过免疫的T淋巴细胞

C.经过免疫的T淋巴细胞

D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞DA本文档共44页；当前第6页；编辑于星期二\1点54分5、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞

A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C本文档共44页；当前第7页；编辑于星期二\1点54分后教（一）更正：

1.教师公布答案、学生自改。2.自己寻找错误原因或同桌之间小声讨论（二）点评：

1.对于学生讨论后不能解决的问题，教师进行有针对性的分析和讲解2.评检测题，点拨知识点本文档共44页；当前第8页；编辑于星期二\1点54分融合的原生质体AB再生细胞壁杂种细胞AB杂种植株脱分化愈伤组织再分化原生质体B原生质体A去壁人工诱导植物细胞A植物细胞B回顾植物体细胞杂交过程去壁本文档共44页；当前第9页；编辑于星期二\1点54分一、动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。也称细胞杂交⑴自然发生：受精卵⑵人工诱导：利用诱导剂诱导动物细胞融合杂交细胞：融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。概念：本文档共44页；当前第10页；编辑于星期二\1点54分细胞膜的流动性原理：诱导融合方法：物理法:化学法:生物法：灭活的病毒离心、振动、电激等聚乙二醇（PEG）本文档共44页；当前第11页；编辑于星期二\1点54分仙台病毒紫外线灭活丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）①什么是病毒的灭活？灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。②灭活病毒诱导细胞融合的原理病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。本文档共44页；当前第12页；编辑于星期二\1点54分灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）本文档共44页；当前第13页；编辑于星期二\1点54分正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞正在融合的鸡血细胞本文档共44页；当前第14页；编辑于星期二\1点54分融合过程：把两个不同的动物细胞放在一起，用灭活的病毒处理细胞，它们先发生质融合，再出现核融合，进而形成杂交细胞。融合后的杂交细胞经过有丝分裂后仍能形成两个完整的杂交细胞本文档共44页；当前第15页；编辑于星期二\1点54分动物细胞融合技术的意义打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能广泛应用多个学科领域（细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种的培育）重要用途：制备单克隆抗体。本文档共44页；当前第16页；编辑于星期二\1点54分二、单克隆抗体传统血清抗体的制备：方法：向动物体内反复注射某种抗原，然后从动物血清中分离所需要的抗体。纯度低；产量低、特异性差传统血清抗体的制备的缺陷：本文档共44页；当前第17页；编辑于星期二\1点54分使用相应的抗体检测乙肝病毒——抗原抗体生成的原理

医院一般检测人体内是否存在乙肝病毒的方法乙肝病毒模式图

凡能够引起机体产生特异性免疫应答的物质叫做抗原。⑴什么是抗原？例如花粉、病菌、病毒等。有时自身的组织或细胞也会成为抗原，如癌细胞等。本文档共44页；当前第18页；编辑于星期二\1点54分抗原决定簇：抗原表面具有的某些特定的化学基团，能决定抗原特异性，是免疫细胞识别抗原的重要依据。各种抗原的决定簇数目不同，同一抗原的决定簇可能有多种。本文档共44页；当前第19页；编辑于星期二\1点54分

⑵什么是抗体？由何种细胞产生？主要分布在哪里?起何作用？

当机体受到抗原刺激剂后由效应B细胞（浆细胞）产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白——抗体。

抗体分布于血清中，也分布于组织液及外分泌液中。本文档共44页；当前第20页；编辑于星期二\1点54分抗体与相应抗原特异性结合本文档共44页；当前第21页；编辑于星期二\1点54分

一种抗原有多种不同的决定簇,刺激的是多种B细胞,作用于不同的B细胞后,会产生多种抗体本文档共44页；当前第22页；编辑于星期二\1点54分血清抗体（也称多克隆抗体）由血清中提取的抗体是由不同淋巴细胞产生的多种抗体的混合物，可达百万种以上，称为多克隆抗体。特点：产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏。抗原不纯抗体不纯

抗原动物体内刺激效应B抗体本文档共44页；当前第23页；编辑于星期二\1点54分

抗体

抗原应答抗体的不纯性

动物细胞受到抗原刺激,引起免疫反应产生的球蛋白.不是自己的而又能引起免疫应答反应的物质就是抗原.一种抗原有多种不同的决定簇,刺激的是多种B细胞,作用于不同的B细胞后,会产生多种抗体,这是多克隆的,故不纯!制备单克隆抗体的思路抗原

