临床输血与检验

临床输血与检验桂林市中心血站蒋利星第一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六输血与血型输血前的检查交叉配血的方法和有关问题自身免疫性溶血性贫血产前的免疫血清学检查血小板血型与输血血小板输血展望第二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六输血与血型第三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六

最早的输血试验是英国人罗维尔在1665年进行的。他把一条失血过多濒于死亡的狗的静脉与另一条健康狗的静脉用鹅毛管连接起来。失血的狗逐渐从濒死状态恢复过来。1667年，法国国王的御医丹尼斯首先进行了动物血液输入人体的试验。他将400毫升羊血注入一个失血多病的青年人的静脉，这个青年人竟奇迹般地活了下来。此后他又进行了多次输血试验，也安然无恙。但他在1668年的一次试验中，却以失败而告终。他给一名患者输动物血，第一次输血后病人病情有所好转；第二次输血后，病人出现发热、腹痛、大汗、血尿等症状，第三次输血后病人死亡。死者妻子告丹尼斯犯有杀人罪，为此，法国议会特别制定法律：不许再进行输血。1825年，英国的布伦德尔医生从一个人直接输血给另一个人首次成功，但是这一成功具有很大的偶然性。据医书记载：19世纪末叶有346人接受过输血治疗，另有129人被试图输入动物的血液。当时人们还没有认识到血型的不同，因输血发生的事故时有发生，因此，输血是要冒极大风险的。输血的变迁第四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六兰德斯坦纳

（K.Landsteiner)

1868年生于奥地利首都维也纳。维也纳大学医学院毕业后，继续留校，学习化学。1900年发现A、B、O3种血型。1919年在荷兰巴库的一所医院工作。1922年赴美，受聘于洛克菲勒研究所。1930年获诺贝尔生理学医学奖。1943年逝世。第五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六兰德斯坦纳的贡献

卡尔·兰德斯坦纳是奥地利著名医学家，他因发现了Ａ、Ｂ、Ｏ血型而于1930年获得诺贝尔医学及生理学奖。

1900年，兰德斯坦纳在维也纳病理研究所工作时，发现一个人的血清有时会与另一个人的红细胞发生凝集。随后，兰德斯坦纳进一步发现人的血液按红细胞与血清中的不同抗原和抗体，可分为不同类型，他以Ａ、Ｂ、Ｏ三个字母来代表他发现的三种不同类型的血液。不同血型的血液混合在一起，就会发生凝集、溶血现象。

1902年，兰德斯坦纳的两名学生把实验范围扩大到155人，又发现了较为稀少的ＡＢ型血。1927年，国际上正式采纳了兰德斯坦纳原定的字母命名，确定血型有Ａ、Ｂ、Ｏ、ＡＢ四种类型。至此，现代血型系统正式确立。

兰德斯坦纳在认识人类血型方面的杰出研究成果，不仅为安全输血和治疗新生儿溶血症提供了科学的理论基础，而且对免疫学、遗传学、法医学的发展都带来了深远影响。第六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六ABO血型的遗传关系父母血型的配合子女可能的血型父母血型的配合子女可能的血型O×O

A×A

O×A

B×B

O×BO

O，A

O，A

O，B

O，BA×B

O×AB

A×AB

B×AB

AB×ABO，A，B，AB

A，B，

A，B，AB

A，B，AB

A，B，AB第七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六

Rh是恒河猴（RhesusMacacus）外文名称的头两个字母。兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发现恒河猴和多数人体内的红细胞上存在Rh血型的抗原物质，故而命名的。凡是人体血液红细胞上没有Rh抗原（又称D抗原）的，称为Rh阴性。这样就使已发现的红细胞A、B、O及AB四种主要血型的人，又都分别被划分为Rh阳性和阴性两种。随着对Rh血型的不断研究，认为Rh血型系统可能是红细胞血型中最为复杂的一个血型系。Rh血型的发现，对更加科学地指导输血工作和进一步提高新生儿溶血病的实验诊断和维护母婴健康，都有非常重要的作用。根据有关资料介绍，Rh阳性血型在我国汉族及大多数民族人中约占99.7%，个别少数民族约为90%。在国外的一些民族中，Rh阳性血型的人约为85%，其中在欧美白种人钟，Rh阴性血型人约占15%。第八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六输血前的检查第九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六输血前的检查确认受血者身份和血样本查受血者以前血标本的试验记录对受血者作ABO和Rh定型对受血者进行抗体筛选和鉴定选择适宜的血液用受血者血标本与献血者血标本做交叉第十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六最好是血清标本要新鲜不能溶血（如溶血则要做对照）一支抗凝管另一支不抗凝抗体检测对血标本的要求第十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六抗体检测的目的对献血者的检查：避免抗体对受血者的被动转移对受血者的检查：避免抗体与供血者的红细胞结合，出现反应对孕产妇的检查：避免新生儿溶血病的发生，避免如输血时抗体与供血者的红细胞结合，出现反应第十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六第十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六受血者与献血者血标本交叉后标本的保留时间不能马上丢弃在2-6℃至少保留7天如有不良反应需进行重复试验第十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六对患者配血标本的要求新近采集的特殊情况下或患者血管条件很差也不能过三天可以是血浆也可以是血清第十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六ABO血型一定要做正反定型两种定型结果可相互验证防止标准血清变质防止类B现象或红细胞多凝现象或全凝现象对血型检查造成错误防止ABO亚型漏检发现和纠正血型错误第十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六ABO正反定型不一致的人为因素试剂问题操作中加错样本或试剂离心不足或过度细胞比例不当结果判断错误第十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六ABO正反定型不一致的

