第四章内分泌系统体外分析技

第四章内分泌系统体外分析技第一页，共三十四页，编辑于2023年，星期五目的要求：掌握:放射免疫的基本原理熟悉:放射免疫的临床应用。了解:放射免疫的必备条件、质量控制、体外配体结合分析的种类及方法。第二页，共三十四页，编辑于2023年，星期五

第一节

放射免疫分析

radioimmunoassayRIA第三页，共三十四页，编辑于2023年，星期五原理*Ag+Ab←─→*Ag-Ab+*Ag

+

Ag↑↓Ag-Ab+Ag1.一定量的*Ag和Ab2.*Ag和Ag的总量大于Ab上的有效结合位点时，3.*Ag-Ab的形成量随着Ag量的增加而减少，呈反比关系。第四页，共三十四页，编辑于2023年，星期五(二)标准曲线(standardcarve)1234567加入一定量*Ag和Ab100μl加入一定量Ag：100μl

1-0ng/L2-50ng/L3-100ng/L

4-200ng/L5-400ng/L6-800ng/L

7-1600ng/L3.分离第五页，共三十四页，编辑于2023年，星期五第六页，共三十四页，编辑于2023年，星期五第七页，共三十四页，编辑于2023年，星期五1.加入一定量*Ag和Ab100μl2.加入一定量Ag：100μl

病人1?ng100μl病人2?ng100μl病人3?ng100μl3.分离病人标本分析123第八页，共三十四页，编辑于2023年，星期五测量结果测量值30%测量值54%测量值75%第九页，共三十四页，编辑于2023年，星期五二、必备条件特异性抗体1.亲和力（affinity）2.抗体的特异性（specificity）3.抗血清滴度(antiserumtiter)一般以B%为30～50%的抗体稀释度为最佳稀释度第十页，共三十四页，编辑于2023年，星期五二、必备条件标记抗原（radionuclidelabeledantigen，*Ag）1.标记抗原包括:抗原(纯度要高)。放射性核素主要有125I、3H。2.对标记抗原的要求

（1）比活度（specificactivity）

（2）免疫活性（immuneactivity）

（3）放化纯度(radiochemicalpurity)

（4）便于放射性测量（radionuclide

counter）第十一页，共三十四页，编辑于2023年，星期五二、必备条件标准品1.应选用纯度高的不含杂质的抗原做标准；2.采用化学结构、免疫活性都与被测抗原一致的抗原做标准；3.标准定量一定要精确。第十二页，共三十四页，编辑于2023年，星期五二、必备条件

分离技术1.双抗体法（doubleantibodymethod）2.沉淀法(precipitationmethod)也称PEG法3.双抗体法＋沉淀法（doubleantibodymethod＋precipitationmethod）。4.吸附法(adsorptivemethod)

5.固相法(solidphasemethod)第十三页，共三十四页，编辑于2023年，星期五测量仪器第十四页，共三十四页，编辑于2023年，星期五测量仪器第十五页，共三十四页，编辑于2023年，星期五三、测定方法1.加样2.孵育3.分离4.测量5.数据处理第十六页，共三十四页，编辑于2023年，星期五四、主要技术指标（一）精密度（precision）又叫重复性，是对已知的同一样品重复测定结果的一致程度1.用变异系数（CV）来表示批内CV＜5%，批间CV＜5～10%。2.反应误差关系（RER）用以反映整批实验误差的综合指标，RER应＜0.04。3.精密度图(precisionprofile)常用的精密度图是以CV为纵坐标，相应的剂量为横坐标的反应曲线，按实验要求，通常采用CV≤10%第十七页，共三十四页，编辑于2023年，星期五四、主要技术指标(二)准确度(accuray)

指测定值接近“真值”的程度。用回收率来判定。回收率=测定值/真实值X100%。一般要求达到90～110%第十八页，共三十四页，编辑于2023年，星期五四、主要技术指标（三）灵敏度(sensitivity)

指可检出的最小浓度

第十九页，共三十四页，编辑于2023年，星期五四、主要技术指标(四）特异性(specificity)

用交叉反应来判断。交叉反应（crossreaction）越小，特异性越好。第二十页，共三十四页，编辑于2023年，星期五

四、主要技术指标（五）可靠性

又称健全性(perfecty)，是指被测物与标准品的免疫活性是否相同的指标。借助标准曲线与样品稀释曲线的平行性分析来判断方法的可靠性，平行性好即可靠性好。第二十一页，共三十四页，编辑于2023年，星期五五、质量控制1.最高结合率（B0%）要求最大结合率在30-50%。2.非特异结合率（NSB%）应＜5%～10%。3.标准曲线直线回归的参数要求a、b稳定，r＞0.99。4.ED25，ED50，ED75标准曲线的结合率在25%，50%，75%时对应的抗原浓度值，它反映标准曲线的稳定性，有助于批间结果的比5.反应误差关系（RER）：是评价RIA整批误差的指标，应＜4%。

第二十二页，共三十四页，编辑于2023年，星期五五、质量控制6.质控图有下列情况之一者，其结果应予舍弃：①三种QCS有一个测定值＞3S。②三种QCS中在同一方向上有两种＞2S。③三种QCS均在同一方向上＞1S

。第二十三页，共三十四页，编辑于2023年，星期五六、临床应用内分泌代谢系统疾病检测项目1.TT4甲亢甲减

2.TT3甲亢甲减

3.FT4甲亢；甲减结果不受TBG4.FT3甲亢；甲减。结果不受TBG5.TSH

原发性甲减；继发性甲减6.rT3甲亢；甲减；低T3综合征

7.TGAb）＜30%慢性淋巴细胞性甲状腺炎8.TMAb＜15%慢性淋巴细胞性甲状腺炎

9.TRAb＜13U/L

Graves病第二十四页，共三十四页，编辑于2023年，星期五第二节

免疫放射分析法（Immunoradiometricassay,IRMA）第二十五页，共三十四页，编辑于2023年，星期五一、原理将放射性核素标记在抗体(*Ab)上,过量的*AbAg与Ag-*Ab呈正相关。反应式：

Ag+*Ab→Ag-*Ab+*Ab

第二十六页，共三十四页，编辑于2023年，星期五IRMA与RIA的主要区别表第二十七页，共三十四页，编辑于2023年，星期五第三节

其他体外放射分析法第二十八页，共三十四页，编辑于2023年，星期五一、放射性受体分析方法原理（Radioreceptorassay，RRA）放射性核素标记受体的配体(ligand)测定受体－配体复合物的放射性计数，而达到对受体进行定量的分析。

第二十九页，共三十四页，编辑于2023年，星期五二、竞争性蛋白质结合分析法

(Competitiveproteinbindingassay,CPBA)

是一种以血清中的激素结合蛋白代替抗体或受体作为结合剂对激素等生物活性物质进行定量分析的技术。第三十页，共三十四页，编辑于2023年，星期五三、酶放射分析法

Radiometricassayofenzymatic,REA）用放射性核素标记酶的底物进行酶的活力测定。即以特异酶作为结合剂，通过测定标记产物的放射性来反映待测酶的活性的一种分析方法。如蛋白激酶测定环核苷酸。第三十一页，共三十四页，编辑于2023年，星期五四、放射微生物分析法

(Radiomicrobiologicassay)以特异微生物作为结合剂的分析方法。如用某种微生物测定叶酸。第三十二页，共三十四页，编辑