2023年高考生物二轮复习讲义江苏专版：第一部分 七 生物技术实践

专题七I生物技术实践

点清二线明;；面广三专题主干知识整合

［建议］学前理一理，平时翻一翻，考前忆一忆

［理清——知识联系］

果酒和果醋的制作原理、流程传统发DNA的粗提取与鉴定

酵技术专

微生

腐乳的制作原理、流程的应用专生题

生物探究加施洗衣粉的洗涤效果

题物的学

物

学利用什

技术

什和生么

技酵母细胞的固定化

培养其、无菌技术微生物么物技在其

术

的培养术在他方

平板划线法、稀和涂布平板法

与应用食品

实面的

加工

中的践应用DNA的粗提取与鉴定

微生.物的培养、分需与计数应用高考考什么

高考考什么牌的应用

传统发酵技术的应用

［记清——主干术语］

1.制作果酒、果醋、腐乳、泡菜利用的微生物分别是酵母菌、

醋酸菌、毛霉（主要）和乳酸菌，异化作用类型分别是兼性厌氧型、需

氧型、需氧型、厌氧型。

2.制作果酒和果醋的实验流程：挑选葡萄一冲洗一榨汁一酒精

发酵一醋酸发酵。

3.制作果酒和果醋的发酵装置中充气口的作用是在醋酸发酵时

连接充气泵进行充气，排气口是在酒精发酵时排出JCQz,出料口用

来取柱。

4.制作果酒时温度一般控制在比洛S，时间为1也;114,

前期需氧后期丕需氧;制作果醋时温度控制在3。〜35℃，时间为h

8d,始终需氧。

5.毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分

子的肽和氨基酸，脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。

6.腐乳制作的实验流程：让豆腐上长出毛霉一加盐腌制一加卤

汤装瓶一密封腌制。

7.加盐腌制时间约为左右，配制卤汤中的酒的含量一般控

制在12%左右。

8.用盐腌制时，注意控制盐的用量：盐的浓度过低，缺乏以抑

制微生物的生长,可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳

的口味。食盐的作用：抑制微生物的生长，防止腐败变质；析出水分,

使豆腐变硬，在后期制作过程中不易酥烂；调味作用，给腐乳以必要

的咸味；浸提毛酶菌丝上的蛋白酶。

9.配制卤汤：卤汤直接关系到腐乳的色、香、味。卤汤是由酒

及各种香辛料配制而成的。酒的作用：防止杂菌污染以防腐；与有机

酸结合形成酯，赋予腐乳风味；酒精含量的上下与腐乳后期发酵时间

的长短有很大关系，酒精含量越高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使

腐乳成熟期延长；酒精含量过低，蛋白酶的活性高，加快蛋白质的水

解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，难以成块。

10.微生物培养基的成分一般包括水、无机盐、碳源、氮源及生

长因子等。

11.消毒指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体外表或内部

的局部微生物（不包括芽抱和抱子）。灭菌则是指使用强烈的理化因素

杀死物体内外所有的微生物，包括芽胞和泡子。

12.制备固体培养基的步骤包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平

板等。

13.纯化微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布垩板

法，平板划线法可以别离微生物但不能对微生物进行让数，稀释涂布

平板法既可别离微生物也可以对微生物进任计数。

14.平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基外表连续划线的

操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的外表。在数次划线后培

养，可以别离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就

是菌落。

15.稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不

同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的外表，进行培养。分为

系列稀费操作和涂布里板操作两步。

16.对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。对于需要

长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

17.DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在浓度0JL4

取皿&的NaCl溶液中溶解度最低。

18.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质可溶于酒精,

可利用冷却的酒精对提取的DNA进行纯化。

19.在鸡血细胞液中参加一定量蒸储水并用玻璃棒搅拌，过滤后

收集滤液，可获取含DNA的滤液；切碎洋葱，参加一定量洗涤剂和

食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液，可获取含DNA的滤液。

20.处理植物组织时需要进行研磨，其目的是破碎细胞壁，使核

