细胞工程第二清洗与消毒详解演示文稿

细胞工程第二清洗与消毒详解演示文稿本文档共36页；当前第1页；编辑于星期日\22点25分（优选）细胞工程第二清洗与消毒本文档共36页；当前第2页；编辑于星期日\22点25分方法：物理灭菌法+化学消毒法1.物理灭菌法：A：紫外线法：无菌室、超净工作台大面积消毒。B：高压蒸汽法：玻璃器皿、滤器、胶塞、解剖用具及耐热液体。C：过滤除菌法：含不耐热成分培养基、试剂等。2.化学消毒法：实验室、无菌室、物体表面消毒。本文档共36页；当前第3页；编辑于星期日\22点25分1.玻璃器皿清洗：玻璃器皿用于培养细胞、细胞冻存、培养用液的存放等。提供细胞生长的玻璃表面不但要清洗干净，而且要带适当的电荷。苛性碱清洗剂会使玻璃表面带的电荷不适于细胞附着。需以HCl或H2SO4中和。本文档共36页；当前第4页；编辑于星期日\22点25分一般玻璃器皿的清洗分为4个步骤。A：浸泡：首先清水浸泡，用以软化和溶解；再采用5%盐酸浸泡过夜；新的玻璃器皿在生产过程中常使玻璃表面呈碱性，并带有一些如铅和砷等对细胞有毒的物质，采用酸处理可消除。本文档共36页；当前第5页；编辑于星期日\22点25分B:刷洗：一般多用毛刷和洗涤剂或洗衣粉洗涤，以去除器皿内外表面的杂质（防止损伤器皿表面，不留死角）。C:浸酸：清洁液由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水配制而成。具有很强的氧化作用，去污能力很强，对玻璃器皿无腐蚀作用。清洁液：红棕色（有效）--绿色（失效）本文档共36页；当前第6页；编辑于星期日\22点25分D：冲洗：玻璃器皿经浸泡后，第一步，使用流水彻底冲洗，每个器皿用流水灌满、倒掉，须重复十次以上，直至清洁液全部冲洗干净，不留任何残迹为止。本文档共36页；当前第7页；编辑于星期日\22点25分清洁液配制比例本文档共36页；当前第8页；编辑于星期日\22点25分细胞培养物品清洗所需配制的清洁液强度通常为次强液。新配制的清洁液呈棕红色，经多次使用、水分增多或遇有机溶剂时变为绿色，此时表示清洁液已失效，应废弃而重新配制。

本文档共36页；当前第9页；编辑于星期日\22点25分本文档共36页；当前第10页；编辑于星期日\22点25分安全：配制过程中，应先将重铬酸钾完全溶解于蒸馏水中(必要时可加热帮助溶解)，然后缓慢加入浓硫酸。由于加入浓硫酸时将产生热量，因此配制的容器宜用陶瓷或塑料器皿。一般浸泡过夜，或至少为6h以上。本文档共36页；当前第11页；编辑于星期日\22点25分2.玻璃滤器：玻璃滤器以烧结玻璃为滤板，固定在玻璃漏斗上。主要用于各种培养用液的过滤除菌，不宜单独过滤血清等粘稠液体，容易堵塞滤板小孔。此种滤器只能连接真空泵在负压条件下抽滤，不能施加正压。

本文档共36页；当前第12页；编辑于星期日\22点25分a．自来水漂洗：用洗衣粉掠洗(不得使用毛刷)过夜。b．自来水抽滤3—5遍至无白沫，水滴滤过夜。c．清洁液抽滤1遍，清洁液滴滤过夜。d．自来水漂洗抽滤5遍，水滴滤过夜。e.蒸馏水抽滤3遍，蒸馏水滴滤过夜。f．二蒸水抽滤2遍，三蒸水滴滤过夜，漂洗。g．烤干备用。本文档共36页；当前第13页；编辑于星期日\22点25分3.胶塞、盖子等杂物：

清洗过程中，初次使用的胶塞因带有滑石粉，应先用自来水冲洗于净，再进行常规清洗；使用后的胶塞、盖子应及时浸泡在清水中，然后用洗涤剂刷洗。用蒸馏水漂洗2—3次,最后三蒸水漂洗1次。晾干备用。

本文档共36页；当前第14页；编辑于星期日\22点25分4.塑料器皿：用后立即以流水冲洗干净或浸入清水中，防止干涸。超声波清洗机内加入少量洗涤剂清洗30min,流水彻底冲洗干净；清洁液浸泡过夜，流水彻底将残留清洁液冲洗干净，蒸馏水漂洗2—3次．三蒸水漂洗2次，晾干备用。