客观因素抗原减弱产生类B物质或红细胞多凝集现象抗体效价低有不规则抗体存在第十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六交叉配血的方法和有关问题第十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六交叉配血的方法和有关问题盐水配血法酶配血法促凝剂配血法凝聚胺配血法抗人球蛋白法微柱凝胶配血法第二十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六交叉配血不合时的分析主侧不合时的分析1、患者血型是否正确2、患者是否有冷抗体存在3、患者是否有不规则抗体的存在4、患者是否有自身抗体存在5、标本是否有细菌污染6、试管是否不清洁第二十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六交叉配血不合时的分析次侧不合时的分析1、供者血型是否正确2、供者是否有冷抗体存在3、供者是否有不规则抗体的存在4、供者是否有自身抗体存在5、标本是否有细菌污染6、试管是否不清洁第二十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于不规则抗体（单一抗体或复合抗体）的问题抗体的形成几乎总是通过输血或妊娠，接触有这种抗原的红细胞后免疫产生的。根据人体免疫的初级应答及二级应答反应的原理，一个个体第一次接触外来抗原后，典型的应答方式是经过几天的潜伏期，出现特异性抗体，逐渐升高，约在两周左右达到高峰，保持不同的时期后逐渐下降，如不再给予抗原刺激，以后终于测不出抗体。第二十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于不规则抗体（单一抗体或复合抗体）的问题初级应答几天或几年后再接受同样的抗原刺激，常诱发二级应答（记忆应答），再一次刺激将增强和加速免疫应答，血清中的抗体含量2～3天就开始升高，大约10天左右达到高峰。二级应答阶段的抗体以IgG为主。第二十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于自身抗体及冷抗体的问题大量临床和实验研究的资料表明，自身免疫病的发生与病毒感染有密切关系。病毒感染可改变机体自身红细胞的抗原性，或作为多克隆激活剂可刺激B细胞分裂增殖，并发展为浆细胞，均可导致自身抗体的产生。另外病毒感染可直接损害免疫系统，促进自身免疫的发生和发展。冷凝集素综合征（CAS）也称冷血凝素疾病（CHD），是伴有冷反应性自身抗体的自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的最常见的一种类型，约占免疫性溶血性贫血的16~32%。也有资料统计占免疫性溶血性贫血的16~25%。第二十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于自身抗体及冷抗体的问题它的发生可能是急性的或慢性的。急性的AIHA，一时性的冷抗体综合征常和肺炎支原体感染有关，在少数情况下和传染性单核细胞增多症有关。慢性冷凝集素综合征的病人常常是老年人，有轻度或中等度的慢性溶血性贫血。天气冷时常发生雷诺氏现象和血红蛋白尿。冷反应性自身抗体的自身免疫性溶血性贫血的溶血原因是：当外周循环的温度低于32℃时，IgM冷自身凝集素和病人的红细胞发生反应。IgM抗体及其抗原的反应使补体致敏红细胞，特别是C3和C4成分。第二十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于自身抗体及冷抗体的问题当细胞回到积蓄循环较温暖的中央部分时，IgM冷抗体从细胞表面上放散出来，而将补体致敏在红细胞上,这样溶血会很快发生。在循环红细胞上出现的补体成分是C3d，往往有些是C4d。因此补体是红细胞上唯一要测定的球蛋白。IgM冷自身凝集素的效价,在4℃时测定时,往往在1000以上,常波动在2000~64000之间,但1000000以上者也有报道。第二十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于自身抗体及冷抗体的问题上述效价在64至16348间。一般情况下，有冷凝集素综合征的病人很少需要输血。病人避免冷的温度，往往可以防止溶血。如果需要输血，应该用降低冷自身抗体作用，增强同种抗体的方法进行配血，血液加温输注。而自身抗体输血时采取的方法则是用多个供血者同时与患者交叉，取相对凝聚较弱的给予洗涤后输注。

第二十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于药物引起的自身抗体的问题药物性溶血性贫血按发病机制可分药物氧化性溶血性贫血（DOHA）和药物免疫性溶血性贫血（DIHA），DOHA主要常见于遗传性红细胞酶缺陷和血红蛋白病人，DIHA一般发生相对较缓，贫血症状轻，但奎宁丁、福阿亭或非那西丁引起的可较重，DIHA可分自身抗体型（又称甲基多巴型），使用甲基多巴诱发体内产生自身的红细胞抗体，DAT阳性较多；药物性吸附性（也叫半抗原型或青霉素型）：青霉素大量使用时，作为半抗原与正常红细胞膜上的蛋白质结合，刺激机体产生抗药物－红细胞结合物的抗体，不仅是DAT阳性，导致溶血。第二十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于药物引起的自身抗体的问题蛋白非免疫吸附性（也叫先锋霉素型或非特异型）先锋霉素能与红细胞膜结合，使膜的抗原发性改变，膜变异的红细胞就能非免疫性吸附蛋白质；免疫复合物型（也叫福阿亭型），此类药物可与蛋白载体结合，形成免疫复合物体，非特异性吸附红细胞表面，引起免疫反应，产生IgM型抗体（少数IgG），吸附免疫复合物的红细胞并结合补体，导致血管内溶血，红细胞表面有补体，故用单价的Ｃ３做DAT可呈阳性；混合型，同一种药物在同一病人可同时的多种溶血机制。输血方法同自身抗体。第三十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于细菌污染标本及器具不干净的问题贮存于玻璃瓶中的盐水可能含有从容器脱落下来的胶体硅，这种物质能引起假阳性。金属容器贮存的盐水，可能含有金属离子，这些离子能参与蛋白质和红细胞表面非特异性结合，引起假阳性。洗涤不干净的玻璃器具，可能被灰尘、清洁剂或其它引起红细胞不规则聚集的材料所污染，引起假阳性。受细菌污染的贮存标本，T激活后的细胞可以与存在于抗人球蛋白血清中的抗T起反应，引起假阳性。第三十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于方法学的问题目前各医院交叉配血所使用的方法多为凝聚胺法，该方法分致敏、促凝和再中和三步进行。Polybrene法的实验原理是凝聚胺（Polybrene）是带有正电荷的大分子物质，能够中和红细胞膜唾液酸组成的负电荷，减少细胞间静电斥力，使细胞间距缩短，而又不致引起红细胞间的非特异凝集。第三十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于方法学的问题在生理盐水介质中长度较短的IgG抗体不能造成抗体可在细胞间搭成复桥，离心后可见凝集反应，非特异性的凝集可被带负电荷的重悬液（枸橼酸钠）消除，对IgM抗体的作用则是增强凝集反应强度。从资料上显示该方法对Kell抗体不敏感，但我们在实际工作中发现对Dia抗体也不敏感。有一例病例医院用凝聚胺法交叉，没有发现任何问题，输血后出现了严重的溶血反应，经抗人球蛋白法检测出病人血清中有抗-Dia抗体，所引起的溶血反应。第三十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于血型错误及ABO亚型的问题玻片法定型简单，不需要离心设备，仅靠抗体的力量，凝集红细胞而无离心的加速反应，所以反应的时间较长，不适合急诊，另亚型红细胞抗原与抗体的凝集反应慢，凝集强度弱，有时容易被忽略而导致定型错误，不适合用于反定型和交叉配血，只适于大规模血型普查。为临床输血安全在鉴定血型时采用正反定型，正定型是用标准血型抗体，对红细胞膜上ABO系统血型抗原的鉴定。第三十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六关于血型错误及ABO亚型的问题反定型是用标准红细胞抗原对血清中ABO系统血型抗体的鉴定，其目的在于复检正定型结果的准确性纠正漏检误报，特别是一些具有弱抗原的亚型，正定型易被忽略，此外反定型还可以纠正某些肿瘤病人因红细胞抗原性减弱造成的正定型错误以及克服排除获得性类B抗原和全凝集现象对红细胞定型的干扰，可发现血清中存在的一些不规则抗体等。第三十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六交叉配血时对冷抗体的处理一般情况下在37℃水浴中散开，可正常使用不能散开，则要查明原因方能输血第三十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六酶配血法的注意事项蛋白酶能破坏M﹑N﹑S﹑s﹑Fya和Fyb抗原蛋白酶能显著增强Rh和Kidd系统的抗原抗体的反应所用浓度多为0.5%4℃可保存3-7天，负20℃可保存二个月第三十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六微柱凝胶配血法的简介