B细胞浆细胞抗体

刺激本文档共44页；当前第24页；编辑于星期二\1点54分怎么才能得到纯的抗体?光纯还不行,还要大量.怎么办?但，有问题:找，什么细胞能无限繁殖呢?思路就出来了:要想获单一的纯抗体,就必须从一个B细胞出发.每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一，特异性强的抗体。让B细胞大量繁殖(克隆)就可以产生大量抗体了.B细胞是不能无限繁殖的.怎么办?癌!只有癌细胞.但它不能产生抗体.癌细胞能无限繁殖,但不能产生抗体.B细胞能产生抗体,但不能大量繁殖.融合呀!只要将两个细胞融合即可互补.本文档共44页；当前第25页；编辑于星期二\1点54分⑵如何诱导融合？

加入聚乙二醇（PEG）⑴如何得到B淋巴细胞？制备单克隆抗体的过程本文档共44页；当前第26页；编辑于星期二\1点54分⑶细胞两两融合后，有哪些类型？B-BB-瘤(杂交瘤细胞)瘤-瘤⑷如何筛选出杂交瘤细胞？

单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。

①首先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞本文档共44页；当前第27页；编辑于星期二\1点54分①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？

小资料：本文档共44页；当前第28页；编辑于星期二\1点54分在培养液中加入氨基蝶呤，收集增殖细胞！加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。本文档共44页；当前第29页；编辑于星期二\1点54分通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞

在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。本文档共44页；当前第30页；编辑于星期二\1点54分(5)如何得到大量的单克隆抗体？

体内培养体外培养单克隆抗体——化学性质单一、特异性强本文档共44页；当前第31页；编辑于星期二\1点54分单克隆抗体筛选杂交细胞杂交瘤细胞体外或体内细胞培养筛选骨髓瘤细胞诱导细胞融合特异性杂交瘤细胞杂交瘤细胞系提取经过免疫的B淋巴细胞动物细胞融合技术动物细胞培养技术单克隆抗体的制备过程：特点：既能产生抗体又能大量繁殖特点：特异性强灵敏度高可大量制备注射抗原免疫本文档共44页；当前第32页；编辑于星期二\1点54分BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。本文档共44页；当前第33页；编辑于星期二\1点54分单克隆抗体制备过程本文档共44页；当前第34页；编辑于星期二\1点54分4、单抗隆抗体的应用①作为诊断试剂②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病

用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。③用于治疗疾病和运载药物

利用同位素标记单抗，在特定组织成像

制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。本文档共44页；当前第35页；编辑于星期二\1点54分本文档共44页；当前第36页；编辑于星期二\1点54分

本文档共44页；当前第37页；编辑于星期二\1点54分⑵用于治疗疾病和运载药物①特异性强、灵敏度高

生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物

②疗效高、毒副作用小结合同位素的单抗-----生物导弹本文档共44页；当前第38页；编辑于星期二\1点54分结合同位素的单抗-----生物导弹单抗放射性同位素本文档共44页；当前第39页；编辑于星期二\1点54分制备单克隆抗体1、常规抗体获得的方法及其特点2、单克隆抗体制备的原理◆利用

产生特异性抗体的功能。◆利用

无限增殖的特性。◆利用

技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。◆利用

技术大量培养杂交瘤细胞。B淋巴细胞骨髓瘤细胞动物细胞融合动物细胞培养3、单克隆抗体的制备4、单克隆抗体的应用本文档共44页；当前第40页；编辑于星期二\1点54分项目动物细胞融合植物体细胞杂交原理细胞膜的流动性细胞膜的流动性和植物细胞的全能性融合前提分散成单个细胞去除细胞壁诱导方法聚乙二醇、离心、振动、电激、灭活病毒聚乙二醇、离心、振动、电激、结果获得杂种细胞或细胞产物获得杂种植株用途制备单克隆抗体培育作物新品种意义使远缘杂交成为可能克服远缘杂交障碍本文档共44页；当前第41页；编辑于星期二\1点54分⑶图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________

。B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC

1.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案⑴