超敏反应性疾病的免疫学检测方式

超敏反应性疾病的免疫学检测方式返回总目录目录激发试验

1IgE的检测2免疫复合物检测3抗球蛋白试验4药物过敏筛选实验

5超敏反应性疾病的免疫学检测方式

超敏反应（hypersensitivity）又称变态反应，是指机体再次接受相同抗原刺激后，发生的以组织细胞损伤或生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。

变应原（allergen）：引起超敏反应的抗原称之为变应原。

超敏反应

超敏反应性疾病的免疫学检测方式第一节激发试验激发试验（provocationtest）是模拟自然发病条件，用少量超敏原引起一次较轻的超敏反应发作，达到确定超敏原的一种体内试验。超敏反应性疾病的免疫学检测方式

非特异性激发：是用组胺等刺激物做雾化吸入，以观察患者对Ⅰ型超敏反应的敏感性，进而分析病因或判定疗效。特异性激发：是用抗原如尘螨等做试验，对明确超敏原有一定价值。用于Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应性疾病的检查。超敏反应性疾病的免疫学检测方式一、皮肤试验是在皮肤进行的体内免疫学试验，简称皮试。机制：Ⅰ型超敏反应超敏反应性疾病的免疫学检测方式Ⅳ型超敏反应超敏反应性疾病的免疫学检测方式皮内试验点刺试验（挑刺或刺痕试验）斑贴试验（一）试验类型及方法

超敏反应性疾病的免疫学检测方式（二）结果判定及分级标准速发型皮肤试验结果判定阳性反应以风团为主；点刺试验的阳性反应以红晕为主。迟发型皮肤试验结果判定阳性结果以红肿和硬结为主。

超敏反应性疾病的免疫学检测方式相同超敏原不同稀释度

速发型15～30min内观察

迟发型48～72h内观察～针4mm/针方法结果皮内试验超敏反应性疾病的免疫学检测方式

比皮内试验敏感性稍低，但假阳性较少；皮试液浓度要比皮内试验高10～100倍。将试验抗原与对照液分别滴于试验部位的皮肤上用针尖透过液滴轻挑一下以刺破皮肤而不出血为度1min后拭（吸）去试验抗原液点刺试验超敏反应性疾病的免疫学检测方式速发型皮肤试验的结果判定标准分级

皮内试验

点刺试验-无风团或小于阴性对照无风团反应或小于阴性对照+风团3～5mm、红晕＜20mm无风团,阴性对照＜红晕≤20mm++风团6～9mm伴红晕无风团，红晕＞20mm+++风团10～15mm伴红晕风团伴红晕++++风团＞15mm伴红晕和伪足风团伴红晕和伪足超敏反应性疾病的免疫学检测方式迟发型皮试结果判定标准反应程度

结果判定-无反应或小于阴性对照+仅有红肿++红肿伴硬结+++红肿、硬结、小疱++++大疱或/和溃疡超敏反应性疾病的免疫学检测方式第一次读：48小时打开斑试器,间隔30min待斑试器压痕消失后判定结果。第二次读：第3天或第4天。如怀疑光过敏，在斑贴试验的基础上给予紫外线照射，操作过程相似。斑贴试验超敏反应性疾病的免疫学检测方式斑贴试验结果判定标准反应程度结果判定

－无反应或小于阴性对照+轻度红肿、搔痒++明显红肿、时有红斑+++红肿伴皮疹、水疱++++红肿、水疱伴溃疡超敏反应性疾病的免疫学检测方式（三）结果分析及注意事项假阴性出现的常见原因：①皮试液的浓度过低或失效；②老年患者或过敏性休克或哮喘大发作之后；③皮试前用过抗组胺药或免疫抑制剂；④操作不当将皮试液注入皮下或注入量过少等。超敏反应性疾病的免疫学检测方式（三）结果分析及注意事项

假阳性出现的常见原因：①皮试液含有非特异性刺激物；②患者患有皮肤划痕征；③操作手法较重；④注入量较大或浓度过高；⑤注入少量空气等。超敏反应性疾病的免疫学检测方式询问病史阳性对照必备抢救药品和设施如何避免假性结果的出现：适应证阴性对照皮试液浓度超敏反应性疾病的免疫学检测方式（四）应用与评价预防药物或疫苗等过敏防治Ⅰ型超敏反应性疾病结核菌素试验评估机体细胞免疫功能预防皮肤接触过敏超敏反应性疾病的免疫学检测方式

结核菌素试验

是用结核菌素进行皮肤试验，通过观察局部是否出现迟发型超敏反应，判断机体有无结核分枝杆菌感染和对该菌的免疫力。超敏反应性疾病的免疫学检测方式阳性：机体已感染过结核杆菌或BCG接种成功；强阳性：可能有活动性结核病；阴性：机体未感染过结核分枝杆菌，但应考虑：①感染初期；②老年人；③重度结核病患者，机体处于免疫反应低下状态；④患有其他疾病。超敏反应性疾病的免疫学检测方式二、支气管激发试验手捏式雾化器bronchialprovocativetest,BPT

