食品中有害污染物的检验

第一节有机磷农药残留量的检验

一、结构和理化性质

结构：磷酸酯POOROXR(S)当前第1页\共有48页\编于星期二\15点有机磷农药多为磷酸酯类或硫代磷酸酯类，其结构式中R1、R2多为甲氧基（CH3O-）或乙氧基（C2H5O-）；Z为氧（O）或硫（S）原子：X为烷氧基、芳氧基或其他取代基团。可以合成多种有机磷化合物。过去我国生产的有机磷农药绝大多数为杀虫剂，如常用的对硫磷、内吸磷、马拉硫磷、乐果、敌百虫及敌敌畏等，近几年来已先后合成杀菌剂、杀鼠剂等有机磷农药。

当前第2页\共有48页\编于星期二\15点敌敌畏，dichlorvos，O,O-二甲基-O-（2，2-二氯乙烯基）磷酸酯。甲拌磷，phorate，O,O-二乙基-S-乙硫基甲基二硫代磷酸酯

当前第3页\共有48页\编于星期二\15点甲基对硫磷（O,O-二甲基-O-对硝基苯基硫代磷酸酯）对硫磷（O,O-二乙基-O-对硝基苯基硫代磷酸酯）

当前第4页\共有48页\编于星期二\15点有机磷农药大多呈油状或结晶状，工业品呈淡黄色至棕色，除敌百虫和敌敌畏之外，大多是有蒜臭味。不溶于水，易溶于有机溶剂如苯、丙酮、乙醚、三氯甲烷及油类，对光、热、氧均较稳定，遇碱易分解破坏，敌百虫例外。所以有机磷农药的提取与净化应在中性或酸性条件下进行。敌百虫为白色结晶，能溶于水，遇碱可转变为毒性较大的敌敌畏。

当前第5页\共有48页\编于星期二\15点当前第6页\共有48页\编于星期二\15点

GB/T14553-2003

粮食、水果和蔬菜中有机磷农药测定的气相色谱法当前第7页\共有48页\编于星期二\15点一、气相色谱法

原理：样品经处理（提取、净化和浓缩）后，有机磷农药组分经气相色谱柱分离进入火焰光度检测器，在富氢焰上燃烧，以HPO碎片的形式，放射出波长526nm的特性光谱。检测该波长光线的强度，用色谱峰保留时间定性，峰高或峰面积定量。当前第8页\共有48页\编于星期二\15点

将蔬菜切碎混匀，称取10.00g于250ml具塞锥形瓶中加入无水硫酸钠脱水

加入活性炭脱色（加入中性氧化铝脱油）

加入二氯甲烷提取，滤纸过滤挥发提取剂二氯甲烷定容至2.0ml。当前第9页\共有48页\编于星期二\15点

样品处理：①水果、蔬菜和谷物样品中加入丙酮水，以捣碎法用组织捣碎机匀浆提取；

组织捣碎机当前第10页\共有48页\编于星期二\15点

②匀浆液经抽滤，真空抽滤装置当前第11页\共有48页\编于星期二\15点

③滤液中加入足够的氯化钠固体使溶液处于氯化钠饱和状态，猛烈振摇，静置，丙酮与水相分层，收集丙酮层（上层）；

④水相用二氯甲烷提取；

当前第12页\共有48页\编于星期二\15点

⑤将丙酮和二氯甲烷提取液合并，无水硫酸钠脱水。

漩涡振荡器当前第13页\共有48页\编于星期二\15点

⑥旋转蒸发器减压浓缩，浓缩液用二氯甲烷转移并定容。

旋转蒸发仪当前第14页\共有48页\编于星期二\15点氮吹仪当前第15页\共有48页\编于星期二\15点当前第16页\共有48页\编于星期二\15点小结——样品前处理