是一种新的免疫学实验，它是通过观察红细胞抗原抗体在凝胶介质中的反应情况，从而确定抗原抗体的性质。目前，该项技术在国外已成为红细胞血型血清学检测的常规技术第三十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六微柱凝胶配血法第三十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六抗人球蛋白法的原理抗体分子和补体成分是人球蛋白提纯人球蛋白免疫动物，提纯抗人球蛋白经适当处理后，可与人球蛋白发生特异性反应被检测者红细胞表面如吸附有抗体或补体，测会出现肉眼可见凝集第四十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六直接抗人球蛋白法可用于新生儿溶血病的诊断自身免疫性溶血贫血的诊断研究药物致敏的红细胞输血反应的研究第四十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六间接抗人球蛋白法可用于检出和鉴定意外抗体交叉配血检查用其它的方法不能查明的红细胞抗原特殊的研究：如抗人球蛋白消耗试验第四十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六抗人球蛋白法假阴性的原因试验细胞、血清和抗人球蛋白贮藏不当有些抗体只在活性补体参与才能检出温度与时间抗原抗体的比例洗涤不充分试验过程度中断或推迟抗人球蛋白污染离心不充分漏加抗人球蛋白试剂前带现象第四十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六抗人球蛋白法假阳性的原因红细胞洗涤前已经凝聚胶体硅从瓶内脱落进入盐水金属离子溶入盐水不洁器皿离心过度抗人球蛋白务清不标准（上述为直接法及间接法适用）第四十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六被测血清中可能含有冷自身抗体败血症病人或受细菌污染的血标本极度的网积红细胞增多症（上述仅直接法适用）抗人球蛋白法假阳性的原因第四十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六自身免疫性溶血性贫血第四十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六自身免疫性溶血性贫血的类型与冷抗体有关的自身免疫性溶血性贫血（冷凝集素综合症、PCH）与温暖抗体有关的自身免疫性溶血性贫血第四十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六概念自身免疫性溶血性贫血（AIHA）是一组B淋巴细胞功能异常亢进，产生自身红细胞抗体，使红细胞破坏增加引起的贫血。第四十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六现象1红细胞的破坏能被骨髓红细胞生成所代偿，临床上不发生贫血，即仅有自身免疫性溶血（AIH），也有人仅可测及抗自身红细胞抗体（AI），而无明显溶血第四十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六现象2当机体既产生抗自身红细胞抗体，又产生抗自身血小板抗体（甚至白细胞抗体），进而同时出现贫血和血小板减少（或全细胞减少）时，称之为Evans。第五十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类1温抗体型AIHA

温抗体型AIHA多为慢性起病，易于反复实验室检查：a.血片上可见多量球形红细胞及数量不等的幼红细胞及少量铁粒幼细胞。偶见红细胞被吞噬现象。网织红细胞增多。b．骨髓呈幼红细胞增生象，偶见红细胞系统轻度巨幼样变。c．再生障碍性贫血危象时，网织红细胞极度减少，骨髓象呈再生障碍表现，血象呈全血细胞减少。d．抗人球蛋白试验：直接试验阳性，主要为IgG和Ｃ３型；间接试验可为阳性或阴性。第五十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类1温抗体型AIHA诊断依据：a.已近4个月内无输血或特殊药物服用史，如直接Ｃoomb’S试验阳性，结合临床表现和实验室检查，可考虑为温抗体自身免疫性溶血性贫血；b.如Ｃoomb’S试验阴性，但临床表现较符合，肾上腺皮质激素或切脾有效，除外其他溶血性贫血（特别是遗传性球形红细胞增多症），可诊断为Ｃoomb’S阴性的自身免疫性溶血性贫血。第五十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类1温抗体型AIHAAIHA自身抗体进行免疫学分型：复合型：IgG+C3；IgG+IgM+C3单一型：IgG；IgM；C3第五十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类1温抗体型AIHA特点红细胞上结合的Ig通常是IgG，少数为IgM，个案报告有IgA致敏红细胞复合型中的均伴有IgG，伴有IgM的较少，伴有IgA的更少，无单纯IgM或IgA型复合型较单纯型为重，IgG+IgM+C3型最重，C3型最轻第五十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类1温抗体型AIHA输血治疗原则是：可以不输尽量不要输，如一定要输血，则以输注洗涤红细胞为主。第五十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类2冷抗体型AIHA冷抗体AIHA亦称冷溶血综合征,自身抗体结合红细胞发生溶血的温度多为<30℃,少数<32℃，于0～4℃作用最强,直接凝集红细胞。补体系统对红细胞损伤起重要作用,引起血管内溶血多见。第五十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类2冷抗体型AIHA冷抗体有二种:冷凝集素和冷溶血素。冷凝集素综合征（CAS）也称冷血凝素疾病（CHD），是伴有冷反应性自身抗体的自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的最常见的一种类型，约占免疫性溶血性贫血的16~32%第五十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类2冷抗体型AIHA发病分急性及慢性：急性的AIHA，一时性的冷抗体综合征常和肺炎支原体感染有关，在少数情况下和传染性单核细胞增多症有关。慢性冷凝集素综合征的病人常常是老年人，有轻度或中等度的慢性溶血性贫血。天气冷时常发生雷诺氏现象和血红蛋白尿第五十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类2冷抗体型AIHA冷反应性自身抗体的自身免疫性溶血性贫血的溶血原因：外周循环的温度低于32℃时，IgM冷自身凝集素和病人的红细胞发生反应。IgM抗体及其抗原的反应使补体致敏红细胞，特别是C3和C4成分。当细胞回到积蓄循环较温暖的中央部分时，IgM冷抗体从细胞表面上放散出来，而将补体致敏在红细胞上,这样溶血会很快发生。第五十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类2冷抗体型AIHA冷凝集素病（CAS）实验室检查：a.慢性轻至中度贫血，周围血中无红细胞畸形及大小不一，可有轻度高胆红素血症，反复发作有含铁血黄素尿。b.冷凝集素试验阳性，4℃效价可高至1：1000甚至1：