测定支气管吸入某种刺激性物质后产生收缩反应程度的方法，亦称气道反应性测定；吸入一定量的激发物；比较吸入前后肺通气功能指标；判断气道高反应性程度。超敏反应性疾病的免疫学检测方式雾化抗原颗粒≤5微米测定肺功能指标：用力肺活量(FVC)1秒用力呼气容积(FEV1)最大呼气流速(PEF)比气道传导率(sGaw)射流雾化器超敏反应性疾病的免疫学检测方式

特异性BPT将一定浓度的抗原刺激物装入雾化器中使受试者经口或鼻吸入雾化颗粒，其携带激发物在支气管树及肺泡沉积而起作用。非特异性BPT将一定浓度的激发物装入雾化器中，进行同特异性BPT的操作。吸气流速、雾化颗粒直径的大小以及气道通畅与否均可影响雾化颗粒在气道的沉积，从而影响气道的反应性。（一）试验类型及方法超敏反应性疾病的免疫学检测方式测基础肺功能激发物稀释液：低浓度/小剂量→双倍浓度/剂量递增阳性伴明显气促、喘息口吸入1～1分半钟测定肺功能阳性标准/明显不适/临床症状直至激发物达到最高浓度阴性反应支气管舒张剂吸入技术要点超敏反应性疾病的免疫学检测方式（二）测定指标及结果判断支气管反应有三种类型：速发、迟发和双重反应。每次观察不能小于24小时。FEV1：重复性好，结果稳定；PEF：峰流速仪价格低廉、方便、不受场地限制，与FEV1有较好的相关性，适合流行病学调查；sGaw：敏感性好，但重复性稍差。测定指标1超敏反应性疾病的免疫学检测方式

变应原的确定常以定性试验判断结果。①阳性：气道反应性增高

FEV1、PEF较基础下降≥20％或sGaw下降≥35%，有时伴有明显自觉症状或肺部闻及哮鸣音。定性判断2（二）测定指标及结果判断超敏反应性疾病的免疫学检测方式②阴性：气道反应性正常

FEV1、PEF或sGaw＜上述标准，正常值为阴性。无论激发试验阳性或阴性，均应排除气道反应性的影响因素。可疑者，间隔2～3周后复检或2个月后再测。定性判断2（二）测定指标及结果判断超敏反应性疾病的免疫学检测方式（三）注意事项及禁忌证

受试者在心肺功能不全、高血压、甲亢、妊娠、严重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情况下一般不适宜作激发试验；有过敏性休克，严重的血管性水肿及严重的喉头水肿病史者；一周之内预防接种、职业性过敏因素的接触等。禁忌证1超敏反应性疾病的免疫学检测方式受试者在检查前：48小时：停！抗组胺药、色甘酸钠及皮质激素类药;12小时：停！支气管扩张剂;15分钟：实验室休息,病史、体检排除BPT的禁忌证。注意事项2（三）注意事项及禁忌证超敏反应性疾病的免疫学检测方式基础FEV1占预计值70%以上才能进行试验。受试者应为哮喘患者病情稳定时或缓解期。吸入激发物的浓度应从小到大，逐渐递增。应备有急救器械、药品和有经验的临床医生在场。注意事项2（三）注意事项及禁忌证超敏反应性疾病的免疫学检测方式（四）应用与评价③①②④⑤⑥有一定的危险性，但较皮肤试验的特异性高与受试者的病史、症状和体征相关性较强确定支气管哮喘的过敏原，尤其皮试结果不肯定时排除皮试时的假阳性反应和假阴性反应检测新制剂的抗原性、平喘药疗效及观察脱敏效果缺点是每次仅能用一种抗原，要专门设备和技术，并需对病人进行训练并与之配合超敏反应性疾病的免疫学检测方式观察症状症状好转或减轻导致三、食物激发试验基础饮食吃可疑的过敏食物症状加重1周后疑似过敏原，重复3次确定某食物为过敏原症状未减轻1周后排除食物所致过敏超敏反应性疾病的免疫学检测方式四、其他方法口腔激发试验将超敏原直接与口腔黏膜接触，当口腔黏膜出现肿胀和充血时，可判断为阳性反应。

结膜激发试验将超敏原滴于一眼，阳性反应为结膜充血、水肿、分泌增加、搔痒，甚至眼睑红肿。注意假阳性对结果的干扰。鼻黏膜激发试验将抗原吸入/滴入受试者鼻腔，出现鼻黏膜水肿、苍白、鼻痒、流涕、喷嚏为阳性。