物质容易溶解在NaCL溶液中；研磨不充分会使DNA的提取量减少,

影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二差胺鉴定不显示蓝色等。

21.用二苯胺鉴定DNA,在沸水浴的条件下呈现蓝色。

22.目前常用的加酶洗衣粉的酶制剂有四类：蛋自醒、崩肪醵、

淀粉酶和纤维素酶，其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋自醵

和碱性脂肪蹶

23.探究加酶洗衣粉与普通洗衣粉洗涤效果的实验自变量是洗衣

粉的种类;探究加酶洗衣粉洗涤的最正确温度条件实验的自变量是水

的温度。

24.一般来说，酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定，而细

胞多采用包埋法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的

难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。

25.酵母细胞固定化的步骤：酵母菌的活化一配制CaCL溶液一

配制海藻酸钠溶液一海藻酸钠溶液与酵母菌细胞混合f固定化酵母

细胞。

26.如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度

偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆

形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。

［澄清——思维误区］

关注点1误认为兼性厌氧与“有氧、无氧〃都一样

［澄清］酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，大量繁殖；在无氧

条件下，进行无氧呼吸产生酒精和CO2,产生的酒精对其他微生物

和酵母菌本身都具有毒害作用，所以在无氧条件下酵母菌不能大量繁

殖。

关注点2误认为酿酒和酿醋所利用的微生物相同

［澄清］酿酒和酿醋所利用的微生物不同，前者为酵母菌——真

核生物；后者为醋酸菌——原核生物。二者本质区别是有无以核膜为

界限的细胞核。

关注点3不明确腐乳前期发酵和后期发酵的作用

［澄清］前期发酵的主要作用是创造条件让毛霉生长，使毛酶形

成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期发酵主要是酶与微生物协同参与生

化反响的过程，即通过各种辅料与腐乳的缓慢水解作用，生成腐乳的

香气。

关注点4误认为腐乳制作中食盐的作用只是调节风味

［澄清］食盐在腐乳制作中的作用有：①析出豆腐中的水分，有

利于豆腐块成形；②抑制杂菌；③形成腐乳的风味；

④杀死毛霉等微生物，有利于菌体内蛋白酶、脂肪酶等发挥作用。

关注点5不明确影响腐乳口味的因素有哪些

［澄清］影响腐乳口味的因素有：①豆腐的含水量；②盐的用量;

③酒的用量；④香辛料的种类和用量；⑤其他辅料的种类；⑥发酵温

度和时间。

关注点6不能区分选择培养基和鉴别培养基

［澄清］按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴别

培养基。选择培养基是指在培养基中参加某种化学物质，以抑制不需

要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。如在某培养基中参加

青霉素，则能抑制细菌的生长，对真菌的生长无影响。鉴别培养基是

根据微生物的特点，在培养基中参加某种指示剂或化学药品配制而成

的，用以鉴别不同类别的微生物。如伊红美蓝培养基能指示大肠杆菌

的存在。

关注点7平板冷凝后，不明确平板倒置的目的

［澄清］平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基外表

的湿度也比拟高，将平板倒置，既可以使培养基外表的水分更好地挥

发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

关注点8不了解影响加酶洗衣粉洗涤效果的因素

［澄清］影响加酶洗衣粉洗涤效果的因素有水温、水量、水质、

洗衣粉的用量，衣物的质料、大小及浸泡时间和洗涤的时间等。在实

验中应控制好自变量之外的无关变量。

关注点9不明确酵母细胞固定化实验中，海藻酸钠和氯化钙的

作用

［澄清］海藻酸钠作为酵母菌的包埋剂。氯化钙能与海藻酸钠反

响，形成凝胶珠。

关注点10不明确DNA粗提取和鉴定实验中，两次使用蒸储水

的作用

［澄清］第一次加蒸储水，使鸡血细胞吸水涨碳；第二次加蒸馆

水，使含DNA的NaCl溶液浓度降低，析出DNA分子。

专题复习2®

主攻点之（一）

传统发酵技术和微生物的利用

且基础主干知识⑥一网打尽（基稳才能楼高）

1.传统发酵技术的应用（填图）

⑴果酒和果醋的制作：

i挑选一一一m冲洗一榨汁一团酒精发酵一醋酸发酵：

实验流程

条件控制1计条件控制

果

果国18〜25C温度⑷30〜35匕

醋

酒

制

制先通气，后国密封空气全程⑹通气

作

作

肉10〜12d时间〜8d

⑵腐乳的制作:

①制作原理：

空气中的一些真菌.［1^］—起主要作用的是由毛霉

蛋白质芸，子的迦，咽蟠

②实验流程及影响因素:

证复腐E而连应二遍遍i二加面拓痂二i国城;