64000，在30℃时，在白蛋白或生理盐水内，如凝集素效价仍然较高，有诊断意义。c．抗人球蛋白试验阳性，几乎均为Ｃ３型。冷凝集素阳性效价较高。结合临床表现和其他实验室检查，可诊断为冷凝集素综合征。第六十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类2冷抗体型AIHA冷溶血素实验室检查a、从发作对贫血严重，进展迅速，周围血液有红细胞大小不一及畸形，并有球形细胞、红细胞碎片及嗜碱性点彩细胞及幼红细胞出现。B、反复发作有含铁血黄素尿。C、冷热溶血试验（DonathLandsteiner）阳性。D、抗人球蛋白试验阳性，为Ｃ３型。第六十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类2冷抗体型AIHA输血者,血液宜经37℃加温器再输入,否则在保温情况下缓慢输入。第六十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA药物性溶血性贫血按发病机制可分药物氧化性溶血性贫血（DOHA）和药物免疫性溶血性贫血（DIHA）第六十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHADOHA主要常见于遗传性红细胞酶缺陷和血红蛋白病人，DIHA一般发生相对较缓，贫血症状轻，但奎宁丁、福阿亭或非那西丁引起的可较重第六十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHADIHA可分自身抗体型（又称甲基多型），使用甲基多巴诱发体内产生自身的红细胞抗体，DAT阳性较多。第六十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA本病是因为药物进入机体后，由于免疫等因素从而引起红细胞大量破坏，临床上出现贫血、黄疸、酱油色尿等溶血表现。第六十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA按发病机制可分为四类半抗原/药物吸收机制(青霉素型)：药物与红细胞膜蛋白牢固结合具有抗原性诱发抗体。经典范例为用大量青霉素(>1000万U/d)。用青霉素产生抗青霉素的青霉噻唑酰决定簇(BPO)的IgM抗体,不引起溶血;抗BPO的IgG抗体可溶血。IgG抗体结合到已与红细胞膜蛋白结合的青霉素分子上可使DAT阳性,约3%发生溶血。第六十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA半抗原/药物吸收机制(青霉素型)：用药7～10天后发病,停药后数日至2周恢复,但DAT阳性可维持数周。无其他青霉素过敏现象。少数于用药后,补体结合于红细胞加上IgG吸附,使DAT抗IgG和C3阳性。致敏红细胞主要在脾被巨噬细胞破坏。除青霉素外,以同样机制溶血的药物还有半合成青霉素、头孢霉素族、四环素、卡溴脲和甲苯磺丁脲等。第六十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA新抗原型或药物抗体靶细胞三元复合物型(奎尼丁波芬型)药物与药物抗体(多为IgG或IgM)在血循中形成免疫复合物附于红细胞(尤有或Rh抗原者)上激活补体破坏红细胞。抗体对药物和红细胞形成的新抗原起作用。三元复合物结合松散,抗体常自红细胞膜上脱落,游离于血中再与其他红细胞膜结合。少量药物即可于数日内引发溶血。第六十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA主要由补体介导故为血管内溶血。发病突然、严重,常伴血红蛋白尿,多见球形细胞,易有肾功能衰竭。DAT抗C3阳性,IgG或IgMDAT很少阳性,IAT阴性。除损伤红细胞,也可损及血小板和粒细胞。除奎尼丁、波芬外,还有奎宁、氯磺丙脲、利福平、安他唑啉、硫喷妥钠、托美丁、丙磺舒、头孢霉素、乙烯雌酚、二性霉素B、多虑平、双氯芬酸钠等药物。第七十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA自身免疫机制(α-甲基多巴型)药物引致自身抗体与自身或同质的红细胞在无药物下反应。发病缓慢,用药后至少1个月后发病。如α-甲基多巴,用药后3～6月或更长时间8%～36%DAT阳性,引起临床溶血者仅0.8%。抗体为IgG。第七十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA可在无药物时发病。以前用过药物,DAT阳性者再用此药发病也慢。如不了解患者服药史,常误为特发性温抗体AIHA。停药后DAT可持续阳性数周至数月。IAT阳性。有关药物有:α-甲基多巴、左旋多巴、头孢霉素、托美丁、诺米芬新、替尼泊甙、甲灭酸、普鲁卡因酰胺、双氯芬酸钠等。第七十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA机制未明者下列药物能引起免疫损伤红细胞,但机制不明,有非那西丁、氯丙嗪、马法兰、异烟肼、链霉素、苏灵大、萘啶酸、氨苯蝶啶、布洛芬、扑热息痛、红霉素、氟脲嘧啶、奥美拉唑等。第七十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA实验诊断：凡AIHA,均应仔细询问服药史,有肯定服用可疑药物,停药后溶血迅速消失,可确立诊断。另外IAT在诊断药物相关性免疫性溶贫有一定价值。以青素型引起为例可检测血清中的青霉素抗体及或加药物结合在红细胞膜上后,IAT阳性;自身免疫型无论加与不加药物IAT均阳性;新抗原型者,必须加药后,IAT即阳性。可进行诊断。第七十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类3药物诱发AIHA输血原则同温抗体型AIHA。第七十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类4：温冷抗体免疫性溶血性贫血(DIHA)红细胞自身抗体具有最佳反应温度，根据这一特点可将AIHA分为温抗体型（最适反应温度为37℃）、冷抗体型（最适反应温度为0℃～4℃）及温冷抗体混合型。依据其抗体类型不同又可将冷抗体型AIHA分为阵发性冷性血红蛋白尿（含双向IgG自身抗体）和冷凝集素综合征（coldagglutininsyndrome,CAS）（自身抗体多为IgM,极少数为IgA、IgG）。正常人血清中均有低滴度冷凝集素（coldagglutinin,CA)存在，属于IgM型，对Ii血型抗原有特异性，滴度不超过1：32，最适反应温度为0℃～4℃第七十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类4：温冷抗体免疫性溶血性贫血(DIHA)病理学上的冷凝集素即异常CA特点是：①滴度高，0℃～4℃时滴度可达64000。原发性CAS和继发于骨髓增殖障碍的CAS的CA滴度通常高于继发于感染的CAS的CA滴度。②宽热幅，37℃时仍可检测到红细胞凝集。③部分CA除识别Ii抗原外，还能特异识别Pr、Cd、Sa、FL、Vo、Lud抗原，抗Pr冷凝集素与异常高滴度、宽热幅冷凝集素相关。④除极少数为IgA、IgG，多数为IgM抗体。第七十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类4：温冷抗体免疫性溶血性贫血(DIHA)实验室检查A、从发作对贫血严重，进展迅速，周围血液有红细胞大小不一及畸形，并有球形细胞、红细胞碎片及嗜碱性点彩细胞及幼红细胞出现。B、反复发作有含铁血黄素尿。C、冷热溶血试验（DonathLandsteiner）阳性。D、抗人球蛋白试验阳性，为IgG+Ｃ３型。E、4℃、22℃、37℃效价递减。第七十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六种类4：温冷抗体免疫性溶血性贫血(DIHA)输血原则：同温抗体免疫性溶血性贫血第七十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六产前产后的免疫血清学检查第八十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六产前的免疫血清学检查的项目夫妻双方的ABO血型正反定型夫妻双方的Rh血型鉴定女方的抗体筛选女方的IGg抗-A或抗-B效价测定第八十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六类型ABO新生儿溶血病(ABO-HDN)Rh新生儿溶血病(Rh-HDN)其它新生儿溶血病抗-C引起的HDN