二氯甲烷提取

中性氧化铝脱油

活性炭脱色

无水硫酸钠脱水当前第17页\共有48页\编于星期二\15点色谱测定：气相色谱法

火焰光度检测器（FPD）526nm

玻璃柱

固定相

担体：ChromororbWAWDMCS

固定液：QF-1,SE-30,OV-17,

OV-101,PEGA,NPGA当前第18页\共有48页\编于星期二\15点当前第19页\共有48页\编于星期二\15点

火焰光度检测器（FPD）通常用来检测含有硫磷元素的有机物。用火焰光度检测器测定有机磷农药有高选择性和高灵敏性的特点。当前第20页\共有48页\编于星期二\15点第二节黄曲霉毒素B1黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉(aspergillusflavus)寄生曲霉(a.parasiticus)产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。当前第21页\共有48页\编于星期二\15点黄曲霉毒素在紫外线照射下能产生荧光，根据荧光颜色不同，将其分为B族和G族两大类及其衍生物。B1是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能检测到。AFT目前已发现20余种。AFT主要污染粮油食品、动植物食品等；如花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染。其中以花生和玉米污染最严重。家庭自制发酵食品也能检出黄曲霉毒素，尤其是高温高湿地区的粮油及制品种检出率更高。当前第22页\共有48页\编于星期二\15点黄曲霉毒素相对分子量为312-346.难溶于水,易溶于油,甲醇,丙酮和氯仿等有机溶剂,但不溶于石油醚,己烷和乙醚中.一般在中性溶液中较稳定,但在强酸性溶液中稍有分解,在pH9-10的强碱溶液中或在氧化剂存在下分解迅速.其纯品为无色结晶,耐高温,黄曲霉毒素B1的分解温度为268℃紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性.当前第23页\共有48页\编于星期二\15点黄曲霉毒素主要由黄曲霉和寄生曲霉产生化学结构上，黄曲霉毒素属于二呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，即含有一个二呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）B1和G1的二呋喃环末端有双键。二呋喃环末端有双键者毒性较强并有致癌性当前第24页\共有48页\编于星期二\15点当前第25页\共有48页\编于星期二\15点主要为肝脏急性中毒的动物主要表现为肝脏损伤、肝实质细胞消失延迟、胆管增生、肝细胞脂质消失延迟和肝出血慢性中毒主要表现为生长发育迟缓、肝脏出现亚急性或慢性损伤。可引起原发性肝细癌也可作用于其他器官，如肾脏、胃、直肠、乳腺、卵巢等当前第26页\共有48页\编于星期二\15点黄曲霉毒素检验——高效液相色谱法1、原理样品中的黄曲霉毒素经C18柱分离，用带荧光检测器的高效液相色谱仪检测，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。当前第27页\共有48页\编于星期二\15点2、样品处理（1）样品提取称取适量样品，加少量水浸润，混匀后加入三氯甲烷，振摇提取，再加入无水硫酸钠，经快速定性滤纸滤于具塞量筒中。当前第28页\共有48页\编于星期二\15点2、样品处理（2）样品净化和衍生化反应将少量提取液通过装有硅镁吸附剂的层析管，用三氯甲烷-正己烷、三氯甲烷-甲醇淋洗除去杂质，最后用丙酮-水洗脱AFT，收集于烧杯内，当前第29页\共有48页\编于星期二\15点当前第30页\共有48页\编于星期二\15点

在水浴上将溶剂挥干，用少量三氯甲烷溶解残渣并转移到具塞小试管中。取部分溶液加入正己烷、三氟乙酸，将试管塞紧，混匀，静置30min，使AFTB1衍生为AFTB2a，用氮气吹干，加入少量流动相溶解供高效液相色谱测定。当前第31页\共有48页\编于星期二\15点3、测定将按上述方法处理的衍生和未衍生样品和标准溶液注入高效液相色谱仪分析。荧光检测器，Ex=360nm,Em=425nmC18色谱柱（250×4mm）甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾（1+1）

1.3ml/min当前第32页\共有48页\编于星期二\15点样品用三氟乙酸衍生的目的是确证样品中是否含有AFTB1。当前第33页\共有48页\编于星期二\15点确证样品中是否含有黄曲霉毒素？未衍生化的衍生化的标准溶液（AFTB1）标准溶液（AFTB2a）样品溶液(出峰情况判断，有？无?)样品溶液衍生化后在此出峰，可判断样品中检出AFTB1当前第34页\共有48页\编于星期二\15点一、四环素类抗生素的残留检验由放线菌产生的一类广谱抗生素，是家畜、家禽常用的防病治病药物。包括金霉素(CTC)

、土霉素(OTC)

、四环素（TC）及半合成衍生物。其结构均为十二氢化并四苯基本骨架。

第三节抗生素残留量当前第35页\共有48页\编于星期二\15点57R5R7HCl金霉素OHH土霉素HH四环素当前第36页\共有48页\编于星期二\15点

抗生素结构中都含有酸性的酚羟基和烯醇羟基及碱性的二甲氨基，该类药物均为酸碱两性化合物。57当前第37页\共有48页\编于星期二\15点

易溶于稀酸和稀碱。在我国四环素、土霉素和金霉素是允许使用，但有最高残留限量规定。当前第38页\共有48页\编于星期二\15点当前第39页\共有48页\编于星期二\15点家禽当前第40页\共有48页\编于星期二\15点当前第41页\共有48页\编于星期二\15点高效液相色谱法的检出限：四环素：0.15mg/kg

土霉素：0.20mg/kg

金霉素：0.65mg/kg当前第42页\共有48页\编于星期二\15点HPLC法测定四环素类兽药残留

取一定量切碎的肉样食品，用适量5%高氯酸振荡提取；当前第43页\共有48页\编于星期二\15点

将提取液离心后，取上清液经0.45um滤膜过滤；当前第44页\共有48页\编于星期二\15点

反相色谱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，工作曲线法定量。检测波长：355nm；色谱柱:ODS柱；流动相：乙腈+0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（35+65）（pH2.5