二一

口验流至）

I70%|~~|含水量J一）雨T毛坯:盐=Q"I

|四5〜18式1温度匕［---------1团12%|

I发酵时间I希痂

2.图解识记微生物的培养、别离与计数（填图）

|在平板划线法L——―X释稀涂布平板平］

汨

种

微消H酒精等化学药物I

生

pH、02等物

的毒

无菌U②紫外线消毒一

培

养

怛碳源M犯源、水、T灼烧灭菌

|无腌N长因子U1

灭I干热灭菌

菌

应

利用⑹选择培养用微生物实例「I分解尿素的细菌|

基对微生物筛选的分离分解纤维素的细菌I

|显微镜直接计薮｝微生物的•!图稀释涂布平藤

计数方法

研考占

高频考点⑥一包在内（方向比努力更重要）

［考什么考点•考法探究］

考点（一）果酒'果醋和腐乳的制作

1.（2017・江苏高考）（多项选择）如图是探究果酒与气体喝簪腮

果醋发酵的装置示意图。以下相关表达正确的选项是

）

A.改变通入气体种类，可以研究呼吸作用类型

对发酵的影响

果酒发酵中期通入氮气，酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼

吸

C.果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关

D.气体入口与气体出口可以交换使用

解析：选ABC改变通入气体的种类，例如分别通入氮气和氧

气，可研究无氧呼吸和有氧呼吸对发酵的影响；果酒发酵中期通入氮

气，更利于创造无氧条件，酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼吸；果

醋发酵的菌种是醋酸杆菌，其生长的适宜温度是30〜35℃,温度能

影响醋酸杆菌的代谢，从而影响果醋的发酵周期；气体的入口必须伸

入培养液中，气体出口不能伸入培养液中，如果气体的入口和出口交

换，会导致发酵液喷出。

2.（2016•江然高考）以下关于中学“腐乳的制作”实验，表达正

确的选项是（）

A.加盐主要是为了调节水分，利于毛霉生长

B.加料酒主要是为了灭菌，防止腐败变质

C.发酵过程中起主要作用的是乳酸杆菌

D.实验室制作的腐乳不宜直接食用

解析：选D加盐主要是为了抑制杂菌的生长，同时也可析出水

分，有利于腐乳成形，因此加盐的目的主要是抑制杂菌生长而不是调

节水分；加料酒可以抑制微生物的生长，同时能使腐乳具有独特的风

味，但不能灭菌；在腐乳制作的发酵过程中起主要作用的是毛霉；实

验室制作的腐乳因未经质量鉴定，不宜直接食用。

［联知识1解读发酵装置图

装置图结构或操作目的

醋酸发酵时连接充气泵

充气口

进行充气

酒精发酵时用来排出

排气口

由口

CO2

防止空气中微生物的污

4_.长而弯曲的胶管

染

制酒时关闭充气口

制醋时充气口连接气泵，输入无

菌空气

考点（二）微生物的实验室培养和别离

3.（2017•南京二模）某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降

解的有机化合物A,研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元

素等配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的

菌）。实验的主要步骤如以下图所示。以下有关表达错误的选项是

（）

起杏营振藩培养若干天后，测定接种

污罩样品r各瓶中化合物A的含量广、用状

重复多次，直至获得目的菌

A.培养基中参加化合物A作为唯一碳源，目的是为了筛选目的

菌

B.实验培养过程中进行振荡培养，可使目的菌和培养液充分接

触

C.实验操作过程中，获得纯洁“目的菌〃的关键是防止外来杂

菌污染

D.将固体培养基得到的目的菌重复屡次上述实验的目的是获得

大量菌种

解析：选D培养基中化合物A为唯一碳源，可以筛选能高效

降解化合物A的细菌；实验培养过程中进行振荡培养，既可使目的

菌和培养液充分接触，又可以增加培养液中溶氧量；微生物培养过程

中要进行无菌操作，防止外来杂菌的污染；将固体培养基得到的目的

菌重复屡次上述实验是为了纯化高效降解化合物A的细菌。

4.（2015•江苏高考）人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用

来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究人

员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株,并对其降解纤维素能力进行了研

究。请答复以下问题：

(1)在样品稀释和涂布平板步骤中，以下选项不需要的是

(填序号)。

①酒精灯②培养皿③显微镜④无菌水

(2)在涂布平板时，滴加到培养基外表的菌悬液量不宜过多的原

因是

(3)向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，

需要用酒精棉球擦净的原因是

(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解

产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反响。研究人员在刚果红培养基平板

上，筛选到了几株有透明降解圈的菌落(见以下图)。图中降解圈大小

与纤维素酶的有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是

(填图中序号)。

4^-----降解圈

-----菌落③

(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和北，在不同温度

和pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见以下图，推测

菌株更适合用于人工瘤胃发酵，理由是