抗-E引起的HDNKELL和其它IGg抗体引起HDN第八十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六HDN的原理免疫的IGg抗体通过胎盘屏障进入胎儿体内与相应的红细胞结合引起HDN第八十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六产后胎儿的免疫血清学检查的项目ABO血型正定型Rh血型鉴定直接抗人球蛋白试验游离抗体检查或鉴定红细胞放散液的抗体检查或鉴定第八十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六ABO-HDN结果判断直抗试验游离试验释放试验结论

阴性阴性阴性不能证实

阳性阴性阴性可疑为HDN阴性阳性阴性可疑为HDN阴性阴性阳性

可以证实为ABOHDN

阳性阴性阳性

可以证实为ABOHDN

阳性阳性阴性可以证实为ABOHDN阴性阳性阳性可以证实为ABOHDN

阳性阳性阳性可以证实为ABOHDN第八十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板血型与输血第八十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗原共有抗原HLA抗原ABH抗原其它抗原特异性抗原（HPA抗原）第八十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板具有HLA-Ⅰ类抗原（HLA-A、HLA-B抗原和少量HLA-C抗原），无HLA-Ⅱ类抗原。故输注血小板要比器官移植所需配型简单。HLA-Ⅰ类分子为血小板的固有蛋白，少量从血浆中吸附。HLA抗原第八十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六部分为血小板的固有蛋白，另一部分从血浆中吸附。血小板上的ABH抗原个体之间表达不同，5%-10%的非O型个体为A抗原或B抗原的高表达者。故血小板输血应同型输注；抗体检测应采用O型血小板。ABH抗原第八十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六Ii,Lea,Leb,P2其它共有抗原第九十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细胞。1990年国际输血协会血小板免疫学工作组提出了HPA命名，以发现的时间顺序排列：HPA-1、HPA-2、HPA-3等系统，每一系统中高频率基因表达的抗原以a表示，低频率基因表达的抗原以b表示，新发现的系统以w表示。血小板特异性抗原（HPA抗原）第九十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六已确定了24个HPA，其中12个抗原为双等位基因表达（HPA-1,-2,-3,-4，-5和-15），且呈共显性表达模式。单核苷酸多态性（SNP）:24个HPA中有22个已搞清楚基因背景，其中21个HPA的多态性型是由一个氨基酸置换所致，而这又是由编码血小板膜糖蛋白（GP）基因的一个核苷酸的不同所致。HPA-14bw不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发生在1909-1911delAAG。血小板特异性抗原（HPA抗原）第九十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六系统抗原原名糖蛋白CD核苷酸多态性HPA-1HPA-1aZwa，plAlGplllaCD61167THPA-1bZwb，plA2167CHPA-2HPA-2aK0bGplbαCD42b482CHPA-2bK0a，Siba482THPA-3HPA-3aBaka，LekaGpllbCD412621THPA-3bBakb2621GHPA-4HPA-4aYukb，PenaGplllaCD61506GHPA-4bYuka，penb506AHPA-5HPA-5aBrb，ZavbGplaCD49b1600GHPA-5bBra，Zava，Hca1600AHPA-15HPA-15aGovbCD109CD1092108CHPA-15bGova2108AHPA-6bwCaa，TuaGplllaCD611544G>AHPA-7bwMoaGplllaCD611297C>GHPA-8bwSraGplllaCD611984C>THPA-9bwMaxaGpllbCD412602G>AHPA-10bwLaaGplllaCD61263G>AHPA-11bwGroaGplllaCD611976G>AHPA-12bw1yaGplbβCD42c119G>AHPA-13bwSitaGplaCD49b2483C>THPA-14bwOeaGplllaCD611909-1911delAAGHPA-16bwHPA-17bwDuvaVaaGplllaGplllaCD61CD61497C>T622C>T血小板特异性抗原第九十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六GPⅣ(CD36)88KD分布:血小板、单核细胞红细胞、脾细胞、表皮及内皮细胞功能：参与止血、凝血、炎症、脂类代谢、疟疾感染等第九十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六TypeI:血小板和单核细胞均缺失CD36TypeII:仅血小板缺失CD36缺失频率：日本、韩国：3-11%印尼、台湾：4%美国黑人：2.4%Sub-Saharan：7.8%高加索人：0.06%GPⅣ(CD36)第九十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六有20多种基因突变可导致I型CD36缺失。主要有如下几种形式突变：（1）外显子4的第478个碱基处发生C→T取代（C478T）；（2）539碱基位置AC发生消除（539delAC）；（3）外显子10的1159碱基位置插入A；（4）日本人为839-841碱基位置GAG发生消除而插入AAAAC碱基；（5）肯尼亚人和冈比亚人为T1264G。CD36缺失II型的基因背景尚未完全弄清楚。CD36缺失的个体通过输血或妊娠有产生抗CD36抗体的风险。CD36缺失型第九十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板血型与临床血小板抗原同种异体抗原

HLA-I,HPA,ABH同种抗原

GPⅡb/Ⅲa,CD36自身抗原

GPⅡb/Ⅲa,GPⅠb/Ⅸ药物依赖性抗原肝素、奎宁等非特异性抗原血小板免疫性疾病血小板输注无效症新生儿血小板减少症输血后紫癜自身免疫性血小板减少症药物引起的血小板减少症移植相关的血小板减少症临床病症淤点淤斑流产（颅内）出血死亡第九十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板血型与临床---自身抗原第九十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板血型与临床---同种异体抗原输血妊娠骨髓移植致敏血小板并引起破坏抗供者血小板抗体抗父亲血小板抗体抗供者血小板抗体出血/紫癜流产/死胎移植排斥血小板第九十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板血型与临床---同种异体抗原直接途径患者CD4+T细胞上T细胞受体（TCR）直接与外源抗原提呈细胞（APC）表面的MHCⅡ类分子识别，并与其提呈的血小板抗原反应，从而启动机体免疫应答。间接途径外源血小板抗原被患者抗原提呈细胞加工后，被患者CD4+T细胞上的TCR识别而启动免疫应答。在这两种途径中，CD4+T细胞活化后分泌的细胞因子如白介素-2和干扰素家族，可刺激初始B细胞发育分化为浆细胞并分泌特异性抗体。最终结果是血小板抗体Fab段识别、结合具有相应抗原的血小板（称为“致敏”），抗体Fc段与巨噬细胞上Fc受体结合并引起血小板被巨噬细胞吞噬破坏，该过程多数发生在患者脾脏内。第一百页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六GPⅡb/Ⅲa

格兰茨曼血小板功能不全病（GLANZMANN‘STHROMBASTHENIA）CD36

血小板输注无效症等

血小板血型与临床---同种抗原第一百零一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六Pl

血小板减少

出血免疫性血小板减少症患者药物依赖性抗体药物？外源血小板同种/同种异体抗体Pl患者血小板药物患者血小板Pl外源血小板血小板被清除自身抗体第一百零二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板输血必要性

