免疫浊度分析仪－2015-11

第四节免疫浊度分析仪

第十一章抗原抗体反应类型1)沉淀反应：免疫浊度分析2)凝集反应3)补体参与的反应4)中和反应5)标记免疫抗原抗体反应的特点特异性:可逆性：非共价键结合，为可逆反应，可解离最适比例性：比例合适，结合反应强反应的阶段性：分特异性结合阶段和可见阶段第一阶段：抗原抗体结合阶段速率比浊第二阶段：形成大的免疫复合物终点比浊最适比例性免疫浊度测定的自动化原理：光学测量＋自动化分析＋免疫沉淀反应历史：1.终点法1959年，Schultze建立透射比浊法：光线吸收的量与IC形成的量成正相关。1967年，Ritchie提出了散射比浊法，依照散射光强度求得抗原量。2.速率法1977年，Sternberg提出速率散射比浊法（RateNephelometry)Δ一、免疫浊度分析法概述(一)免疫浊度法基本原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合在二者比例合适、并有一定浓度的电介质存在时，产生一定大小的不溶性的复合物颗粒使反应液出现浊度，形成光的折射或吸收测定这种折射和吸收后的光作为计算单位的测定方法。

单色器透射比浊计散射比浊计散射比浊和透射比浊的区别示意图θ透射光散射光散射光(二)免疫浊度法的分类按测定形式分：透射比浊测定法

散射比浊测定法按抗原抗体复合物形成的速度分：终点浊度法速率浊度法(二)免疫浊度法的分类透射比浊测定法在光源的光路方向（0°）测量透射光强度和被检溶液微粒浓度关系的方法称透射比浊测定法。透射光强度与抗原抗体复合物的量成反比。散射比浊测定法在光路的5°～96°角的方向上测量散射光强度和被测溶液中微粒浓度关系的方法称散射比浊测定法。散射光的强度与复合物的含量成正比。二、免疫浊度分析仪免疫浊度法的优点：校正曲线稳定简便快速易于自动化无放射性核污染两种常用仪器：IMMAGE系统：速率散射比浊BN系统：定时散射比浊二、免疫浊度分析仪散射免疫比浊的基本原理：散射比浊法（nephelometry）是指一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液时遇到抗原抗体复合物粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，产生散射光。散射光强度与复合物的含量和体积成正比，通过测量散射光的强度，可计算出待测抗原的浓度。利用速率散射比浊分析原理。检测悬浮于缓冲液中的抗原抗体免疫复合物颗粒。在抗体过量的前体下，悬浮颗粒通过光束时所产生的散射光速率变化强弱与抗原浓度成正比。即速率峰值的高低与抗原的量成正比。代表机型：Beckman-Coulter公司的ARRAY.360(一)ARRAY分析系统－基本原理抗原浓度递增散射光峰值峰值信号与抗原抗体反应之间的关系图ABCDFGHIIMMAGE抗原过量检测系统设计原理：两次添加抗原若出现两个速率峰值信号：抗体过量；若出现一个速率峰值信号：抗原过量，需稀释抗原反应时间（秒）06085散射率抗体过量抗原过量第二峰值信号抗原量检测速率峰值信号产生(二)BN特定蛋白测定系统定时散射比浊分析（fixedtimenephelometry)德国的Behring

Nephelometer，现为SIEMENS代表机型：DadeBehring公司的BN-Prospec、BN-Ⅱ等BN-Ⅱ可测量三种情况下的散射光：---反应结束后终点测量---在两个预定时间下的信号差异定时动力学测量*---反应过程中持续测量VLinIntegral定时散射比浊分析－基本原理采用的是免疫沉淀反应与散射比浊分析相结合的技术。采用抗体过量的原理来保证抗原抗体反应中形成不可溶性小分子颗粒。由于免疫沉淀反应是在抗原抗体相遇后立即开始，在极短的时间内反应介质中散射信号变动很大；此时计算峰值信号而获得的结果会产生一定误差，因此在测定散射信号时不与反应开始同步，而是推迟几秒钟。抗原过量检测系统为保证检测时获取的信号峰值是由被检抗原产生，本方法采用双重保证措施：抗体过量：每一个项目的检测范围都预置很大对抗原过量进行阈值限定：设定阈值自动散射免疫分析中应注意的问题伪浊度的影响，产生伪浊度的因素很复杂，主要是：抗血清的质量，会有非特异的交叉反应性抗体成分，污染和变质等。增浊剂浓度和反应时间等掌握不当。样品本身浊度及处理不当：脂血、灰尘器材（包括比色杯）清晰度等。自动散射免疫分析中应注意的问题钩状效应的影响（发生了抗原过量）样品稀释后复测当病人症状与检验结果明显不符合时，应怀疑其