《5o

u里

4o

・

g濡

*躲3o

p-

or建2o

et

i1O

}n

解析：（1）在样品稀释和涂布平板过程中，需要在酒精灯火焰附

近进行操作，培养皿用于盛放培养基并培养细菌，无菌水做稀释的溶

剂，此处唯一用不到的是显微镜。（2）在涂布平板时，要取少量菌悬

液滴加到培养基外表，因为如果滴加菌悬液量过多，菌悬液就会堆积

在培养基外表影响别离效果。（3）在向试管内分装含琼脂的培养基时,

如果试管口粘附有培养基，就很容易使棉塞受到污染，因此，需要用

无菌的酒精棉球将试管口擦拭干净。（4）因为刚果红可以与纤维素形

成红色复合物，且不与纤维素降解产物反响。所以在刚果红培养基平

板上，菌落周围有透明降解圈是纤维素被降解的结果，降解圈大小由

纤维素酶的活性和量决定。图中菌落①周围的降解圈最大，因此其降

解纤维素的能力最强。（5）考虑到人工瘤胃的发酵过程会使发酵液酸

性增加，温度升高，在这个前提下观察在不同温度和pH条件下测得

的发酵液中酶活性的结果图，从图中可以看出，在高温和低pH条件

下都是北菌株中的纤维素酶的活性较高，因而该菌株更适合用于人

工瘤胃发酵。

答案：⑴③（2）培养基外表的菌悬液会出现积液，导致菌体堆

积，影响别离效果（3）防止培养基污染棉塞

（4）量与活性①⑸J4发酵过程会产热和产酸，J4菌株在较

高温度和酸性环境下酶的活性更高

［联知识1微生物纯化方法的比拟

方

平板划线法稀释涂布平板法

法

平板划线法

图

示

稀释涂布平板法

⑴接种环的灼烧：⑴稀释操作时，每支试管及其

①第一次划线前：杀死接种环上中的9mL水、移液管等均需

的微生物，防止污染培养物灭菌；操作时，试管口和移液

②之后每次划线前：杀死残留菌管应在离火焰1〜2cm处

操种，保证每次划线菌种来自上次(2)涂布平板时：

作划线末端①涂布器用体积分数为70%

注③划线结束后：杀死残留菌种，的酒精消毒，取出时让多余酒

意防止污染环境和感染操作者精在烧杯中滴尽，然后将沾有

事⑵灼烧接种环之后，要冷却后再少量酒精的涂布器在酒精灯

项进行操作，以免温度太高杀死菌火焰上引燃

种②不要将过热的涂布器放在

(3)划线时最后一区域不要与第盛放酒精的烧杯中，以免引燃

一区域相连其中的酒精

(4)划线用力要大小适当，防止用③酒精灯与培养皿距离要适

力过大将培养基划破宜，移液管管头不要接触任何

物体

优可以观察菌落特征，对混合菌进既可以计数，乂可以观察曲落

点行别离特征

缺吸收量较少，较麻烦，平板不

不能计数

点枯燥效果不显著，容易蔓延

适

用

适用于好氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧菌

范

围

目

在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体——菌落

的

培平板冷凝后倒置培养，使培养基外表的水分更好地挥发，防止

养皿盖上水珠落入培养基造成污染

［怎样考--------------考题•考情分析］

1.（2015•江茅高考）关于“腐乳的制作”实验，以下表达错误的

选项是（）

A.将腐乳坯堆积起来会导致堆内温度升高，影响毛霉生长

B.腐乳坯若被细菌污染，则腐乳坯外表会出现黏性物

C.勤向腐乳坯外表喷水，有利于毛霉菌丝的生长

D.装坛阶段参加料酒，可有效防止杂菌污染

解析：选C毛霉有氧呼吸能释放大量能量，大局部以热能形式

散失，堆内温度过高会影响毛霉生长。毛霉是丝状真菌，若腐乳坯外

表出现黏性物，可能是被其他杂菌污染。毛霉是好氧真菌，经常向腐

乳坯外表喷水，不利于毛霉菌丝的生长。料酒能抑制微生物的生长,

故能有效防止杂菌污染。

2.（2015•江琰高考）做“微生物的别离与培养〃实验时，以下表

达正确的选项是（）

A.高压灭菌加热结束时，翻开放气阀使压力表指针回到零后，

开启锅盖

B.倒平板时，应将翻开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖

上

C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

解析：选D在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅

内温度自然下降，待压力表的压力降到零时，翻开放气阀，旋松螺栓,

翻开盖子。倒平板时，用左手将培养皿翻开一条稍大于瓶口的缝隙，

而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却

后，再用其挑取菌落。在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿

底上用记号笔做标记。

3.（2015•江苏高考）（多项选择）右图为苹果酒的

发酵装置示意图，以下表达错误的选项是（）

A.发酵过程中酒精的产生速率越来越快

B.集气管中的气体是酵母菌无氧呼吸产生的CO2

C.发酵过程中酵母种群呈“J〃型增长

D.若发酵液外表出现菌膜，最可能原因是发酵瓶漏气

解析：选ABC酵母菌发酵过程中因营养物质的消耗、pH的变

化等，酒精的产生速率会越来越慢。集气管收集的气体除酵母菌无氧

呼吸产生的CO2外，还有有氧呼吸产生的CO2。发酵过程中，随着

营养物质消耗pH降低等，酵母菌的繁殖速度会变慢，其种群不会呈

"J”型增长。发酵液外表出现的菌膜可能是醋酸菌在有氧条件下繁殖

产生的，说明发酵瓶可能漏气。

4.（2016•江苏高考）（多项选择）漆酶属于木质素降解酶类，在环

境修复、农业生产等领域有着广泛用途。以下图是别离、纯化和保存

漆酶菌株的过程，相关表达正确的选项是（）

A.生活污水中含有大量微生物，是别离产漆酶菌株的首选样品

B.筛选培养基中需要参加漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆

酶的菌落