返回章目录超敏反应性疾病的免疫学检测方式第二节IgE的检测

一、IgE的测定CLIA敏感度更高，特异性高，定量

测定方法固相RIA是较传统的IgE检测方法ELISA双抗体夹心法，操作简便，敏感性很高，是测定血清IgE最常用的方法超敏反应性疾病的免疫学检测方式

临床意义正常人群血清IgE水平受地域环境、种族、遗传、年龄、性别、寄生虫感染、测定法及取样等影响，结果有一定差异。参考值～某些过敏体质者高于正常1000～10000倍血清IgE高特应症、支气管肺曲菌病、药物性间质性肺炎、麻风、寄生虫病及IgE型骨髓瘤等超敏反应性疾病的免疫学检测方式二、特异性IgE的测定

用纯化的过敏原去检测相应的IgE抗体的一类试验。①酶联免疫吸附试验：常用间接法测特异性IgE。②免疫印迹技术：操作简单，能一次性测定多种变。应原的特异性IgE，故临床已普遍采用IBT法。超敏反应性疾病的免疫学检测方式4.底物显色2.待检特异性

IgE抗体1.已知变应原包被载体（+）YYY3.酶标动物抗人IgEYYYYEYEYEYYYYEYEYE洗涤洗涤洗涤结果ELISA间接法检测特异性IgE超敏反应性疾病的免疫学检测方式特异性变应原加入待检血清转印至NC膜NC膜待检血清特异性IgE抗-IgE·HRP底物特异性抗原条带显色NC膜—变应原—特异性IgE—抗-IgE·HRPIBT检测特异性IgE返回章目录超敏反应性疾病的免疫学检测方式第三节免疫复合物检测免疫复合物（immunecomplex,IC）:指由抗原与相应的抗体结合而成的复合物。局部免疫复合物：沉积在机体的某一局部。循环IC（circulatingIC,CIC）：血液中存在的IC。

Ⅲ型超敏反应：在传染病或性病时，IC沉淀于局部后激活补体，最终导致组织损伤，形成IC病。超敏反应性疾病的免疫学检测方式抗原特异性IC抗原非特异性IC检测已知抗原与相应抗体形成的IC不考虑形成IC抗原的性质，检测未知抗原与相应抗体形成的IC总量超敏反应性疾病的免疫学检测方式一、抗原非特异性CIC检测技术CIC：分子量600kDa以上，沉降系数＞19S；热聚合人IgG(heatagglutinationhumanIgG,HAHG)：

作为参考标准品，绘制标准曲线进行CIC定量或测定

A值代表CIC相当于HAHG的含量。超敏反应性疾病的免疫学检测方式CIC的检测方法：按抗体分子在结合抗原后发生的物理学和生物学特性的改变而设计。①PEG比浊法;②ELISA法;③胞法——Raji细胞法;④抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验。超敏反应性疾病的免疫学检测方式（一）PEG比浊法1.基本原理聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）为

不带电荷、直链大分子结构的多糖，有强脱水作用，利用2%～4%浓度的PEG可选择性沉淀大分子CIC。2.技术要点生物化学检验。超敏反应性疾病的免疫学检测方式

①2%PEG沉淀大分子CIC；②4%PEG沉淀较小分子CIC；③超过5%PEG选择性沉淀CIC的特性消失；④温度影响极大，需进行温差校正；⑤低密度脂蛋白使浊度增加，空腹采血；⑥高γ球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加。3.注意事项超敏反应性疾病的免疫学检测方式（二）ELISA法1.基本原理ELISA法测定的CIC，是能够结合C1q的

IgG类抗体与其特异性抗原形成的CIC。2.技术要点将聚苯乙烯包被上C1q，加入受检血清，

CIC中IgG的Fc段与C1q结合，再加抗人IgG·HRP，形成C1q-CIC-抗人IgG·HRP复合物，加底物显色。超敏反应性疾病的免疫学检测方式①灵敏度高于PEG比浊法，检测到，重复性好等优点；

②C1q制品不易精制,纯品不稳定，只能检出与补体结合的CIC。3.方法评价超敏反应性疾病的免疫学检测方式（三）细胞法—Raji细胞法Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤分离建株似