轻度血小板减少症患者

血小板计数<50×109/L，会出现凝血障碍，导致出血不止，特别对于严重失血患者、产妇等。严重血小板减少症患者

血小板计数<10×109/L，会出现自发出血、颅内出血甚至死亡，特别对于白血病、肿瘤化疗、骨髓异常综合症及ITP患者等。第一百零三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板输血是提高患者（特别是肿瘤和移植患者）血小板计数，防止出血最快速、有效的方法和手段。然而，血小板输血并不是每次都能达到满意效果，特别是反复多次随机输注血小板的患者，体内极易产生血小板抗体，从而破坏输入的血小板并引起输注无效。文献报道约有20％~50％白血病患者，80％的再生障碍性贫血患者长期随机输注血小板后会出现输注无效状态，导致患者因血小板计数低下而自发出血或出血不止，甚至死亡。我国目前大多数临床单位采用随机输注血小板，导致血小板输注无效频繁发生。后果：患者病情得不到改善，病危甚至死亡；浪费财力、物力；浪费宝贵的血小板资源；不利于血站及输血科业务水平的提高。血小板输血？第一百零四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板输注无效症血小板输注无效（PlateletRefractorinessPTR）尚未有统一的判断标准。成功输注：1小时PPR>30%24小时PPR>20%（PPR：血小板回收率）PPR=血小板增加数×病人体重（Kg）×血容量输注血小板计数×体积（ml）1小时CCI>7.5×109/L24小时CCI>4.5×109/L（CCI：血小板纠正计数指数）CCI=输血后血小板增加数×体表面积（m2）输注血小板数u/m2第一百零五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六非免疫性血小板本身质量。患者情况：发热感染、脾肿大、弥散性血管内凝血（DIC）及药物作用。免疫性同种异体免疫作用：HLA-Ⅰ类抗体（80%）、HPA抗体、ABO血型抗体。自身免疫作用：ITP患者。药物免疫作用：肝素、奎宁、头孢菌素、苯巴比妥、消炎痛、安替比林等血小板输注无效的原因第一百零六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板输注无效的预防

输注质量可靠的ABO同型血小板制剂减少患者接触同种异体血小板抗原的机会去除白细胞的血小板制剂紫外线照射的血小板制剂去除HLA抗原的血小板制剂第一百零七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六供者选择选择与患者ABO血型相同的供者血小板。RhD阴性患者应当尽可能输注RhD阴性供者血小板。选择与患者HLA相容的供者血小板

HLA配合试验（HLA-matching）抗体特异性预测试验（ASP）交叉配型试验（crossmatching）静脉注射免疫球蛋白（IVIG）血浆置换免疫抑制剂抗纤溶药物

血小板输注无效的处理

第一百零八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六胎母同种异体免疫血小板减少症胎母同种异体免疫血小板减少症致病机理与新生儿溶血病（HDN）相似，前者是由胎儿父母血小板抗原不合引起的血小板减少症，后者为红细胞抗原不合引起的溶血性疾病。由于胎儿遗传自父亲的血小板抗原刺激母体产生IgG型的抗血小板抗体，该抗体能通过胎盘进入胎儿体内并与具有相应抗原的血小板结合，此致敏血小板在胎儿的血液循环中被清除而使得胎儿血小板减少，出现瘀点和瘀斑，其严重者会导致神经系统损伤（占已报道病例的20%）、颅内出血（15%-20%）甚至死亡10%）。因多数病例在出生后才得以诊断，故此病也称作新生儿同种异体免疫血小板减少症。初次妊娠妇女即可发生FMAIT，其发病率大约为1/800-1500。第一百零九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六第一百一十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六绝大多数为HPA抗体引起高加索人：抗HPA-1a（78%）抗HPA-5b（19%）其余（3%）亚洲人：主要与抗HPA-4b和抗HPA-5b相关，2者均能引发中等严重程度疾病抗-HLA-B27可引发FMAIT，其准确机制尚不清楚。ABO血型系统不相容也会导致FMAIT。FMAIT的发病原因第一百一十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六FMAIT患儿病情变化较大，具有自限性，常在出生后2-3周恢复。轻度血小板减少患儿有时没有任何临床症状。病情较重患儿临床表现为皮肤、体内外黏膜出血，出现紫癜、瘀点或瘀斑。严重患儿可能发生颅内出血，占15%-20%。与FMAIT相关的ICH80%发生在子宫内，其中14%发生在妊娠20周前，28%发生在妊娠30周前。FAMIT的临床表现第一百一十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六母体血清抗HPA抗体检测，然而母体抗体水平到预产期时逐渐下降，约有30%的病例抗体阴性。父母双亲的HPA基因检测，在高加索地区采取对其HPA-1和HPA-5基因检测，而在亚洲地区应考虑进行HPA-4和HPA-5基因检测。父母双亲交叉配型实验，将母体血清与父亲血小板进行交叉配型实验，即使不能确切知道不相合的抗原，但这种方法也能发现母体是否存在血小板同种异体免疫反应。FMAIT早期诊断与筛查第一百一十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板相容性检测采取预防和治疗措施避免流产、出血等减少血小板输注无效避免紫癜、出血和死亡血小板相容性检测抗原定型抗体检测交叉配型建立血小板供者库筛选基因型相容的供者避免血小板抗体的产生诊断血小板免疫性疾病筛查血小板相容性供者第一百一十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗原定型血清学定型即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原缺点：特异性抗体来源困难

---人血清中血小板抗体通常为多特异性

---单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有

HPA-1a单抗，无其它HPA单抗。基因定型限制性片段长度多态性分析（RFLP）序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO)序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)第一百一十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗原定型（PCR-SSP）HPA-1HPA-2HPA-3HPA-4HPA-5HPA-15abababababab阳性对照条带等位基因条带1bb2ab3bb4aa5aa15aa用途：（1）健康人群HPA基因分型，建立已知HPA基因型的血小板献血员库。（2）检测受者HPA基因型，以便从血小板献血员库中寻找与其HPA基因型相匹配的血小板供者。（3）检测患者HPA基因型，辅助临床胎儿/新生儿免疫性血小板减少症、输血后紫癜及血小板输注无效症等疾病病因诊断。（4）对特定区域或种族人群HPA基因分型，可为人类遗传学研究提供相关资料和证据。第一百一十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗体检测方法功能性试验酶标法荧光法固相凝集法应用范围抗体检测√√√√交叉配型√√√性能灵敏度低高极高高特异性不好好一般较好反应时间长＞2h＞2h＜1h所用仪器不定酶标仪荧光显微镜或流式细胞仪平板离心机16th版AABB评价未提及特异性鉴定的可靠方法敏感性高特异性不足血小板交叉配型应用最为广泛的方法方法指标第一百一十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六单克隆抗体固着血小板抗原分析（MAIPA）第一百一十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六单克隆抗体固着血小板抗原分析