C.在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化

D.斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株

解析：选BC生活污水中含木质素的物质相对较少，产漆酶菌

株也较少，不宜作为别离产漆酶菌株的样品；产漆酶菌株可降解木质

素，在筛选培养基中参加木质素可筛选产漆酶的菌株，筛选时可通过

菌落特征挑出产漆酶的菌落;在涂布平板上生长的菌落可能还有其他

杂菌，可再通过平板划线法进一步纯化；对于需要长期保存的菌种，

可以采用甘油管藏的方法，即在一20℃的冷冻箱中保存。

5.（2017•江班高考）以下关于“腐乳的制作”实验，表达正确的

选项是（）

A.控制发酵温度的主要目的是腐乳调味

B.腐乳制作后期参加香辛料和料酒有防腐作用

C.毛霉的主要作用是分解脂肪和淀粉

D.成品腐乳外表的粘性物质主要由细菌产生

解析：选B控制发酵温度主要目的是利于菌种繁殖和代谢；腐

乳制作后期参加香辛料和料酒有防腐作用；毛霉的作用主要是分解蛋

白质和脂肪；成品腐乳外表的粘性物质主要是毛霉产生的菌丝。

6.(2017•江苏高考)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对

环境有严重危害。小明同学准备依据如图操作步骤，从处理废水的活

性污泥中别离筛选酚降解高效菌株。请答复以下问题：

，芯匕：：：^：^©©

日目目目目平板

活性污泥富集培养10-,10210310"105

(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白陈、K2HPO4、MgSO4＞苯酚和

水，其中可作为碳源的有o

(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐

渐，以到达富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密

集，应进一步,以便于菌落计数与别离。制备平板培养

基时除了需要水、营养物质外，还必须添加o

(3)右图为连续划线法示意图，在图中(填图中序号)

区域更易获得单菌落。

(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚

残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反响，下表中1〜5号比色

管的苯酚浓度应分别为o

|1|2|3|4|5|6

苯酚浓度

1

(mg/L)

如果废水为50mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，

则需将残留液稀释（填序号：①5②10③20）倍后，再进

行比色。

解析：（1）富集培养基中蛋白陈、苯酚都是含碳的有机物，可作

为碳源。（2）欲富集酚降解菌，随转接次数的增加，应逐渐增加培养

基中苯酚的含量；若接种培养后平板上菌落过于密集，则应进一步稀

释后再进行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落计数与别离；平

板培养基是固体培养基，除含有水、营养物质（碳源、氮源、无机盐

等）外，还需添加琼脂作为凝固剂。（3）利用连续划线法接种时，最后

的划线区域（③）中，菌体的密度较小，容易获得单菌落。（4）因系列浓

度梯度中6号比色管中苯酚浓度为1mg/L,故1~5号比色管中的苯

酚浓度应分别为0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L;

根据题意，废水为50mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，

要使稀释后的苯酚残留液浓度介于0〜1mg/L,需将残留液稀释20

倍左右。

答案：⑴蛋白陈、苯酚（2）增加稀释涂布凝固剂（3）（3）

（4）0、0.2、0.4、0.6、0.8③

I江苏卷命题分析I

本节内容在近三年高考中几乎年年考。以选择题的形式考查传统

发酵技术，以选择题或非选择题的形式考查微生物的培养和应用，因

此微生物的培养和利用是考查的重点。复习备考时，在抓双基的基础

上，注意知识间的横向联系，提高综合分析问题和解决问题的能力。

练好题典题精选⑥一站通关（题贵在精而不在多）

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一、选择题

1.（2017•苏州一模）以下有关传统发酵技术及其在食品生产中应

用的表达，正确的选项是（）

A.酿酒过程中密封的时间越长，产生的酒精量就越多

B.酿制果醋所需酵母菌和醋酸菌的发酵底物、条件相同

C.制作腐乳时需利用毛霉产生的酶分解豆腐中的蛋白质等物质

D.制作果酒、果醋的微生物须在无菌条件下才能发酵

解析：选C酒精是酵母菌无氧呼吸产生的，在一定的时间内，

密封的时间越长，产生的酒精量就越多，但酒精到达一定浓度会抑制

无氧呼吸，导致酒精量不再增加；酿制果醋的过程是先使酵母菌通过

无氧呼吸产生果酒，再利用醋酸菌把果酒发酵成果醋，前者的发酵底

物是糖类，条件是18〜25℃、无氧，后者的发酵底物是酒精，条件

是30〜35°C,需氧；制作腐乳主要利用的是毛霉分泌的蛋白酶和脂

肪酶，它们能够分解豆腐中的蛋白质、脂肪等物质；自然发酵时，葡

萄汁等没有严格灭菌，酵母菌、醋酸菌也能发酵。

2.（2017•扬州一模）以下有关制作果酒、果醋和腐乳的表达，错

误的选项是（）

A.果酒的制作过程中既涉及有氧呼吸又涉及无氧呼吸

B.果醋发酵温度较高，且发酵过程要特别注意氧气的供给

C.变酸的酒外表的菌膜含醋酸菌，腐乳的“皮”为毛霉菌丝

D.发酵过程中所有的相关反响都是在微生物的细胞内进行的

解析：选D腐乳制作过程中，蛋白质和脂肪的水解反响发生在

毛霉的细胞外。

3.以下关于果酒、果醋和腐乳制作的表达，正确的选项是（)