B细胞系，在体外繁殖传代，细胞表面有高密度的

C1q、C3b、C3d等补体受体，而且不易脱落。1.基本原理超敏反应性疾病的免疫学检测方式

将定量待检血清、HAHG和Raji细胞混合，使补体、CIC或HAHG与Raji细胞形成复合物，加入抗人IgG·FIC，形成Raji细胞—补体—CIC(或HAHG)—抗人IgG·FIC复合物，检测荧光强度。2.技术要点超敏反应性疾病的免疫学检测方式①培养条件能改变Raji细胞其表面受体的数量及亲和性，影响检测敏感性;②待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体，能和Raji细胞反应;③SLE血清中的抗DNA也能和Raji细胞反应，使测定结果偏高。3.影响因素超敏反应性疾病的免疫学检测方式①敏感性高(6mg/LHAHG)，实用性强；②缺点需培养Raji细胞和同位素标记抗人IgG，操作繁琐;③Raii细胞培养较困难，不易长期稳定保持其特性，培养条件受限。4.方法评价超敏反应性疾病的免疫学检测方式（四）抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验1.基本原理IgG或IgM类自身抗体与IC中IgG的Fc段结合而不与游离IgG结合的特性，mRF与CIC亲和力较强。超敏反应性疾病的免疫学检测方式2.技术要点将mRF和待检血清中的CIC在琼脂凝胶中扩散，mRF—CIC结合形成沉淀现象，进行CIC定性或定量。3.方法评价敏感度较低100mg/L（HAHG），mRF来源受限，操作费时，难于常规应用。超敏反应性疾病的免疫学检测方式CIC检测方法的基本原理及敏感性比较方法原理

敏感性(mg/LHAHG)PEG比浊法溶解度20超速离心分子大小-分子超滤分子大小-凝胶过滤分子大小30ELISA法结合C1q0.1C1q液相法结合C1q10C1q偏离试验结合C1q1～5抗补体实验固定补体0.1mRF凝胶扩散法结合RF100mRF固相抑制法结合RF1～20抗抗体法结合Ig2～3Raji细胞法补体受体6花环抑制试验补体受体10超敏反应性疾病的免疫学检测方式二、CIC检测方法评价及应用自身免疫性疾病病程中连续动态观察或辅助诊断：①试验方法本身不完善；②IC形成的复杂性，如在生理状态下IC是由各种抗原与相应抗体所构成的，维持动态平衡。在病理状态下往往是单一种类IC增高，而此种单一成分增高发展到足以影响IC总体水平情况下，才能被试验检出。（一）检测方法评价超敏反应性疾病的免疫学检测方式①肾脏疾病：急性肾小球肾炎、移植肾、IgA肾病；②消化系统疾病：慢活肝炎、原发性胆淤性肝硬化；③皮肤病：荨麻疹、天疱疮、皮疹性皮炎；④Ⅲ型超敏反应性疾病：SLE、RA、硬皮症、自身免疫性溶血性贫血等。此外，CIC的检测对于肿瘤、肝癌、白血病、霍奇金病、神经肌肉萎缩性侧索硬化症等疾病的诊断。(二)临床应用超敏反应性疾病的免疫学检测方式

固定或沉积于病变局部组织中的IC测定常用免疫组化技术，如荧光免疫组化技术检测到组织标本有Ig和补体。受累组织的成分、构型和特定的部位可为疾病的严重程度和预后提供依据。三、沉积于组织中IC的测定返回章目录超敏反应性疾病的免疫学检测方式类型第四节抗人球蛋白试验(Coombs试验)不完全抗体：抗体分子较短小，只能与颗粒抗原一方相结合，不出现可见的凝集现象，但能封闭抗原决定簇，使其不能再与完全抗体结合。超敏反应性疾病的免疫学检测方式抗人球蛋白试验（antiglobulintest,AGT）：将人球蛋白注入异种动物，诱导动物产生抗人球蛋白血清（antiglobulinserum，AGS)，AGS加入表面结合有不完全抗体的红细胞复合物中，就能出现可见的凝集现象。超敏反应性疾病的免疫学检测方式作用：检测红细胞表面结合的不完全抗体。临床意义：新生儿溶血症和自身免疫性溶血性贫血的诊断。RBC为Rh+7S的IgG体内发生+抗IgG体外测试抽血一、直接抗球蛋白试验超敏反应性疾病的免疫学检测方式检测游离在血清中的不完全抗体或红细胞表面的抗原RBC为Rh+不完全抗体试剂+抗IgG体外测试二、间接抗球蛋白试验超敏反应性疾病的免疫学检测方式间接Coombs试验各反应物加入量反应物受检管阳性对照阴性对照血清（受检或已知）2滴——5%红细胞悬液(已知或受检)1滴——不完全抗D血清—2滴—AB型血清——2滴5%Rh阳性红细胞悬液—1滴1滴1技术要点超敏反应性疾病的免疫学检测方式

凝集为阳性，表明受检血清有不完全抗体或红细胞上有相应抗原；同时具备阳性对照管凝集阴性对照管不凝集，如有不完全抗体，可将血清以作倍比稀释进行效价测定。2结果判断超敏反应性疾病的免疫学检测方式①在37℃水浴中，抗体吸附相应红细胞上的结合程度，与致敏的时间、离子强度有关；②离心速度和时间十分重要，原则应以最小的离心力和最短的离心时间使阳性对照管出