（MAIPA）第一百一十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六优点：特异性检测HPA抗体，使得人们在近几年发现了许多新的血小板特异性抗原。缺点：若待检血清中抗血小板抗体与鼠单克隆抗体识别的是同一抗原决定簇，它们将竞争性结合抗原位点而易出现假阴性反应。需要将血小板裂解，对血小板糖蛋白特别是HPA-3a和HPA-15的抗原结构破坏较大，使其抗原性大大减弱，很容易造成漏检。该方法操作时间长（约8h），技术要求高，各个实验室的检测结果差异较大等不足也限制了其在临床上的应用。单克隆抗体固着血小板抗原分析（MAIPA）第一百二十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六修饰的抗原捕获ELISA分析

（MACE）血小板GPⅡb/ⅢaGPⅡb/Ⅲa裂解人抗血小板GPⅡb/Ⅲa抗体AP-抗人IgG第一百二十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六优点：可定量检测血清中的血小板特异性抗体。缺点：需要将人血清抗体致敏的血小板裂解，裂解后的血小板膜糖蛋白构象表位会发生变化而不能与微孔中的鼠抗血小板糖蛋白单克隆抗体结合，因此导致其抗体检出率降低。修饰的抗原捕获ELISA分析

（MACE）第一百二十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗体检测方法—荧光法A.B.C.D.A：血小板B：血清中血小板抗体C：荧光标记抗人IgG抗体D：荧光显微镜/流式细胞仪第一百二十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗体检测方法-固相凝集法抗人IgG第一百二十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗体筛检，包括HLA抗体、HPA抗体及其它血小板反应性抗体。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。血小板交叉配型，为患者筛选相容性的血小板或血小板供者，避免血小板输注无效症的发生。患者自身抗体检测，包括血小板结合抗体和血清中游离抗体。检测血小板结合抗体可将患者血小板平铺在反应孔后，直接加入抗人IgG和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗体可通过患者自身血小板和血清反应来检测。用途：血小板抗体检测方法-固相凝集法第一百二十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗体检测方法-固相凝集法血小板谱细胞（三人份O型混合血小板）反应板（已包被血小板单抗）血小板单层阳性反应阴性反应患者血清/血浆抗人IgG指示红细胞（人IgG致敏红细胞）50g,5min离心洗涤3次50μl/孔洗涤5次水浴30min阳性阴性50μl/孔各50μl/孔200g,5min离心200g,5min离心（一）同种/同种异体抗体检测第一百二十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗体检测方法-固相凝集法抗原：三人份等比例混合O型血小板悬液：1.将有效期内机采血小板用生理盐水进行5-10倍稀释后混合；2.采血8小时内EDTA/枸橼酸钠抗凝全血经200g离心10分钟，取上层2/3PRP混合。3.冻干血小板用生理盐水稀释后直接使用。意义：检测血小板减少患者，妊娠、移植及待输血等患者体内是否存在血小板抗体。若抗体阳性，应坚持进行交叉配型以输注相容或相合的血小板，提高输血效果。第一百二十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗体检测方法-固相凝集法抗原：患者自身血小板(因ITP患者体内血小板数量较低，因此试验前需将调节血小板浓度至50-100×109/L）。意义：自身免疫性血小板减少症(ITP)是一类由自身抗体导致血小板破坏增多的出血性疾病。多数学者认为与体液免疫有关，机体对血小板相关抗原发生免疫反应，产生抗血小板抗体，抗体致敏的血小板由单核巨噬细胞系统迅速清除而发病，且骨髓巨核细胞有成熟障碍。ITP的诊断目前仍依赖临床表现和骨髓检查，并以排除血小板减少的其它原因为基础，因此，急需特异性强的实验室诊断方法和诊断指标。检测血小板自身抗体已成为ITP诊断的一个重要指标。（二）自身抗体检测第一百二十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗体检测方法-固相凝集法直接法：自身结合抗体检测患者血小板反应板（已包被血小板单抗）50g,5min离心洗涤3次50μl/孔阳性反应抗人IgG指示红细胞（人IgG致敏红细胞）阳性阴性各50μl/孔200g,5min离心200g,5min离心阴性反应第一百二十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗体检测方法-固相凝集法间接法：自身游离抗体检测患者血小板反应板（已包被血小板单抗）血小板单层阳性反应阴性反应患者血清/血浆抗人IgG指示红细胞（人IgG致敏红细胞）50g,5min离心洗涤3次50μl/孔洗涤5次水浴30min阳性阴性50μl/孔各50μl/孔200g,5min离心200g,5min离心第一百三十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板谱细胞（三人份O型混合血小板）反应板（已包被血小板单抗）血小板单层阳性反应阴性反应患者血清/血浆抗人IgG指示红细胞（人IgG致敏红细胞）50g,5min离心洗涤3次50μl/孔洗涤5次水浴30min阳性阴性50μl/孔各50μl/孔200g,5min离心200g,5min离心药物（终浓度100U/ml)血小板抗体检测方法-固相凝集法（三）药物依赖性抗体检测注：洗涤液中同样需加入100U/ml的待检药物。第一百三十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六抗原：三人份等比例混合O型血小板悬液：1.将有效期内机采血小板用生理盐水进行5-10倍稀释后混合；2.采血8小时内EDTA/枸橼酸钠抗凝全血经200g离心10分钟，取上层2/3PRP混合。3.冻干血小板用生理盐水稀释后直接使用。意义：根据患者服用/输注的药物不同而在试验中加入相应的药物，以确定患者体内是否已产生药物依赖性血小板抗体，辅助临床诊断以及采取适当的护理措施。血小板抗体检测方法-固相凝集法第一百三十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板抗体检测方法-固相凝集法（四）交叉配型供血者血小板反应板（已包被血小板单抗）血小板单层阳性反应受血者血清/血浆抗人IgG指示红细胞（人IgG致敏红细胞）50g,5min离心洗涤3次50μl/孔洗涤5次水浴30min阳性阴性50μl/孔各50μl/孔200g,5min离心200g,5min离心阴性反应第一百三十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六抗原：与受者ABO同型的供者血小板悬液：1.将有效期内机采血小板用生理盐水进行5-10倍稀释；2.采血8小时内EDTA/枸橼酸钠抗凝全血经200g离心10分钟，取上层2/3PRP。意义：为血小板输血患者提供相容性血小板，减少输注无效症的发生，为社会节约宝贵的血小板资源。血小板抗体检测方法-固相凝集法第一百三十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六200g(1300rpm)离心5min后观察结果取出反应板，做好标记

加入血小板悬液50μl/孔，振荡混匀

50g(650rpm)离心5min滴加洗液洗涤3次加入LISS100μl

/孔，待检样本50μl

/孔，混匀

37℃水浴孵育30min或气浴35min滴加洗液洗涤5次加入抗人IgG和指示红细胞各50μl

/孔，振荡混匀抗体检测：三人份O型血小板。交叉配型：献血者血小板EDTA或枸橼酸钠抗凝全血：200g离心10min机采血小板：生理盐水5-10倍稀释。血清或血浆样本，充分离心后检测。格局结果－±1＋2＋3＋4＋血小板抗体检测方法-固相凝集法第一百三十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六1.血小板分散均匀，未发生聚集是本实验成功的关键之一。陈旧或已发生聚集的血小板容易导致假阳性结果，特别注意不能将血小板放置于4℃冰箱中。血小板悬液的浓度不合适会影响试验结果，浓度过低（小于10×109/l）或太高（高于350×109/l）都会导致错误结果。