A.一般用含糖量较高的水果来制作果酒

B.果醋发酵包括有氧发酵和无氧发酵

C.制作腐乳时，应防止毛霉以外的其他微生物生长

D.都是利用微生物胞内酶催化获得最终产品

解析:选A醋酸菌是严格好氧菌，所以果醋发酵只有有氧发酵;

参与腐乳发酵的微生物有青霉、毛霉、曲霉、酵母，其中主要是毛霉;

果酒、果醋是利用微生物胞内酶催化获得最终产眩为

品，腐乳制作是利用毛霉分泌的蛋白酶和脂肪酶，nT

痣3a小虻

属于胞外酶。甲乙

4.（2017•南京二楼）如图装置可用于生物技术实践的相关实验。

以下有关表达正确的选项是（）

A.制作果酒、果醋或腐乳时，所需控制的温度都是相同的

B.乙装置可以先用于果酒的制作，后用于果醋的制作

C.用装置甲制作腐乳时，自下而上随着豆腐块加高逐渐减少用

盐量

D.装置乙中b为排气口，c为充气口，可防止空气中微生物的

污染

解析：选B制作果酒、果醋或腐乳时，控制的温度分别是18~

25℃、30〜35°C、15~18℃;用装置甲制作腐乳时，越接近瓶口微

生物感染时机越多，所以加盐量应增大；装置乙中b为充气口，c为

排气口，排气口长而弯曲可防止空气中微生物的污染。

5.以下有关“微生物的别离与培养〃实验的表达，正确的选项

是（）

A.利用平板划线法可对微生物进行接种、纯化、别离和计数

B.对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿

底标记

C.倒平板时，应将翻开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到

皿盖上

D.将好氧型菌株接种到培养液中需静置培养，防止培养液沾染

试管壁引发污染

解析：选B利用平板划线法可对微生物进行接种、纯化和别离,

但不能计数；在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿底上用记

号笔做标记；倒平板时左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手将培养皿

翻开一条稍大于瓶口的缝隙，倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖；将

好氧型菌株接种到培养液中需振荡培养，以增加溶液的溶氧量。

6.（2017•南通一模）养殖池中存在的有毒物质主要是氨及亚硝酸,

这两种物质可被硝化细菌吸收利用。若要对养殖池底泥中硝化细菌别

离与计数，贝!1（）

A.需要配制添加一定浓度氨盐的牛肉膏蛋白陈培养基，以筛选

硝化细菌

B.应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在酒

精灯火焰旁进行

C.可以采用平板划线法进行计数，还需与未接种的空白培养基

同时培养

D.应将培养基置于30°C恒温下培养12h后，统计培养基中全

部菌落数

解析：选B牛肉膏蛋白陈本身含有氮源，无法筛选硝化细菌；

平板划线法可以别离菌种，但不能用于计数；培养过程中应每隔一段

时间观察，直到菌落稳定开始计数。

7.以下有关生物技术应用的表达，错误的选项是（）

A.腐乳制作中酒精含量过高会延长腐乳成熟时间

B.制作果醋时中断通氧会引起醋酸菌死亡

C.若固定化酵母细胞时CaCb溶液浓度过低，将很难形成凝胶

珠

D.加酶洗衣粉中的酶制剂的作用是直接洗去衣服上的污垢

解析：选D腐乳制作中酒精含量过高，抑制酶的活性，故会延

长腐乳成熟时间；醋酸菌是好氧菌，中断通氧会引起醋酸菌死亡；

CaCb溶液的作用是使胶体聚沉，浓度过低，不易形成凝胶珠；加酶

洗衣粉中的酶制剂有的是将大分子污垢分解成小分子，从衣物上脱落

下来，有的本身不能去除衣物上的污垢，而是使纤维的结构变得蓬松,

如纤维素酶。

8.（2017•南通二模）在别离、纯化大肠杆菌实验，叔

中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如右图。有关表一野缪

甲乙

达错误的选项是（）

A.接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌

B.连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落

C.接种过程中至少需要对接种环灼烧5次

D.甲中a区域为划线的起始位置

解析：选D在别离、纯化大肠杆菌实验中，接种前应对培养基

进行高压蒸汽灭菌；连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落；接

种过程中，接种前要灼烧，每次划线后均需灼烧，至少需要对接种环

灼烧5次；据甲和乙比照，甲中d区域为划线的起始位置。

9.（2017•扬州一模）（多项选择）以下有关“微生物的别离与培

养〃实验的表达，错误的选项是（）

A.高压蒸汽灭菌锅加盖时应按顺时针方向依次旋紧螺栓

B.选择培养基可以鉴定某种微生物的种类

C.待培养基冷却至室温时倒平板

D.统计样品中活菌数量时，接种方法可采用稀释涂布平板法