本文档共36页；当前第15页；编辑于星期日\22点25分5.包装：一般用皱纹包装纸、硫酸纸、牛皮纸、棉布等作为包装材料；对培养瓶、滤器、存放培养液用贮液瓶、吸管和胶塞(或培养瓶盖子)等物品的容器瓶口部分做局部包装密封，再用牛皮纸、玻璃纸或布包起来备用。本文档共36页；当前第16页；编辑于星期日\22点25分

二、消毒玻璃培养瓶，移液管，试管等玻璃器皿？超净工作台台面？金属手术器械？不耐热的液体培养基和胰蛋白酶等？橡胶塞和塑料瓶盖等？细胞培养室？操作人员的手部？实验室桌面、地面等？本文档共36页；当前第17页；编辑于星期日\22点25分（一）重要概念1.消毒：杀死物体上病原微生物的方法；并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物2.灭菌：杀死物体上所有微生物的方法。3.防腐：防止或抑制微生物生长繁殖的方法。4.无菌：不存在活的微生物。5.无菌操作：防止微生物进入机体或局部环境的操作技术。消毒与灭菌本文档共36页；当前第18页；编辑于星期日\22点25分（二）消毒灭菌的方法根据材料的要求可采用不同的消毒灭菌方法。总的说来有物理方法及化学方法两大类。培养用品的消毒灭菌本文档共36页；当前第19页；编辑于星期日\22点25分1.物理消毒a.火焰：可直接用酒精火焰加热的实验器械。b.射线消毒（电离辐射消毒）：钴60（60Co）；量大和不适用高压和过滤的培养用品；用于牛血清、塑料制品、玻璃制品；不适用于活的生物材料。

c.紫外线消毒：空气、操作台表面。紫外灯距地面2.5米。作用原理。d.干热消毒：玻璃器皿；160度保持2小时e.湿热消毒：布类、胶塞、金属器械、玻璃器皿某些液体;物品不宜过满；液体和橡胶制品10磅（65KPa115℃）10分钟；布类、金属器械、玻璃器皿15磅℃）20分钟。f.滤过消毒：培养用液；0.22μm微孔滤膜本文档共36页；当前第20页；编辑于星期日\22点25分2.化学消毒：消毒剂：2%来苏尔（煤酚皂）、甲醛、环氧乙烷、氯已定、戊二醛、碘伏、0.5%过氧乙酸、0.1%新洁尔灭（常用）

、70％（或75％）酒精（常用）。3.抗生素消毒：青霉素、链霉素。4.气体消毒：37％甲醛加热沸腾后，加适量高锰酸钾，关门窗1～3天。本文档共36页；当前第21页；编辑于星期日\22点25分（三）消毒剂的主要种类及应用本文档共36页；当前第22页；编辑于星期日\22点25分本文档共36页；当前第23页；编辑于星期日\22点25分（四）影响消毒灭菌效果的因素（1）消毒剂的性质、浓度与作用时间（2）微生物的污染程度（3）微生物的种类和生活状态（4）环境中有机物（5）温度、湿度、酸碱度（6）化学拮抗物本文档共36页；当前第24页；编辑于星期日\22点25分三、过滤除菌法负压？正压？

用于遇热易发生变性而失效的试剂或培养用液本文档共36页；当前第25页；编辑于星期日\22点25分过滤除菌装置

本文档共36页；当前第26页；编辑于星期日\22点25分常用的滤器有以下几种①zeiss滤器：这种滤器为不锈钢的金属结构。中间央有一层石棉制成的一次性纤维滤板。滤板有一定的厚度，可承受一定的压力，因此是过滤血清等粘稠液体较理想的滤器。本文档共36页；当前第27页；编辑于星期日\22点25分本文档共36页；当前第28页；编辑于星期日\22点25分培养液过滤除菌装置本文档共36页；当前第29页；编辑于星期日\22点25分②玻璃滤器；这种滤器为玻璃结构，以烧结玻璃为滤板固定于玻璃漏斗上，可用于过滤除血清等粘稠液体以外的各种培养液体，只能采用抽滤式。根据滤板孔径的大小，分G1-G6六种规格型号，其中只有G5及G6可用以滤过除菌，一般都使用G6型。其缺点是速度较慢。本文档共36页；当前第30页；编辑于星期日\22点25分本文档共36页；当前第31页；编辑于星期日\22点25分微孔滤膜滤器：这种滤器的基本结构与Zeiss滤器相同，其中间为一种一次性的特制混合纤维素脂滤膜。滤膜的规格很多，主要根据滤器的直径大小而划分其型号，可按待滤过的液体的量来选择适当的型号。本文档共36页；当前第32页；编辑于星期日\22点25分微孔滤膜滤器可为加压式（正压式）或抽滤式，由于加压式微孔滤膜滤器