2.待检的血清或血浆样本检测前应充分离心以去除颗粒及聚集物，否则可能会出现假阳性结果。肝素抗凝样本不能用于本实验。待检样本脂类含量高或微生物污染会造成假阳性；纤维蛋白原未充分析出的血清样本会导致错误结果。

3.洗涤过程中须滴加洗液，水流剧烈冲击会造成血小板单层的破坏而导致错误结果。

4.献血者与受血者ABO血型不相容或自身IgG抗体结合到供血者血小板上易引起假阳性结果。5.离心力和离心转数的换算公式为：Rcf(g)=1.119×105×r×(rpm)2(r单位为cm)。离心时间及速度不合适，血小板和微孔板结合差，可能会减少最终实验结果的敏感性和反应强度。注意事项：血小板抗体检测方法-固相凝集法第一百三十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六优点：不仅快速简便，结果直观可靠，而且其敏感性和特异性和免疫荧光法相一致，同时，采用完整血小板作为抗原进行检测特别适合于血小板交叉配型。应用冻干型血小板进行抗体筛检，方便临床应用，且易于标准化。血清或血浆样本均可，实验无需特殊仪器且1小时内完成检测，适合于快速血小板抗体检测和交叉配型。血小板抗体检测方法-固相凝集法第一百三十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六HPA-1HPA-2HPA-3HPA-4HPA-5HPA-15C11aa2aa3aa4ab5aa15bbC21ab2aa3aa4aa5ab15aaC31aa2ab3bb4aa5aa15aa冻干型血小板抗体筛检细胞通过间接ELISA法采用特异性单克隆抗体检测血小板抗体筛检细胞冻干前后糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、Ⅰa/Ⅱa、Ⅰb/Ⅸ、Ⅳ的抗原性变化是否显著，同时用无关单抗作为对照。以P/N值（特异性糖蛋白单抗检测值/无关单抗检测值）作为衡量抗原性的指标绘制柱形图，结果表明血小板冻干前后上述糖蛋白抗原性差异无统计学意义（P>0.05）。第一百三十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六HPA-1HPA-2HPA-3HPA-4HPA-5HPA-15ⅠaaaaaaaaaaaaⅡaaaaaaabaabbⅢaaabbbaaaaaa冻干型血小板抗体鉴定谱细胞第一百三十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六对844例贫血、白血病、血小板减少及肿瘤等疾病患者进行血小板抗体检测。其中有效病例766例，其余78例患者病例不祥。检测结果统计如下：病例数男性女性平均年龄血小板抗体阳性数抗体阳性率贫血（包括再障和溶血性贫血）30314016345.955116.8%白血病99524741.602525.25%血小板减少27111642.30933.33%肿瘤60213956.3311.67%出血90424852.3466.67%骨髓纤维化及骨髓异常综合症1912755.74736.84%其它病症168798948.12137.74%总计76635740947.5411214.62%临床应用：血小板抗体检测方法-固相凝集法第一百四十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板多抗血小板CD36单抗酶标抗鼠IgG底物离心洗涤孵育洗涤孵育洗涤显色CD36抗原检测（酶联免疫法）第一个检测血小板CD36抗原的酶免疫试剂操作简便快速高通量，易于自动化亚洲人（3-11%）缺失CD36抗原CD36抗体血小板输注无效新生儿血小板减少第一百四十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六注：4F9和4G2为两株抗人血小板CD36单克隆抗体。Donor1~Donor6为中国人血小板。第一百四十二页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六问题？1.对血小板输注无效的认识？对于不相合的红细胞输注，人们肯定不能容忍，而对于不相合的血小板输注，人们却认为是常规。事实上，血小板输注无效，往往也伴随着死亡—出血而亡。2.中国人群FMAIT致病抗原？3.中国人群CD36抗原的缺失及其临床意义？第一百四十三页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板输血医学的现状与展望血小板输血免疫血液学基础血小板特异性同种抗原研究进展血小板血型的临床意义血小板临床输注研究进展展望第一百四十四页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六国内外成份输血概况美国(%)日本(%)上海(%)全血0.51.882.03红细胞悬液42.8929.2637.01血小板浓缩液39.9640.7726.13新鲜冷冻血浆11.9628.0936.02冷沉淀4.694.11白细胞0.61第一百四十五页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板输血

血小板输血近十余年来有了长足的发展，输血量显著增加，原因：临床医师对血小板输血适应症，充分认识化学疗法，免疫抑制疗法成份制剂质量(分离法，浓缩法提高)的保证血小板单采(血液成份分离机)术的普遍应用第一百四十六页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板输注适应症血小板减少机制产生不足破坏亢进抗体消耗脾脏储存量增大血小板功能异常先天性血小板功能异常后天性血小板功能异常第一百四十七页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板输血适应症白血病再障特发性血小板减少性紫癜症(ITP)弥漫性血管内溶血(DIC)癌症肿瘤病人作化疗放疗法时需要大量输血的血小板减少症脾肿大导致血小板减少症(血小板储存量增加)血小板减少症，外科手术前血小板输血血小板功能异常先天性(血小板无力症)后天性(尿毒症，阿斯匹林服用)第一百四十八页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六输注白细胞的危害作用同种抗体(抗HLA)产生非溶血性输血副作用(发热、肺症状)血小板输血无效状态移植成功率的低下(骨髓移植)GVHD(Tcell)产生白细胞病毒传播CMV、EBV、HTLV-1、HIV机制不明抗癌免疫功能的抑制第一百四十九页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六输注白细胞的危害作用

HLA抗原与免疫调节的改变明显相关肿瘤复发，术后感染增加慢性病毒感染迅速进展同种输血刺激了受体免疫系统MHC(HLA)不同迫使免疫系统发生TH2类反应(体液免疫)与其相反，TH1反应(细胞免疫)则降低由于巨噬细胞和NK细胞功能降低，免疫系统对来自细菌、病毒和肿瘤细胞免疫的防御功能受到了损伤第一百五十页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板的制备离心分离一般85~90%得率国外450mL全血5.5*1010国内200mL全血2.5*1010上海200mL全血1.6*1010血液成份分离机单采血小板血小板得率高白细胞污染少减少同种免疫反应第一百五十一页，共一百九十三页，编辑于2023年，星期六血小板供体的选择和单采供体：血小板计数>15*1010/L健康献血员血小板单采--保质保量质量：交叉配合试验阴性数量：分离机单采5~6循环1.5~2*1010/L第一百五十二页，共