解析：选ABC高压蒸汽灭菌锅加盖时，将盖上的排气软管插

入内层灭菌桶的排气槽内，再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个

螺栓，使螺栓松紧一致；鉴别培养基可以鉴定培养基中某种微生物的

种类；待培养基冷却至50℃左右时倒平板；稀释涂布平板法可用于

活菌数量的计数。

10.（2017•南通二模）（多项选择）以下有关果酒、果醋和腐乳制作

的比拟，正确的选项是（）

A.主要菌种不一定是真核生物

B.温度控制必须保证微生物繁殖最快

C.发酵过程会释放热量

D.可通过色、香、味等对产品进行评价

解析：选ACD果醋制作利用的菌种是醋酸菌，是原核生物；

发酵温度和微生物繁殖最快的温度不一定相同，如腐乳制作的发酵温

度为15〜18°C,此温度并不是毛霉繁殖最快的温度；三种发酵过程

中，菌种都会进行细胞呼吸释放热量。

二、非选择题

11.某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。

实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请答复与

此实验相关的问题：

（1）培养基中含有的蛋白陈、淀粉分别为细菌培养提供了

和O

（2）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样本

的平板置于中培养，培养的温度设定在37要使该

实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接种作为对照

进行实验。

（3）培养20h后，观察到平板上有形态和颜色不同的,

这说明湖水样品中有多种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受

细菌污染的程度越_______（填“高"或"低〃）。

（4）如以下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养

的效果图，请分析接种的具体方法。

AB

获得图A效果的接种方法是,获得图B效果

的接种方法是o某同学在纯化土壤中的细菌时，发

现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是

应当怎样操作？

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

（5）如果在培养基中参加青霉素，可以用于筛选耐的真

菌，这种培养基（按功能分）被称为。

解析：（1）蛋白陈富含蛋白质，主要为微生物提供氮源，淀粉作

为微生物的碳源。（2）微生物的培养在恒温培养箱中进行。要使该实

验所得结果可靠，还应设置对照实验，即同时在另一平板上接种无菌

水作为对照，以判断培养基制作是否合格。（3）培养20h后，不同微

生物在平板培养基上会形成形态和颜色不同的菌落。菌落总数越多，

说明湖水中的微生物数量越多，湖水遭受细菌污染的程度越高。（4）

根据图中菌落的分布可以判断接种方法。图A中菌落均匀分布，则

获得图A效果的接种方法是稀释涂布平板法。图B中菌落分布在不

同区域的平行线上，则获得图B效果的接种方法是平板划线法。培

养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高或培养过程被

杂菌污染，可以通过增大稀释倍数或严格无菌操作的方法解决。（5）

参加青霉素的培养基可作为筛选真菌的选择培养基。

答案：（1）氮源碳源⑵恒温培养箱无菌水

（3）菌落高（4）稀释涂布平板法平板划线法菌液浓度过高

（或培养过程被杂菌污染）增大稀释倍数（或严格无菌操

作，原因与操作要对应）（5）青霉素选择培养基行气］

12.如图是某细菌纯化培养过程中划线接种的培养结

果。答复以下问题：

（1）在（填图中编号）区域出现了单个菌落，产生每个菌落

的最初细菌数目是个。据图分析，在培养基上划线接种时,

划线的顺序依次是（用编号表示）。

⑵下表是某微生物培养基成分:

编

编号成分含量成分含量

号

(NH4)2S

①粉状硫10g②0.4g

04

9.25

③④

K2HPO44gMgSO4

g

⑤⑥

FeSO40.5gCaCk0.5g

⑦H2O100mL————

①若培养从土壤中别离出来的自生固氮菌，该培养基应添加

,去除O

②若要鉴别纤维素分解菌，可用法，若要鉴别

尿素分解菌可在培养液中参加

解析：(1)从图中可知，②号区域出现了单个菌落；1个菌落由1

个细菌繁殖形成；根据①③②区域菌落数越来越少，所以划线的顺序

依次是①f③f②。(2)①自生固氮菌是异养生物，需参加有机碳，

不需要氮源，它可固定大气中的N2,因而培养基中应添加碳源去掉

氮源。②鉴别纤维素分解菌可用刚果红染色法，要鉴别尿素分解菌，

可在培养液中参加酚红指示剂。

答案：⑴②1①一③f②⑵①碳源氮源

②刚果红染色酚红指示剂

13.以下图为果酒、果醋工厂化生产流程。请据图答复以下问题:

候选菌A候选菌B

I接种I接种

葡萄果汁

I接痛、前锚

纯化一果酒

I接种I接种

乙A--扩大培养—A

《---A

加工I接种I接种

葡锢一果汁一发酵罐一►果酒一►发酵罐

II

果泗产品果醋产品

(1)家庭自制葡萄酒所用菌种常来自，图中的候

选菌A、B经筛选和纯化分别获取和_______菌种。

(2)图中所用的培养基都需要在接种前用法进行灭

菌。

(3)在纯化菌种A时接种了5个平板，每个平板均接种0.1mL样

品并培养。其中乙平板的菌落分布如图，纯化菌种A的接种方法是

，推测出现平板乙可能的操作失误是

o其余的甲、丙、丁、戊平板操作正常，其菌落数

分别是210、230、470、190,则样品中菌种A的数量为个・mL

(4)果酒发酵罐与果醋发酵罐需要控制的温度条件差异是

解析：(1)家庭自制葡萄酒所用菌种常来自葡萄皮外表的酵母菌。

候选菌A、B筛选和她化后可以分别用于制作果酒和果醋，所以分别

获取的是酵母菌和醋酸菌。(2)培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。

(3)分析图乙中培养基培养结果，可推知采用的纯化菌种的接种方法

是稀释涂布平板法。出现平板乙可能的操作失误是涂布不均匀。平板

上菌落数量在30〜300之间可以用于计算,所以有效的菌落数是210、

230、190,平均值为210。因为接种了0.1mL,所以菌种A的数量

为2100个・1111—1。(4)果酒发酵的适宜温度是18〜25°C,果醋发酵

的适宜温度是30〜35

答案：(1)葡萄皮外表的酵母菌酵母菌醋酸菌

(2)高压蒸汽灭菌(3)稀释涂布平板法涂布不均匀

2100(4)前者18〜25°C,后者30〜35℃

14.生物技术在食品加工中的应用十分广泛，如果酒、果醋制作

是常见的例子。请答复以下有关果酒、果醋制作的问题：

(1)果酒、果醋制作中，都需要大量纯种发酵微生物，所以首先

要对发酵微生物进行培养，在微生物培养过程中，除考虑营养条件外,

还要考虑温度、、渗透压等条件；为防止杂菌污染，还需要

对培养基和培养皿进行(填“消毒〃或"灭菌〃)；操作者的

双手需要进行清洗和;空气中的细菌可用紫外线杀灭，其

（填选项）。

A.果酒生成醋酸时需要氧气

B.通入空气可使乙瓶中的锯末呈松散状

C.使乙瓶中流出的液体缓慢滴入丙瓶中

D.使甲瓶中流出的液体缓慢滴入乙瓶中

（3）如果将该装置改为酒精的发酵装置，需要修改的地方是

解析：（1）微生物培养需要同时考虑温度、pH、渗透压等外界条

件，培养涉及的器材和培养基等都需要进行灭菌，而对操作者的双手

则要进行消毒处理，紫外线通过使蛋白质变性可以杀灭空气中的微生

物。（2）图中的乙瓶为醋酸发酵瓶，内有醋酸菌，若该瓶流出的液体

呈酸性，说明流出液中有醋酸生成。在乙瓶中进行的过程需要氧气，

醋酸菌进行的是有氧呼吸。（3）酒精发酵在无氧条件下才能进行，所

以不需要通入空气。

答案：（l）pH灭菌消毒紫外线能使蛋白质变性（2）乙醋

酸菌醋酸A（3）去掉通气装置

-u专题复习2©

主攻点之（二）

酶的应用和DNA的粗提取与鉴定

c“串基础

主干知识◎一网打尽（基稳才能楼高）

1.DNA粗提取与鉴定（填图）

在溶有DNA的NaCl溶液中加入

选用［UDNA含量相对利用DNA在用不同浓度NaCl溶液中溶解度

国二苯胺试剂,混合均匀后将试管在沸

较高的生物组织不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质

水浴中加热5min,溶液变成蓝色

I

|材料的选取|——‘破碎细胞（以鸡血为例）|——4去除杂质--------JDNA的析出］——，DNA的鉴定"

................'....................'..s,....................znz:.........................

鸡血细胞f加②蒸慵水f用玻璃棒搅拌f用纱::将处理后的溶液过漉，加入与漉液体积相等的、冷却的体积分数

布过滤f收集丽.........................n为95%的团酒精溶液

2.图解酶的应用与固定化（填图）

活化酹母细胞*配制（DCaClz溶液-配制弛藻酸钠溶液-混合一固定化解母细胞

过程

国包埋法、化学结合法、团物理吸附法固定化幅和aaJ加酶原理

I洗衣粉;酶的国专一性和高效性

固定化细胞

研考点

高频考点⑥一包在内（方向比努力更重要）

［考什么^--------------考点•考法探究］

考点（一）酶的应用

1.（2017•江苏高考）为了探究一种新型碱性纤维素酶的去污效能,

研究性学习小组进行了相关实验，结果如图。由图中实验结果能直接

得出的结论是（）

90

口不加前

口加前

60

30

污布类型1234

洗衣粉类型XYYZ

酶用量（U/L）0I200|300I300I30

A.碱性纤维素酶对污布类型2的去污力最强

B.不同类型洗衣粉影响碱性纤维素酶的去污力

C.碱性纤维素酶对污布类型2、3的去污力不同

D.加大酶用量可以显著提高洗衣粉的去污力

解析：选C对污布类型2、3处理，洗衣粉类型、酶用量均相

同，二者比拟可以直接说明碱性纤维素酶对污布类型2、3的去污力

不同。由